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1、课题3 血红蛋白的提取和别离一、选择题1凝胶色谱法是别离蛋白质分子的一种常用方法，但并非所有的蛋白质都可用此方法进行别离。能别离的蛋白质分子之间必须()A具有相同的相对分子质量B相对分子质量不同，但都是相对分子质量较大的分子C相对分子质量不同，但都是相对分子质量较小的分子D相对分子质量不同，但都在一定范围之内解析：相对分子质量大小不同的多种成分在通过凝胶时，按照相对分子质量大小“排队，从而将各种成分分开。在每种凝胶别离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难别离的。答案：D2以下关于凝胶色谱法的原理及操作，不正确的选项是()A是利用凝胶把分子大小不同的物质别离开的一种方法B在洗脱过程中，
2、大分子不能进入凝胶内部而最先流出；小分子因进入凝胶内部而流速缓慢，后流出C凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被别离的物质分子的大小无相应关系D一般情况下，凝胶对要别离的物质没有吸附作用，因此所有要别离的物质都应该被洗脱出来解析：选用不同种凝胶，其立体网状结构不同，孔隙大小不同，因此可别离出的分子大小也不同。凝胶一般对别离的物质无吸附作用，所有要别离的物质都应该被洗脱出来，这是凝胶色谱法与一般层析法的不同。答案：C3以下关于凝胶柱上参加样品和洗脱操作的表达，不正确的选项是()A加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐B让吸管管口沿管壁环绕移动贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面
3、C翻开下端出口，待样品完全进入凝胶层后，直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱D待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，每5 mL收集一管，连续收集流出液解析：样品完全进入凝胶层后，参加磷酸缓冲液到适当高度，再连接缓冲液洗脱瓶，开始洗脱。答案：C4凝胶色谱柱制作的程序一般是()橡皮塞打孔挖凹穴装玻璃管盖尼龙网盖尼龙纱将橡皮塞插入玻璃管接尼龙管、装螺旋夹柱顶插入安装了玻璃管的橡皮塞ABCD解析：凝胶柱制作的一般流程是：选择玻璃管选择适宜的橡皮塞打孔挖凹穴装玻璃管盖尼龙网盖尼龙纱将橡皮塞插入玻璃管接尼龙管装螺旋夹柱顶插入安装了玻璃管的橡皮塞。答案：B5蛋白质的别离与纯化技术是蛋白质研究的重要技术。以下有关表达不正确
4、的选项是()A根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性，可将样品中各种不同的蛋白质别离B根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小等，可通过电泳别离蛋白质C可通过凝胶色谱法别离蛋白质D根据蛋白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法别离蛋白质解析：蛋白质分子不能透过半透膜，而溶液中的小分子物质那么可以透过半透膜，因此透析可以将蛋白质和溶液中的小分子物质别离。答案：A6在提取和别离猪血红蛋白的实验中，应使用()A柠檬酸钠溶液洗涤红细胞，防止红细胞破裂B蒸馏水和甲苯处理红细胞，使其释放出血红蛋白C生理盐水透析血红蛋白溶液，保持血红蛋白活性D生理盐水洗脱，有利于血红蛋白在凝胶柱中移动解析：柠檬酸钠可与血浆中的
5、钙离子结合，防止血液凝固；在蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白；透析用的是磷酸缓冲液；磷酸缓冲液有利于血红蛋白在凝胶柱中移动。答案：B7以下有关提取和别离血红蛋白实验的表达，错误的选项是()A该实验的材料必须选用鸡血B通过透析可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，此为样品的粗别离C凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小别离蛋白质D电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行别离解析：该实验的材料不能选用鸡血，而应选用哺乳动物的血液，因为后者所含的红细胞没有细胞核和众多的细胞器，有利于得到较纯洁的血红蛋白；透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保存在袋内，因此通过
