《核酸检测实验室的规范化管理讲稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《核酸检测实验室的规范化管理讲稿.ppt（20页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、关于核酸检测实验室的规范化管理第一页，讲稿共二十页哦一、规范化设置及管理一、规范化设置及管理第二页，讲稿共二十页哦 (一一一一)临床基因扩增检验实验室区域设置原则临床基因扩增检验实验室区域设置原则临床基因扩增检验实验室区域设置原则临床基因扩增检验实验室区域设置原则 1 1 1 1临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域：临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域：临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域：临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域：试剂贮存和准备区；标本制备区；试剂贮存和准备区；标本制备区；试剂贮存和准备区；标本制备区；试剂贮存和准备
2、区；标本制备区；扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区。扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区。扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区。扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区。（如使用全自动分析仪，区域可适当合并）（如使用全自动分析仪，区域可适当合并）（如使用全自动分析仪，区域可适当合并）（如使用全自动分析仪，区域可适当合并）2 2 2 2各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设
3、备、物品混用。3 3 3 3进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即：进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即：进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即：进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即：试试试试剂剂剂剂贮贮贮贮存存存存和和和和准准准准备备备备区区区区 标标标标本本本本制制制制备备备备区区区区 扩扩扩扩增增增增反反反反应应应应混混混混合合合合物物物物配配配配制制制制和和和和扩扩扩扩增增增增区区区区 扩扩扩扩增产物分析区。增产物分析区。增产物分析区。增产物分析区。4 4 4 4不不不不同同同同工工工工作作作作区区区区域域域域使使使使用用用用不不不不同同同同的的的的工工工工作作作作
4、服服服服(例例例例如如如如不不不不同同同同的的的的颜颜颜颜色色色色)。工工工工作作作作人人人人员员员员离离离离开开开开各工作区域时，不得将工作服带出。各工作区域时，不得将工作服带出。各工作区域时，不得将工作服带出。各工作区域时，不得将工作服带出。第三页，讲稿共二十页哦（二）工作区域仪器设备配置标准（二）工作区域仪器设备配置标准 1 1 1 1试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区 2-82-82-82-8和和和和-15-15-15-15冰箱；混匀器；微量加样器冰箱；混匀器；微量加样器冰箱；混匀器；微量加样器冰箱；混匀器；微量加样器(覆盖覆盖覆盖覆盖1-10001-10
5、001-10001-1000l)l)l)l)；移动紫外灯移动紫外灯移动紫外灯移动紫外灯(近工作台面近工作台面近工作台面近工作台面)；消耗品：；消耗品：；消耗品：；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯带滤芯带滤芯带滤芯)；专用工作服和工作鞋；专用办公用品。专用工作服和工作鞋；专用办公用品。专用工作服和工作鞋；专用办公用品。专用工作服和工作鞋；专用办公用品。2 2 2 2标本制备区标本制备区标本制
