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1、血红蛋白的提取和分离基础过关知识点一蛋白质分离技术1电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷_方向的电极移动()A相同B相反C相对D相向2凝胶色谱法是分离蛋白质分子的一种常用方法,但并非所有的蛋白质都可以用此方法进行分离,能分离的蛋白质分子之间必须()A具有相同的相对分子质量B相对分子质量不同,但都是相对分子质量较大的分子C相对分子质量不同,但都是相对分子质量较小的分子D具有不同的相对分子质量3凝胶色谱分离法分离蛋白质时,凝胶的种类较多,但其作用的共同点是()A改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B吸附一部分蛋白质,从而影响蛋白质分子的移动速度C将酶或细胞固定在凝胶中D与蛋白质分子进行化学反应
2、,从而影响其移动速度4下列各项中,一般不影响在凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是()A层析柱高B层析柱的直径C缓冲溶液D样品的分布知识点二血红蛋白的提取和分离5洗涤红细胞时,离心所采用的方法是()A低速长时间离心B低速短时间离心C高速长时间离心D高速短时间离心6对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作,不正确的是()A加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐B让吸管管口沿管壁环绕移动,贴壁加样至色谱柱顶端,不要破坏凝胶面C打开下端出口,待样品完全进入凝胶层后,直接连接缓冲液,洗脱瓶开始洗脱D待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,每5 mL收集一管,连续收集流出液7在蛋白质的提取和分离中,关于对样品处
3、理过程的分析正确的是()A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B洗涤时离心速度过小,时间过短,白细胞等会沉淀,达不到分离的效果C洗涤过程选用0.1%的生理盐水D透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质8将处理破裂后的红细胞混合液以2 000 r/min的速度离心10 min后,离心管中的溶液分为四层,从上到下的顺序依次是()A血红蛋白、甲苯层、脂质物质层、细胞破碎物沉淀层B甲苯层、细胞破碎物沉淀层、血红蛋白、脂质物质层C脂质物质层、血红蛋白、甲苯层、细胞破碎物沉淀层D甲苯层、脂质物质层、血红蛋白、细胞破碎物沉淀层能力提升9使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中,相对分子质量不同的蛋白质在凝
4、胶中的行进过程,可表示为图中()10蛋白质的分离与纯化是蛋白质研究的重要技术。下列有关叙述不正确的是()A根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性,可将样品中各种不同的蛋白质分离B根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小等,可通过电泳法分离蛋白质C根据蛋白质相对分子质量的大小,可通过凝胶色谱法分离蛋白质D根据蛋白质的分子大小、密度不同,可通过离心沉降法分离蛋白质11凝胶柱制作的顺序一般是()橡皮塞打孔挖凹穴装玻璃管盖尼龙网盖尼龙纱将橡皮塞插入玻璃管 接尼龙管、装螺旋夹柱顶插入安装玻璃管的橡皮塞ABCD12.下列关于电泳的说法,不正确的是()A电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B带电分子会向着
5、与其所带电荷相反的电极移动C蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少D用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小13下列操作正确的是()A分离红细胞时采用低速长时间离心B红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水即可C分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D透析时要用20 mmol/L的磷酸缓冲液,透析12 h14红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:(1)血红蛋白提取和分离的过程可分为四步:_、_、_和_。(2)
6、实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是_。以上所述的过程即是样品处理,它包括_、_、收集血红蛋白溶液。(3)洗涤红细胞的目的是_。(4)你如何知道红细胞已洗涤干净?_。(5)分离红细胞时的离心速度及离心时间分别是_。(6)若离心速度过高和时间过长结果会怎样?_。(7)将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析,即样品的粗分离。透析的目的是_。透析的原理是_。(8)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。样品纯化的目的是_。15如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置,请据图回答
7、下列问题。(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,它在红细胞中的作用体现了蛋白质具有_功能。(2)甲装置中,B是血红蛋白溶液,则A是_;乙装置中,C溶液的作用是_。(3)甲装置用于_,目的是_。用乙装置分离蛋白质的方法叫_,是根据_分离蛋白质的有效方法。(4)用乙装置分离血红蛋白时,待_时,用试管收集流出液,每5 mL收集一管,连续收集。个性拓展16商品化植酸酶主要来自微生物,首先筛选出产酶的菌株,然后制备植酸酶,请根据下面的流程图回答问题:(1)中的主要成分有哪些?_;中包含哪些成分?_。(2)请写出一种纯化得到植酸酶的方法:_;其依据是_。5答 案1B2.C3.A4.B5.B
8、6.C7.D8.D9.B10.A11.B12.C13.D14(1)样品处理粗分离纯化纯度鉴定(2)防止血液凝固红细胞的洗涤血红蛋白的释放(3)去除血浆蛋白(4)离心后的上清液没有黄色(5)低速500 r/min;短时间如2 min(6)离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀,得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度(7)去除分子量较小的杂质透析袋能使小分子自由进出,而大分子则保留在袋内(8)通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去15(1)运输(2)磷酸缓冲溶液洗脱血红蛋白(3)透析(粗分离)去除样品中相对分子质量较小的杂质凝胶色谱法相对分子质量的大小(4)红色的蛋白质接近色谱柱的底端16(1)小分子杂质含植酸酶等多种蛋白质(2)凝胶色谱法根据蛋白质之间分子大小、吸附性质等差异进行纯化(或电泳法根据蛋白质之间电荷、分子大小等差异进行纯化)