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1、齐齐哈尔医学院学报 年第 卷第 期 ，论 著 模型大鼠造模方法建 立和探讨孙载鑫李欣武喜健王军彭凡珂王慧【摘要】目的建立，三硝基苯磺酸（）和乙醇的混合液诱导的溃疡性结肠炎动物模型，探讨 和乙醇的混合液最适浓度比。方法 只雄性 大鼠，采用随机数字表法随机分为模型组、模型组、模型组 及正常组，分别用 和 乙醇混合液、和 乙醇混合液、和乙醇 的混合液以及等量生理盐水进行灌肠，灌肠 后开始观察各组大鼠的死亡率以及疾病活动指数；造模后分别在第、脱颈椎处死大鼠，分离结肠组织，做肉眼评分和组织病理学评分。结果与正常组比较，造模各组均出现明显的病理改变以及相关临床症状（），模型组 比模型组、，大鼠死亡率低，结
2、肠病变肉眼评分、病理学评分及疾病活动指数有差异（或 ）。结论采用模型组 浓度即 和 乙醇混合液进行灌肠造模可成功构建持续而稳定的溃疡性结肠炎大鼠模型。【关键词】；乙醇；动物模型溃疡性结肠炎（，）是一种原因不明的慢性非特异性结肠炎。病变多自直肠开始，逆行向近段发展，可累及全结肠甚至末段回肠，反复发作的腹泻、粘液脓血便及腹痛是 的主要临床症状。现代医学多用，三硝基苯磺酸（，）联合无水乙醇作为造模液进行溃疡性结肠炎模型复制，它主要致炎机制是乙醇破坏肠黏膜屏障，渗入结肠黏膜组织与大分子物质结合，形成全抗原，引起肠壁一系列免疫应答和炎症反应。但是对于 和无水乙醇的比例关系，一直不是很明确。本次实验我们选
3、用不同的搭配比例关系，观察 诱导大鼠溃疡性结肠炎在造模前后以及整个过程的疾病活动指数、结肠肉眼病变评分和病理学评分，为阐明诱导大鼠实验性结肠炎的 和无水乙醇最适浓度比提供依据。和 乙醇；模型组 以剂量为 和乙醇 混合；正常组仅灌注等量生理盐水。导入造膜液时取头低尾高倾斜 体位，并且用拇指和食指捏住大鼠肛门约五分钟以保证造膜液与结肠充分接触和防止造膜液外溢。造模完成后，注意保温，直至自然苏醒。疾病活动指数（）：造模后常规饲养，每天观察并记录大鼠的进食情况、精神状态及粪便性状，同时记录体重。按 表 进行评分 （体重 大便形态 大便出血）。大鼠结肠病变肉眼评分标准（）：观察结肠大体形态、结肠黏膜损伤
4、情况，大体形态损伤评分参照标准进行：分：结肠无损伤；分：结肠轻度水肿但没有溃疡；分：充血而且肠黏膜粗糙呈颗粒状；分：结肠黏膜溃疡形成，直径约 ；分：结肠黏膜溃疡形成，直径约 ，但肠管与外周脏器无粘连；分：溃疡直径 ，肠管增厚，与周围脏器粘连严重。结肠组织病理学评分（）标准：上皮细胞：分：正常形态；分：有杯状细胞丢失；分：杯状细胞大面积丢失；分：隐窝细胞丢失；分：隐窝细胞大面积丢失。炎细胞浸润：分：没有浸润；分：浸润在隐窝基底层；分：浸润到达黏膜肌层；分：浸润深入到黏膜肌层，伴随黏膜增厚和明显水肿；分：浸润到达黏膜下层。每只大鼠总评分为“上皮细胞”评分 “炎细胞浸润”评分。材料与方法 研究对象：
5、清洁级雄性 大鼠 只，体质量（），购于哈尔滨医科大学实验动物学中心，动物合格证号：（黑）。实验器材：热水袋，冰袋，液体石蜡，灌胃器，（三硝基苯磺酸），（美国 公司，批号：）；无水乙醇（成都市科隆化工试剂厂，批号：）；水合氯醛（江苏省昆山市石浦年沙助剂厂，批号：）；生理盐水（四川科伦药业股份有限公司，批号：国药准字）。方法：参照 造模法造模，将 只雄性 大鼠采用随机分为 组，造模组 只，正常组 只。造模前大鼠须禁食不 禁水 ，用 水合氯醛腹腔麻醉（），在液体石蜡油润滑下，用改良后大鼠灌胃器导入距肛门约 的结肠。其中模型组 以剂量为 和 乙醇；模型组 以剂量为 基 金 项 目：黑 龙 江 省 大