6、备区标本制备区 1-81-81-81-8冰箱、冰箱、冰箱、冰箱、-20-20-20-20或或或或-80-80-80-80冰箱；高速台式冷冻离心机；冰箱；高速台式冷冻离心机；冰箱；高速台式冷冻离心机；冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器(覆盖覆盖覆盖覆盖1-10001-10001-10001-1000l)l)l)l)；可移动紫外灯可移动紫外灯可移动紫外灯可移动紫外灯(近工作台面近工作台面近工作台面近工作台面)；超净工作台；消耗品；超净工作台；消耗品；超净工作台；消
7、耗品；超净工作台；消耗品;一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯带滤芯带滤芯带滤芯)；专用工作专用工作专用工作专用工作服和工作鞋；专用办公用品；服和工作鞋；专用办公用品；服和工作鞋；专用办公用品；服和工作鞋；专用办公用品；如需处理大分子如需处理大分子如需处理大分子如需处理大分子DNADNADNADNA，应备有超声波水浴仪。，应备有超声波水浴仪。，应备有超声波水浴仪。，应备有超声波水浴仪。第四页，讲稿共二
8、十页哦3.3.3.3.扩增反应混合物配制和扩增区扩增反应混合物配制和扩增区扩增反应混合物配制和扩增区扩增反应混合物配制和扩增区 核酸扩增仪；微量加样器核酸扩增仪；微量加样器(覆盖覆盖1-1000l)1-1000l)；可移动紫外灯可移动紫外灯(近工作台面近工作台面)；消耗品（一次性手套、一次性吸水纸、；消耗品（一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯带滤芯)；专用工作服和工作鞋；专用办公用品专用工作服和工作鞋；专用办公用品.4.4.4.4.扩增产物分析区扩增产物分析区扩增产物分析区扩增产物分析区 基本仪器设备如下：基本仪器设备如下：微量加样器
9、微量加样器(覆盖覆盖1-1000l)1-1000l)；可移动紫外灯；消耗品；可移动紫外灯；消耗品；专用工作服和工作鞋；专用办公用品专用工作服和工作鞋；专用办公用品。第五页，讲稿共二十页哦（三）各区操作注意事项（三）各区操作注意事项 下述操作在该区进行：下述操作在该区进行：下述操作在该区进行：下述操作在该区进行：储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。在本区的实验操作过程中，必须戴手套并经常更换。在本区的实验操作过程中，必须戴手套并经常更换。在本
10、区的实验操作过程中，必须戴手套并经常更换。在本区的实验操作过程中，必须戴手套并经常更换。操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。工作结束后必须立即对工作区进行清洁。工作结束后必须立即对工作区进行清洁。工作结束后必须立即对工作区进行清洁。工作结束后必
11、须立即对工作区进行清洁。实验室及其设备的使用必须有日常记录。实验室及其设备的使用必须有日常记录。实验室及其设备的使用必须有日常记录。实验室及其设备的使用必须有日常记录。1.1.1.1.试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区第六页，讲稿共二十页哦2.2.标本制备区标本制备区标本制备区标本制备区 下述操作在该区进行：下述操作在该区进行：下述操作在该区进行：下述操作在该区进行：标标标标本本本本保保保保存存存存、核核核核酸酸酸酸（RNARNARNARNA、DNADNADNADNA）提提提提取取取取、贮贮贮贮存存存存及及及及其其其其加加加加入入入入至至至至扩扩扩扩增增增增反反反
12、反应应应应管管管管和和和和测定测定测定测定RNARNARNARNA时时时时cDNAcDNAcDNAcDNA的合成。的合成。的合成。的合成。为为为为避避避避免免免免样样样样本本本本间间间间的的的的交交交交叉叉叉叉污污污污染染染染，加加加加入入入入待待待待测测测测核核核核酸酸酸酸后后后后，必必必必须须须须盖盖盖盖好好好好含含含含反反反反应应应应混混混混合合合合液的反应管。液的反应管。液的反应管。液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭活程序。对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭活程序。对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭活程序。对具有潜在传染