6、透析可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，此为样品的粗别离；凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小别离蛋白质；电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行别离。答案：A8以下关于猪血红蛋白的别离与提取的描述，正确的选项是()A透析的目的是去除样品中分子量较大的杂质B血红蛋白释放后应进行低速短时间离心C蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的移动速度慢D血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法别离过程的监测解析：透析可以除去分子量较小的杂质；血红蛋白释放后，以2 000 r/min的高速离心10 min，从而别离血红蛋白溶液；凝胶色谱法别离蛋白质时，相对分子质量较大的在凝胶外部移动，移动速
7、度快；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况。答案：D9以下关于DNA和血红蛋白的提取与别离实验的表达，错误的选项是()A可用蒸馏水涨破细胞的方法从猪的红细胞中提取到DNA和蛋白质B用不同浓度的NaCl溶液反复溶解与析出DNA可除去局部杂质C透析法别离蛋白质的依据是蛋白质不能通过半透膜D凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来别离蛋白质的有效方法解析：猪是哺乳动物，哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核和线粒体，不能从其红细胞中提取出DNA。答案：A10以下关于血红蛋白提取和别离实验中样品处理步骤的描述，正确的选项是()A红细胞的洗涤：参加蒸馏水，缓慢搅拌，低速短时间离心B血红蛋白的释放：参加生理盐水
8、和甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌C别离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心、过滤后，用分液漏斗别离D透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，然后置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12 h解析：红细胞洗涤过程中应该用生理盐水，不能用蒸馏水；血红蛋白的释放应该参加蒸馏水和甲苯，使红细胞吸水涨破，释放其中的血红蛋白；将搅拌好的混合液通过离心、过滤后，用分液漏斗别离出血红蛋白溶液；透析所用的磷酸缓冲液的pH为7.0。答案：C11以下有关缓冲溶液的说法，不正确的选项是()A缓冲溶液能够抵抗外界任何酸和碱对溶液pH的影响，维持pH根本不变B缓冲溶液通常由12种缓冲剂溶解于水中配制而成C调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不
9、同pH范围内使用的缓冲溶液D生物体内进行的各种生物化学反响都是在一定的pH下进行的解析：缓冲溶液通常由12种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。在一定范围内，缓冲溶液能够抵抗外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH根本不变，但其调节能力有一定的限度。答案：A12某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、所带电荷的性质和数量情况如下图，以下有关该样品中蛋白质的别离的表达，正确的选项是()A将样品装入透析袋中透析12 h，假设分子乙保存在袋内，那么分子丙也保存在袋内B假设用凝胶色谱柱别离样品中的蛋白质，那么分子甲移动速度最快C假设将样
10、品以2 000 r/min的速度离心10 min，分子戊存在于沉淀中，那么分子甲也存在于沉淀中D假设用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳别离样品中的蛋白质分子，那么分子甲和分子戊形成的电泳带相距最远解析：分子甲的相对分子质量最小，会进入凝胶内部通道而移动速度慢；假设分子乙留在透析袋内，说明其相对分子质量比拟大，分子丙比分子乙相对分子质量大，所以分子丙也留在袋内；分子戊比分子甲的相对分子质量大，分子戊存在于沉淀中分子甲可能不在沉淀物中；SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中的样品，其电泳迁移率完全取决于分子的大小，相对分子质量相差越大，形成的电泳带相距越远，故分子甲和分子丙形成的电泳带相距最远。答案：A二、非选择题1