6、学 生 创 新 创 业 训 练 项 目（：）；齐齐哈尔医学院大学生课外学术科研课题；黑龙江省教育厅科学技术研究项目（：）作者单位：黑龙江，齐齐哈尔医学院医学检验专业（孙载鑫、李欣、武喜健、王军、彭凡珂），免疫教研室（王慧）通信作者：王慧，：结果 造模后一般观察：实验组大鼠在造模后第 天大部分大鼠即出现稀便、活动减少，精神萎靡等症状，皮毛粗糙、无光泽，稀便和血便持续 天左右。正常组部分大鼠造模后第 天出现稀便，但第 天即恢复正常，精神和活动状况正常，皮毛光滑。造模后各组大鼠进食进水量减少，体重也大幅度下降。而第 天食量开始增加，体重也随之增加，至第 天多数大鼠恢复至造模前水平，个别大鼠精神状态不
7、佳。生理盐水灌肠后正常组大鼠体重和进食量无明显变化。实验过程中，实验组大鼠在造模后共死亡 只（模型组 只，模型组 只，模型组 只，正常组 只），其中 只在造模第 天死亡，只因出现腹水，小肠扩张，胀气而死亡，其他组大鼠均 齐齐哈尔医学院学报 年第 卷第 期 ，表疾病活动指数（评分表）观察指数体质量大便性状大便隐血 分不下降正常阴性 分下降 分下降 松散但不粘肛周以上 项得分的平均值阳性 分下降 分大于 腹泻肉眼血便表实验大鼠的 评分比较（珋 ，）组别正常组模型组 模型组 模型组 疾病活动指数 分造模前 造模后第 天 倡造模后第 天 倡造模后第 天 倡 倡 倡 倡倡 倡 倡倡 倡注：与正常组比较，
8、倡倡 ，倡 ；与模型组比较，表 实验大鼠的 和 评分比较（珋 ，）组别正常组模型组 模型组 模型组 倡 倡 倡 评分 倡 评分 倡 倡 倡倡 倡 倡倡 倡 倡 倡 倡倡 倡 倡倡注：与正常组比较，倡倡 ，倡 ；与模型组比较，无死亡。模型组、的大鼠用 和乙醇的混合液造模后的，和结肠 的影响：与正常组大鼠相比较，模型组大鼠，和结肠 评分均明显上升（）；模型组 大鼠的，和结肠 在第 天、天周有显著性差异（），在第 天无差异（）；模型组 大鼠的，和结肠 在第 天、天、天均有差异或显著性差异（或 ）；模型组 大鼠的，和结肠 在第 天有显著性差异（）、第 天、天均无差异（）在第 天模型组 比模型组 具有著
9、性差异（），在第 天、天模型组 比模型组 具有著性差异（）见表 。结肠变化：造模组大鼠造模后第 天结肠充血溃烂，肠壁发生红肿，带有大量红血丝，可见出血部位。天后可见黏膜糜烂，肠壁坏死并深达肌层，炎性细胞浸润肠壁全层，黏膜及腺体脱落形成大面积溃疡灶，部分大鼠出现肠梗阻，肠壁硬化，肠壁明显水肿等表现。第 天肠黏膜结构基本恢复正常，溃疡病灶数量减少，红肿面积和红血丝明显改善。正常组大鼠在第 天可见黏膜轻度损伤，肠壁轻度水肿，个别有出血病灶形成。其余时间各组观察结果与正常组观察结果一致。用较大剂量的 诱导的炎性肠病模型，虽然模型制备成功，但病死率较高，约为。模型组 以剂量为 和 乙醇大鼠进行灌肠，从实
10、验结果中可以看到模型大鼠均出现蜷卧、活动减少，全身发抖，皮毛松散无光泽，稀便并伴有便血，便次增多，体重下降，大约在一周左右开始好转，大便变实，体质量回增。病变以黏膜和黏膜下层为主，而溃疡和炎细胞浸润是评判溃疡性结肠炎模型是否成功的主要标准。造模后第 天发现肠壁坏死炎症最为严重，这些特征表明该方法制备炎性肠病模型是成功的，并且采用上述方法造模使模型动物的病死率得到显著控制。实验在 室温使用水合氯醛常规 体质量腹腔注射麻醉，高达 的麻醉大鼠未苏醒死亡，采取保温大鼠可全部苏醒，因此保温是降低模型大鼠制备过程中因麻醉而死亡的重要因素，是提高成模率的关键环节之一。因此，该比例进行 大鼠模型复制比较成功，