13、危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭活程序。样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取方法。样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取方法。样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取方法。样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取方法。第七页，讲稿共二十页哦3.3.扩增扩增扩增扩增区区区区 下述操作在该区进行：下述操作在该区进行：下述操作在该区进行：下述操作在该区进行：DNADNADNADNA或或或或RNARNARNARNA扩增。扩增。扩增。扩增。在巢式在巢式在巢式在巢式PCRPCRPCRPCR测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增由较高
14、的测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增由较高的测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增由较高的测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增由较高的危险性，第二次加样必须在本区内进行。危险性，第二次加样必须在本区内进行。危险性，第二次加样必须在本区内进行。危险性，第二次加样必须在本区内进行。不能从本区再进入任何不能从本区再进入任何不能从本区再进入任何不能从本区再进入任何“上游上游上游上游”区域，可降低本区的气压以避免气溶胶区域，可降低本区的气压以避免气溶胶区域，可降低本区的气压以避免气溶胶区域，可降低本区的气压以避免气溶胶从本区漏出。从本区漏出。从本区漏出。从
15、本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，尽量减少在本区的走动。为避免气溶胶所致的污染，尽量减少在本区的走动。为避免气溶胶所致的污染，尽量减少在本区的走动。为避免气溶胶所致的污染，尽量减少在本区的走动。第八页，讲稿共二十页哦4.4.4.4.扩增产物分析区扩增产物分析区扩增产物分析区扩增产物分析区 下述操作在本区内进行：扩增片段的测定。下述操作在本区内进行：扩增片段的测定。下述操作在本区内进行：扩增片段的测定。下述操作在本区内进行：扩增片段的测定。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必
16、须注意避免通过本区的物本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。品及工作服将扩增产物带出。品及工作服将扩增产物带出。品及工作服将扩增产物带出。本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙稀酰胺、本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙稀酰胺、本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙稀酰胺、本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙稀酰胺、甲醛或同位素等，应注意实验人员的安全防护。甲醛或同位素等，应注意实验人员的安全防护。甲醛或同位素等，应注意实验人员的安全防护。甲醛或同位素等，应注意实验人员的
17、安全防护。本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性 第九页，讲稿共二十页哦二、质量保证二、质量保证临临临临床床床床基基基基因因因因扩扩扩扩增增增增检检检检验验验验实实实实验验验验室室室室质质质质量量量量保保保保证证证证涉涉涉涉及及及及到到到到整整整整个个个个基基基基因因因因扩扩扩扩增增增增检检检检验验验验所所所所有有有有阶阶阶阶段段段段，即即即即测测测测定定定定分分
18、分分析析析析前前前前的的的的标标标标本本本本采采采采集集集集处处处处理理理理、测测测测定定定定中中中中的的的的核核核核酸酸酸酸提提提提取取取取，扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。（一）标本的采集（一）标本的采集（一）标本的采集（一）标本的采集（二）标本的稳定化处理（二）标本的稳定化处理（二）标本的稳定化处理（二）标本的稳定化处理 （三）标本的运送（三）标本的运送（三）标本的运送（三）标本的运送 （四）标本的贮存（四）标本的贮存（四）标本的贮存（四）标本的贮存 （五）标本的处理（