11、3电泳技术和凝胶色谱法都可对蛋白质进行别离。答复以下问题：(1)利用琼脂糖凝胶电泳技术对蛋白质进行别离时，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的_以及分子的形状等。 (2)图1、图2分别表示对同一样品别离得到的结果，那么图2中曲线与图1中蛋白质P相对应的是_。解析：(1)电泳时，影响蛋白质迁移的因素有蛋白质分子的大小、带电性质和所带净电荷量及分子的形状等。(2)SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳装置是垂直的装置，电泳时蛋白质的迁移率主要取决于蛋白质相对分子质量的大小，相对分子质量小的蛋白质分子，移动距离大，因此从图1的电泳结果分析，蛋白质P比蛋白质N、M移向“极的距离大，说明蛋白质P的相
12、对分子质量比拟小，因此其从层析柱中洗脱出来的时间较长，图2中的曲线c符合。答案：(1)大小、带电性质和所带净电荷量(2)c14对蛋白质进行研究和应用，首先需要获得高纯度的蛋白质。请答复以下问题：(1)蛋白质的提取和别离一般分为四步：_、_、_和纯度鉴定。(2)在血红蛋白的提取与别离实验中，采集新鲜血液前要在采血容器中参加柠檬酸钠溶液的目的是_。(3)样品的处理过程又可以细分为：红细胞的洗涤、_和别离血红蛋白溶液。其中别离血红蛋白溶液时需要用到_(仪器)分出下层红色透明液体。(4)收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析进行粗别离。透析的目的是_；透析的原理是_。(5)然后通过凝胶色谱法将样品进
13、一步纯化，最后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。样品纯化的目的是_；血红蛋白的特点是_；这一特点对别离血红蛋白的意义是_。解析：透析袋能使小分子物质自由进出，而大分子物质被保存在袋内，所以透析可以除去相对分子质量较小的杂质；样品纯化的目的是通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去；血红蛋白呈现红色，在用凝胶色谱法别离时可以通过观察颜色来判断收集洗脱液的时期；同时，通过观察颜色，使血红蛋白的别离过程更直观，大大简化了实验操作。答案：(1)样品处理粗别离纯化(2)防止血液凝固(3)血红蛋白的释放分液漏斗(4)去除相对分子质量较小的杂质透析袋能使小分子自由进出，而大分子那么被留在袋内(5)
14、通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂蛋白除去呈现红色在用凝胶色谱法别离血红蛋白时，可以通过观察颜色来判断什么时期该收集洗脱液，这使血红蛋白的别离过程非常直观，大大简化了实验操作15如图表示血红蛋白提取和别离实验的局部装置或操作方法，请答复以下问题：(1)为了提取和别离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤以去除杂质蛋白，洗涤时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是_。(2)图甲表示_过程，该操作目的是去除样品中_的杂质。现有一定量的血红蛋白溶液，进行上述操作时假设要尽快到达理想的实验效果，可以_(写出一种方法)。一段时间后，假设向烧杯中参加双缩脲试剂，透析袋内溶液是否出现紫色，并说明判断的依据：_。(3)
15、图乙是凝胶色谱法别离血红蛋白时样品的参加示意图，正确的加样顺序是_。在进行操作时要_(填“翻开或“关闭)下端出口。(4)图丙为用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果。根据电泳结果，某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链的结论，这种说法可靠吗？理由是_。解析：(1)生理盐水与红细胞内液为等渗溶液，故用其洗涤红细胞主要是防止红细胞吸水破裂。(2)图甲表示血红蛋白粗提取过程，也称为透析过程。透析可以去除样品中分子量较小的杂质；假设要尽快到达理想的透析效果，可采用增加缓冲液的量或及时更换缓冲液等方法。透析袋是一种半透膜，双缩脲试剂可以透过半透膜，进入袋内与血红蛋白反响，生成紫色物质。(3)根据教材中往色谱柱中加样的顺序可知，正确的排序为；图中进行操作是在样品上部添加缓冲液，此时要关闭下端出口。(4)电泳的原理是利用待别离样品中各种分子带电性质的差异以及分子的大小、形状等的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，本实验只能判断肽链的大小，而不能判断其条数。答案：(1)防止红细胞吸水破裂(2)透析(粗别离)分子量较小增加缓冲液的量(或及时更换缓冲液)出现紫色，因为双缩脲试剂可以透过半透膜，与袋内血红蛋白反响，生成紫色物质(3)关闭(4)不可靠。只能得出提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链，不一定是两条