11、造模后短期内可用于急性炎症性损伤的研究。此方法制备炎性肠病模型，周期短，方法简便，可作为研究人类炎性肠病发病机制及相关药物研发的理想模型。参考文献 沃格尔，沃格尔，编著 药理学实验指南新药发现和药理学评价 北京：科学出版社，：，（）：陈迟，冉志华，萧树东，等 普伐他汀对乙酸诱导大鼠结肠炎的治疗作用及其机制的研究 中华医学杂志，（）：，：，：，：讨论炎性肠病在欧美国家十分常见，尽管在亚洲国家的发病率低于西方，但近年来亦呈上升趋势。国内由于此病少见没有引起人们重视，导致中国的新病例不断出现。病因和确切的发病机制至今尚不清楚，治疗极其困难，因此理想的动物模型是进行病理、病因及相关治疗药物研究不可缺少
12、的工具。目前，诱导的大鼠肠损伤模型已广泛用于人类各种肠道病变发病机制的研究。造成的肠损伤与人类的 在发病机制、病理特点及临床表现等方面相似，其典型特征是结肠发生透壁性坏死和广泛的炎性细胞浸润，溃疡等 症状，并且伴随着体重的持续下降。以往有文献报道采齐齐哈尔医学院学报 年第 卷第 期 ，：，（）：，：，：（收稿日期：）移植对 中枢神经系统脱髓 鞘大鼠脊髓有髓神经纤维的影响张萌郎尉雅姚宏波孙丽慧【摘要】目的观察少突胶质细胞前体细胞移植对脱髓鞘模型大鼠脊髓有髓神经纤维形态的影响。方法选择 只健康大鼠随机分为正常组、模型组、治疗对照组、治疗组。将模型组、治疗对照组和治疗组用同种脊髓匀浆与完全弗氏佐剂混
13、合做抗原皮下注射造模，造模后观察大鼠运动情况，造模 天后治疗组向侧脑室内注入少突胶质细胞悬液，治疗对照组注入同等剂量生理盐水，连续观察 天大鼠活动情况，将各组大鼠处死，取脊髓制成石蜡切片，用 染色法染色并观察。结果模型组、治疗对照组与治疗组大鼠均出现运动功能障碍，移植后治疗组大鼠运动功能有所恢复。染色切片模型组及治疗对照组出现明显髓鞘肿胀、脱失。治疗组髓鞘肿胀有所缓解，炎性细胞数量减少。结论少突胶质细胞前体细胞移植可促进脱髓鞘模型大鼠脊髓髓鞘的修复。【关键词】少突胶质细胞前体细胞；实验性变态反应性脑脊髓炎；多发性硬化；细胞移植多发性硬化症（，）是一种多灶性脱髓鞘和轴突损伤为主要特征的中枢神经系
14、统疾病，可以导致感觉、运动等多方面的功能障碍。其病理改变主要为中枢神经系统内散在而多发的脑白质或髓鞘中的脱髓鞘病灶血管周围 细胞、细胞及其他炎性细胞浸润。目前临床上该疾病的治疗以药物治疗为主，但在疾病进展期，药物功能欠佳。因此，从此疾病的病理改变上考虑，可通过修复中枢神经系统的髓鞘来缓解症状。中枢神经系统构成髓鞘的神经胶质细胞主要为少突胶质细胞，其前体细胞（，）可定向分化为成熟少突胶质细胞，又具有较好的增殖能力和定向迁移能力。在髓鞘损伤时，可对受损的髓鞘起到修复的作用，从而缓解症状，改善运动功能。由于实 验 性 变 态 反 应 性 脑 脊 髓 炎（，）模型的组织病理学改变与 极为相似，建立 大
15、鼠模型并进行 移植，研究其对大鼠中枢神经系统有髓神经纤维形态的影响。悬液的大鼠。各组大鼠移植 周后处死取大脑及脊髓 染色观察。二、主要仪器设备和试剂倒置相差显微镜（）；小鼠立体定位仪（）；（上海细胞库）；多聚甲醛（天津福晨化学试剂厂）；苏木精 伊红染色剂（北京华美生物）；完全弗氏佐剂（）；百日咳菌素（）；培养基（）；胰蛋白酶（）。三、实验方法 制作 动物模型：将大鼠脊髓与等量的含有结核菌素的完全弗氏佐剂（，）混合作为抗原佐剂复合物。取正常大鼠麻醉后用冰生理盐水做心脏灌注至右心房流出清亮液体。取出大鼠脊髓并挑去脊膜和血管，称重，加等量的，用注射器置于冰上反复抽打至油包水状乳化物，模型组、对照组和
16、治疗组大鼠单点皮下注射，剂量为 只，免疫后每日称重并观察大鼠运动情况。细胞移植：将购入的 置于无血清的 培养基中培养，每日观察细胞形态，待 细胞贴壁后消化，后加入培养基终止消化，吹打至细胞呈悬浮状态，移入无菌离心管置于离心机中离心（，），重悬细胞，调整细胞浓度至 ，以备细胞移植使用。造模后 天取治疗组大鼠称重、麻醉后头部水平定位，选取矢状缝与冠状缝交点旁 后 为定位点钻孔，向侧脑室内注射 悬液，治疗对照组称重后给予同剂量生理盐水，填充骨孔并缝合，移植后每日称重观察并进行运动功能评分。制片：在 移植治疗术后 天，将 组大鼠用过量麻醉剂麻醉并固定于手术台上，生理盐水加压进行心脏灌注，至右心房流出清