19、五）标本的处理（五）标本的处理（五）标本的处理(核酸提取核酸提取核酸提取核酸提取)（六）靶核酸的逆转录（六）靶核酸的逆转录（六）靶核酸的逆转录（六）靶核酸的逆转录CFIT)CFIT)CFIT)CFIT)和扩增和扩增和扩增和扩增 （七）污染（七）污染（七）污染（七）污染 （八）扩增产物的分析（八）扩增产物的分析（八）扩增产物的分析（八）扩增产物的分析 （九）质量控制（九）质量控制（九）质量控制（九）质量控制 第十页，讲稿共二十页哦（一）标本的采集（一）标本的采集 n n常常常常用用用用于于于于基基基基因因因因扩扩扩扩增增增增检检检检测测测测的的的的临临临临床床床床标标标标本本本本包包包包括括括括
20、EDTAEDTAEDTAEDTA或或或或构构构构橼橼橼橼酸酸酸酸钠钠钠钠抗抗抗抗凝凝凝凝全全全全血血血血或或或或骨骨骨骨髓髓髓髓、血血血血清清清清或或或或血血血血浆浆浆浆、痰痰痰痰、脑脑脑脑脊脊脊脊液液液液、尿尿尿尿及及及及分分分分泌泌泌泌物物物物等等等等。采采采采血血血血液液液液等等等等样样样样本本本本时时时时，应应应应使使使使用用用用一一一一次次次次性性性性密密密密闭闭闭闭容容容容器器器器，如如如如真真真真空空空空采采采采血血血血管管管管。当当当当使使使使用用用用非非非非密密密密闭闭闭闭采采采采样样样样系系系系统统统统时时时时，如如如如尿尿尿尿、分分分分泌泌泌泌物物物物和和和和骨骨骨骨髓髓
21、髓髓的的的的采采采采样样样样，必必必必须须须须注注注注意意意意防防防防止止止止来来来来自自自自采采采采样样样样者者者者的的的的皮皮皮皮屑屑屑屑或或或或分分分分泌泌泌泌物物物物的的的的污污污污染染染染。采采采采样样样样时时时时必必必必须须须须戴戴戴戴一一一一次性手套。次性手套。次性手套。次性手套。n n玻璃器皿在使用前应高压处理。玻璃器皿在使用前应高压处理。玻璃器皿在使用前应高压处理。玻璃器皿在使用前应高压处理。n n临临临临床床床床用用用用于于于于RNARNARNARNA（如如如如HCV HCV HCV HCV RNARNARNARNA）扩扩扩扩增增增增检检检检测测测测的的的的血血血血标标标标
22、本本本本建建建建议议议议进进进进行行行行抗抗抗抗凝凝凝凝处处处处理理理理，并并并并尽尽尽尽快快快快（3 3 3 3小小小小时时时时以以以以内内内内）分分分分离离离离血血血血浆浆浆浆，以以以以避避避避免免免免RNARNARNARNA的的的的降降降降解解解解。如如如如未未未未作作作作抗抗抗抗凝凝凝凝处处处处理理理理，则则则则抽抽抽抽血血血血后后后后，必必必必须在须在须在须在1 1 1 1小时内分离血清。小时内分离血清。小时内分离血清。小时内分离血清。第十一页，讲稿共二十页哦（二）标本的稳定化处理（二）标本的稳定化处理 用于用于用于用于DNADNADNADNA扩增检测的标本，应及时送至实验室。扩增检
23、测的标本，应及时送至实验室。扩增检测的标本，应及时送至实验室。扩增检测的标本，应及时送至实验室。用用用用 于于于于RNARNARNARNA测测测测 定定定定 的的的的 标标标标 本本本本 应应应应 进进进进 行行行行 稳稳稳稳 定定定定 化化化化 处处处处 理理理理，异异异异 硫硫硫硫 氰氰氰氰 酸酸酸酸 胍胍胍胍 盐盐盐盐(Guanidine(Guanidine(Guanidine(Guanidine thiocyanatethiocyanatethiocyanatethiocyanate，CITC)CITC)CITC)CITC)可可可可使使使使DNADNADNADNA酶酶酶酶和和和和RNA
24、RNARNARNA酶酶酶酶立立立立即即即即失失失失活活活活，因因因因此此此此在在在在采采采采集集集集标标标标本本本本时时时时，可可可可将将将将标标标标本本本本材材材材料料料料如如如如血血血血清清清清或或或或血血血血浆浆浆浆按按按按1 1 1 1：4 4 4 4的的的的比比比比例例例例加加加加至至至至含含含含有有有有5mol5mol5mol5molL L L L GITCGITCGITCGITC的的的的试试试试管中，从而使血清管中，从而使血清管中，从而使血清管中，从而使血清(浆浆浆浆)中的中的中的中的RNARNARNARNA酶不可逆失活。酶不可逆失活。酶不可逆失活。酶不可逆失活。第十二页，讲稿共
25、二十页哦（三）标本的运送三）标本的运送 qq标本采集后必须尽快送至实验室。标本采集后必须尽快送至实验室。标本采集后必须尽快送至实验室。标本采集后必须尽快送至实验室。qq经过稳定化处理的标本可在常温下邮寄运送。经过稳定化处理的标本可在常温下邮寄运送。经过稳定化处理的标本可在常温下邮寄运送。经过稳定化处理的标本可在常温下邮寄运送。qq用于用于用于用于RNARNARNARNA检测的标本，如果未经稳定化处理，须速冻后，放在检测的标本，如果未经稳定化处理，须速冻后，放在检测的标本，如果未经稳定化处理，须速冻后，放在检测的标本，如果未经稳定化处理，须速冻后，放在干冰中运送。干冰中运送。干冰中运送。干冰中运
26、送。第十三页，讲稿共二十页哦（四）标本的贮存（四）标本的贮存 临床体液标本如血清血浆等可于临床体液标本如血清血浆等可于临床体液标本如血清血浆等可于临床体液标本如血清血浆等可于-70-70-70-70下长时间贮存。下长时间贮存。下长时间贮存。下长时间贮存。用于用于用于用于DNADNADNADNA测定的已纯化核酸样本可在测定的已纯化核酸样本可在测定的已纯化核酸样本可在测定的已纯化核酸样本可在10 mmol10 mmol10 mmol10 mmolL Tris1mmolL Tris1mmolL Tris1mmolL Tris1mmolL L L L EDTAEDTAEDTAEDTA缓冲液缓冲液缓冲液
27、缓冲液(pH7.5(pH7.5(pH7.5(pH7.58.0)8.0)8.0)8.0)中中中中4444保存。保存。保存。保存。用于用于用于用于RNARNARNARNA测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中-80-80-80-80或液氮中贮存。或液氮中贮存。或液氮中贮存。或液氮中贮存。用乙醇沉淀的核酸样本贮存在用乙醇沉淀的核酸样本贮存在用乙醇沉淀的核酸样本贮存在用乙醇沉淀的核酸样本贮存在-20-20-20-20即可。即可。即可。即可。用用用用GITCGITCGITCGITC处理的处理的处理的处理的RNARN
28、ARNARNA标本在室温可保存标本在室温可保存标本在室温可保存标本在室温可保存7 7 7 7天。天。天。天。第十四页，讲稿共二十页哦（五）标本的处理（五）标本的处理(核酸提取核酸提取)n n标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步骤，标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步骤，标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步骤，标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步骤，在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板前，应对在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板前，应对在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板前，应对在使用商品核酸提取试剂提取临床标
29、本中的核酸模板前，应对其进行充分评价以验证其提取的有效性。其进行充分评价以验证其提取的有效性。其进行充分评价以验证其提取的有效性。其进行充分评价以验证其提取的有效性。n n当靶核酸为当靶核酸为当靶核酸为当靶核酸为RNARNARNARNA时，逆转录时，逆转录时，逆转录时，逆转录PCRPCRPCRPCR测定失败的常见原因是标本在运送测定失败的常见原因是标本在运送测定失败的常见原因是标本在运送测定失败的常见原因是标本在运送前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的RNARNARNARNA酶的
30、污染。故建议酶的污染。故建议酶的污染。故建议酶的污染。故建议使用高质量的商品核酸提取试剂。使用高质量的商品核酸提取试剂。使用高质量的商品核酸提取试剂。使用高质量的商品核酸提取试剂。第十五页，讲稿共二十页哦（六）靶核酸的逆转录（六）靶核酸的逆转录(RT)(RT)和扩增和扩增 1 1 1 1靶靶靶靶RNARNARNARNA的逆转录的逆转录的逆转录的逆转录 下下下下述述述述因因因因素素素素通通通通常常常常影影影影响响响响cDNAcDNAcDNAcDNA合合合合成成成成的的的的效效效效率率率率：(1)(1)(1)(1)逆逆逆逆转转转转录录录录效效效效率率率率的的的的降降降降低低低低或或或或完完完完全全