17、亮液体，多聚甲醛溶液继续快速灌注，取材料与方法一、实验动物和分组健康成年 大鼠 只，体重 。随机分为正常组、模型组、对照组、治疗组，正常组为健康大鼠，模型组为 模型大鼠，对照组为造模后 周向侧脑室注射生理盐水的大鼠。治疗组为造模后 周向侧脑室内移植少突胶质细胞基金项目：黑龙江省齐齐哈尔市科学技术计划项目（）作者单位：哈尔滨，黑龙江中医药大学人体解剖与组织胚胎学教研室（张萌）；黑龙江，齐齐哈尔医学院组胚教研室（张萌、郎尉雅、姚宏波、孙丽慧）通信作者：孙丽慧UC模型大鼠造模方法建立和探讨作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：孙载鑫，李欣，武喜健，王军，彭凡珂，王慧孙载鑫,李欣,武喜健,王军
18、,彭凡珂(齐齐哈尔医学院医学检验专业,黑龙江,161006)，王慧(齐齐哈尔医学院免疫教研室,黑龙江,161006)齐齐哈尔医学院学报Journal of Qiqihar University of Medicine2015(12)1.沃格尔HG;沃格尔WH 药理学实验指南新药发现和药理学评价 20012.Steidler L;Hans W;Schotte L Treatmentofmunine colitis by lactococcus lactis secreting interleukin-10 2000(5483)3.陈迟,冉志华,萧树东 普伐他汀对乙酸诱导大鼠结肠炎的治疗作用及其机
19、制的研究期刊论文-中华医学杂志2006(18)4.Luke HH;Ko JKS;Fung HS Delineation of the protective action of zinc sulfate on ulcerative colitis20025.Obermeier F;Dunger N;Strauch UG Contrasting activity of cyto-sine-guanosin dinucleotideoligonucleotides inmicewith experimental colitis 20036.Zhong W Chemok ines orchestrat
20、e leukocyte trafficking in inflammatory bowel disease 20087.Yamamoto S Intestinal gene exp reunion in 1NBS treated m ice using gene chip and subtractive c DNAanalynsis inplications for Crohns disease 20058.Markus EN Antibodies to Interleuk in 12 Abrogate Established Experimental Colitis in Mice 1995(09)9.Strober W The immunology of mucosal models of inflammation 200210.Matsuura M Therapeutic Effects of Rectal Administration of Basic Fibrob last Growth Factor onExperimental Murine Colitis 2005引用本文格式：孙载鑫.李欣.武喜健.王军.彭凡珂.王慧 UC模型大鼠造模方法建立和探讨期刊论文-齐齐哈尔医学院学报 2015(12)