31、全全缺缺缺缺乏乏乏乏。其其其其可可可可能能能能的的的的原原原原因因因因有有有有逆逆逆逆转转转转录录录录酶酶酶酶质质质质量量量量不不不不高高高高、试试试试剂剂剂剂降降降降解解解解变变变变质质质质或或或或加加加加样样样样错错错错误误误误等等等等；(2)(2)(2)(2)用用用用于于于于逆逆逆逆转转转转录录录录的的的的标标标标本本本本中中中中存存存存在在在在逆逆逆逆转转转转录录录录或或或或TaqTaqTaqTaq酶酶酶酶的的的的抑抑抑抑制制制制物物物物(如如如如酚酚酚酚、氯氯氯氯仿仿仿仿、血血血血红红红红素素素素等等等等)；(3)RNA(3)RNA(3)RNA(3)RNA酶的存在导致酶的存在导致酶的
32、存在导致酶的存在导致RNARNARNARNA的降解。的降解。的降解。的降解。2 2 2 2核酸的扩增核酸的扩增核酸的扩增核酸的扩增 有多种因素可引起核酸扩增检测的假阳性或假阴性结果，如扩增靶核酸中抑有多种因素可引起核酸扩增检测的假阳性或假阴性结果，如扩增靶核酸中抑有多种因素可引起核酸扩增检测的假阳性或假阴性结果，如扩增靶核酸中抑有多种因素可引起核酸扩增检测的假阳性或假阴性结果，如扩增靶核酸中抑制剂存在、制剂存在、制剂存在、制剂存在、TaqTaqTaqTaq酶失活、退火温度不对、酶失活、退火温度不对、酶失活、退火温度不对、酶失活、退火温度不对、MgMgMgMg2+2+2+2+浓度不佳、患者标本或
33、试剂受浓度不佳、患者标本或试剂受浓度不佳、患者标本或试剂受浓度不佳、患者标本或试剂受污染等。扩增仪孔中热传导的均一性极为重要，必须定期对扩增仪的温度控制和污染等。扩增仪孔中热传导的均一性极为重要，必须定期对扩增仪的温度控制和污染等。扩增仪孔中热传导的均一性极为重要，必须定期对扩增仪的温度控制和污染等。扩增仪孔中热传导的均一性极为重要，必须定期对扩增仪的温度控制和加热模块中热传导的一致性进行检查，以避免假阴性结果。加热模块中热传导的一致性进行检查，以避免假阴性结果。加热模块中热传导的一致性进行检查，以避免假阴性结果。加热模块中热传导的一致性进行检查，以避免假阴性结果。第十六页，讲稿共二十页哦（七
34、）污七）污 染染 在在在在实实实实际际际际工工工工作作作作中中中中，常常常常见见见见有有有有以以以以下下下下几几几几种种种种污污污污染染染染类类类类型型型型：扩扩扩扩增增增增片片片片段段段段的的的的污污污污染染染染（产产产产物物物物污污污污染染染染）、天天天天然然然然基基基基因因因因组组组组DNADNADNADNA的的的的污污污污染染染染、试试试试剂剂剂剂污污污污染染染染（储储储储存存存存液液液液或或或或工工工工作作作作液液液液）以以以以及及及及标标标标本本本本间间间间交交交交叉叉叉叉污污污污染染染染（如如如如气气气气溶溶溶溶胶胶胶胶从从从从一一一一个个个个阳阳阳阳性性性性标标标标本本本本扩扩
35、扩扩散散散散到到到到原原原原本本本本阴阴阴阴性性性性的的的的标标标标本本本本）。临临临临床床床床基基基基因扩增检验实验室中污染的最主要来源是扩增产物的污染。因扩增检验实验室中污染的最主要来源是扩增产物的污染。因扩增检验实验室中污染的最主要来源是扩增产物的污染。因扩增检验实验室中污染的最主要来源是扩增产物的污染。1 1 1 1测定分析前的污染源测定分析前的污染源测定分析前的污染源测定分析前的污染源 2 2 2 2测定分析阶段的污染源测定分析阶段的污染源测定分析阶段的污染源测定分析阶段的污染源 3 3 3 3污染的避免污染的避免污染的避免污染的避免 工作区的严格划分的目的即是为了预防污染。为避免以
36、工作区的严格划分的目的即是为了预防污染。为避免以工作区的严格划分的目的即是为了预防污染。为避免以工作区的严格划分的目的即是为了预防污染。为避免以 前测定中所产生的扩增产物的污染，可设法将其破坏掉。如在扩增前测定中所产生的扩增产物的污染，可设法将其破坏掉。如在扩增前测定中所产生的扩增产物的污染，可设法将其破坏掉。如在扩增前测定中所产生的扩增产物的污染，可设法将其破坏掉。如在扩增 反应中用反应中用反应中用反应中用dUTPdUTPdUTPdUTP取代部分取代部分取代部分取代部分dTTPdTTPdTTPdTTP，持续的长波紫外灯照射，不能用其来，持续的长波紫外灯照射，不能用其来，持续的长波紫外灯照射，
37、不能用其来，持续的长波紫外灯照射，不能用其来 替代严格的实验室设置和管理，尤其是这些方法不能防止外来非扩替代严格的实验室设置和管理，尤其是这些方法不能防止外来非扩替代严格的实验室设置和管理，尤其是这些方法不能防止外来非扩替代严格的实验室设置和管理，尤其是这些方法不能防止外来非扩 增的天然增的天然增的天然增的天然DNADNADNADNA的污染。的污染。的污染。的污染。4 4 4 4去除污染的措施去除污染的措施去除污染的措施去除污染的措施 :次氯酸钠、紫外线照射、高压消毒次氯酸钠、紫外线照射、高压消毒次氯酸钠、紫外线照射、高压消毒次氯酸钠、紫外线照射、高压消毒第十七页，讲稿共二十页哦（八）扩增产物
38、的分析八）扩增产物的分析 扩增产物的测定有各种方法，如电泳、限制性酶切、斑点印迹、探针扩增产物的测定有各种方法，如电泳、限制性酶切、斑点印迹、探针扩增产物的测定有各种方法，如电泳、限制性酶切、斑点印迹、探针扩增产物的测定有各种方法，如电泳、限制性酶切、斑点印迹、探针杂交、测序、分光光度法定量等，但临床杂交、测序、分光光度法定量等，但临床杂交、测序、分光光度法定量等，但临床杂交、测序、分光光度法定量等，但临床PCRPCRPCRPCR检验项目基本上都使用检验项目基本上都使用检验项目基本上都使用检验项目基本上都使用探针杂交方法。探针杂交方法。探针杂交方法。探针杂交方法。杂交检测时应严格遵守商品试剂盒
39、确定的杂交程序盒杂交条件。杂交检测时应严格遵守商品试剂盒确定的杂交程序盒杂交条件。杂交检测时应严格遵守商品试剂盒确定的杂交程序盒杂交条件。杂交检测时应严格遵守商品试剂盒确定的杂交程序盒杂交条件。第十八页，讲稿共二十页哦（九）质量控制九）质量控制 n n必必必必须须须须对对对对DNADNADNADNA和和和和RNARNARNARNA分分分分析析析析的的的的各各各各步步步步进进进进行行行行质质质质量量量量控控控控制制制制，以以以以避避避避免免免免假假假假阳阳阳阳性性性性和和和和假假假假阴阴阴阴性性性性，保保保保证证证证测测测测定定定定结结结结果果果果的的的的准准准准确确确确性性性性和和和和重重重重
40、复复复复性性性性。由由由由于于于于核核核核酸酸酸酸扩扩扩扩增增增增测测测测定定定定的的的的高高高高敏敏敏敏感感感感性性性性，所所所所以以以以标标标标本本本本制制制制备备备备、逆逆逆逆转转转转录录录录、扩扩扩扩增增增增本本本本身身身身和和和和产产产产物物物物分分分分析析析析中中中中的的的的每每每每一一一一步步步步都都都都要要要要求求求求有有有有质质质质控控控控措施。措施。措施。措施。n n目目目目前前前前的的的的商商商商品品品品试试试试剂剂剂剂盒盒盒盒大大大大部部部部分分分分没没没没采采采采用用用用内内内内标标标标方方方方法法法法质质质质控控控控。因因因因此此此此，在在在在测测测测定定定定血血血
41、血清清清清/血血血血浆浆浆浆病病病病原原原原体体体体核核核核酸酸酸酸如如如如HBV HBV HBV HBV DNADNADNADNA、HCV HCV HCV HCV RNARNARNARNA等等等等时时时时，应应应应使使使使用用用用已已已已知知知知的的的的弱弱弱弱阳阳阳阳性性性性血血血血清清清清/血血血血浆浆浆浆作作作作为为为为质质质质控控控控样样样样本本本本，与与与与待待待待测测测测临临临临床床床床标标标标本本本本等等等等同同同同处处处处理理理理提提提提取取取取核核核核酸酸酸酸及及及及扩扩扩扩增增增增，以以以以判判判判断断断断逆逆逆逆转转转转录录录录及及及及扩扩扩扩增增增增检检检检测测测测的
42、的的的效效效效果。果。果。果。n n每一个每一个每一个每一个PCRPCRPCRPCR实验中都必须设有外加阴性质控（污染监测质控），为判断扩实验中都必须设有外加阴性质控（污染监测质控），为判断扩实验中都必须设有外加阴性质控（污染监测质控），为判断扩实验中都必须设有外加阴性质控（污染监测质控），为判断扩增过程中污染出现的阶段，阴性质控可包括如下几种：即在样品制备的增过程中污染出现的阶段，阴性质控可包括如下几种：即在样品制备的增过程中污染出现的阶段，阴性质控可包括如下几种：即在样品制备的增过程中污染出现的阶段，阴性质控可包括如下几种：即在样品制备的整个过程中所带的空白管、仅有扩增反应液但不含扩增模板的反应管、整个过程中所带的空白管、仅有扩增反应液但不含扩增模板的反应管、整个过程中所带的空白管、仅有扩增反应液但不含扩增模板的反应管、整个过程中所带的空白管、仅有扩增反应液但不含扩增模板的反应管、阴性标本等。阴性标本可以评估阴性标本等。阴性标本可以评估阴性标本等。阴性标本可以评估阴性标本等。阴性标本可以评估PCRPCRPCRPCR试验的综合质量。试验的综合质量。试验的综合质量。试验的综合质量。第十九页，讲稿共二十页哦感感谢谢大大家家观观看看第二十页，讲稿共二十页哦