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1、传染病实验报告一、实验材料:病鸭、镊子、剪刀、托盘、普通平板、麦康凯平板、血平皿、接种环、酒精灯、药敏纸片、生化管、注射器、小白鼠二、实验方法：病理解剖观察、病料接种培养、特殊平板培养、生化实验、药敏试验、动物实验、玻板凝集实验(演示）三、实验内容及步骤：(一) 病理解剖观察:1、 观察鸭子的天然孔道，是否有异常黏液分泌2、打开病鸭腹腔，采用“三刀法打开腹腔（两只鸭腿与腹部交接的地方各剪一刀，腹部中间再剪一刀）。同时注意观察皮下及胸、腿部肌肉有无异常（如出血、皮下水肿等)。3、检查皮下及肌肉：观察皮下与肌肉是否有出血坏死，皮下是否有渗出物等.4、检查体腔与内脏:注意体腔内、气囊是否有异物，是否
2、增厚、有绿斑、出血等现象,内脏器官的体积、颜色、性质是否异常.（1）呼吸系统：主要检查鼻腔内是否有异常分泌物;气管是否有出血环，有异常黏液分泌；肺脏颜色形状是否正常，是否有出血坏死肿大等现象。（2）消化系统：口腔是否有黏液;食道是否有出血，坏死灶溃疡；肌胃腺胃是否出血有坏死灶，乳头是否肿胀；肠道是否有充血出血坏死灶；肝脏是否发坏生变性，肿大，有无出血点，出血斑,坏死等异常；胰脏是否有出血,坏死。 （）泌尿系统:主要检查肾脏,是否肿大，有出血坏死尿酸盐沉积。 (）心血管系统:心脏的颜色,是否有心包积液;各处血管是否有充血现象. （5）淋巴系统:检查胸腺、法氏囊是否肿大出血；肠道淋巴结及盲肠扁桃体
3、是否异常。（6）神经系统：检查颅腔脑是否肿大，积液，脑膜有无异常；神经粗细颜色。（二） 病料接种培养 1、选取病变明显典型的部位接种,大鸭子选取脑、肝、脾、肺接种，小鸭子选取接种,并将血平皿划分成相应的几部分做好标记. 2、将接种环酒精灯灭菌,蘸取相应部位,使用“Z”形划线接种法划线接种。每蘸取一个部位后都要进行酒精灯燃烧灭菌，接种时应在酒精灯周围进行。 3、将接种好的血平皿放置在37恒温下培养4小时后取出观察菌落生长情况。 (三）特殊平板培养 1、选取病变明显典型的部位接种，大鸭子选取脑、肝、脾、肺接种,小鸭子选取接种,并将麦康凯平板划分成相应的几部分做好标记。 2、将接种环酒精灯灭菌，蘸取
4、相应部位,使用“Z”形划线接种法划线接种。 3、将接种好的麦康凯平板放置在3恒温下培养2小时后取出观察其生长情况。 (四)生化实验 、选取（二）。3中培养好的细菌，大鸭子选取 接种的细菌，小鸭子选取两种不同菌落形态的细菌。2、将接种环灭菌蘸取相应细菌至生化管，37恒温，24小时后拿出观察。(五）药敏试验取适量培养的细菌与一定生理盐水混合均匀，用棉签蘸取后涂布于普通平板上;待平板上的菌液晾干后，将带有卡那霉素、氨苄西林、氟苯尼考、头孢曲松、多西霉素、恩诺沙星、磺胺甲基异恶唑的药敏纸片贴于平板上；3将贴好药敏纸片的平板放于37恒温箱中培养24小时后观察结果。 （六)动物试验 、在管中加入适量的生理
5、盐水,选取（二)。3中培养好的细菌，大鸭子选取 接种的细菌,小鸭子选取两种不同菌落形态的细菌,用灭菌后的接种环分别蘸取至EP管中，混匀制成菌液。 、分别用一次性注射器将三种菌液分别注入三只小鼠体内（皮下注射,注射时要缓慢推进以防局部积液)，并将小鼠做好标记。24小时后观察小鼠病理特征. （七）玻板凝集实验（演示实验) 1、分别编号1号，2号,号。再分别往1号,2号，3号玻片中加入40ul抗原，0l抗原,40ul生理盐水。其中3号作为对照。 、分别往1号，号加入10ul血清,5ul血清，号不加血清。一段时间后观察现象。四、实验结果（一） 病理解剖观察1、大鸭子：呼吸系统：气管出血；肺脏有出血点。
6、消化系统： 食道充血;胃浆膜面出血;，肠道表面充血出血,肠系膜出血；肝脏肿胀，质脆易碎，表面斑驳有针尖大小的坏死灶;胰脏有透明样坏死灶;气囊广泛出血。泌尿系统： 肾脏质脆易碎，花斑肾。心血管系统：心包黄色积液,有出血点,心冠脂肪出血。淋巴系统：胸腺肿大;法氏囊有出血斑;脾脏肿大，呈大理石样变.神经系统:脑充血,神经无明显症状。2、小鸭子：呼吸系统：气管出血；肺脏出血；气囊均有出血斑。消化系统:食道充血；腺胃肌胃出血;肝脏肿大,有针尖大小坏死灶，颜色布局不均匀,质脆；肠道黏膜充血出血，肠系膜出血;泄殖腔出血,胰腺有针尖大小坏死灶,透明样坏死。泌尿系统:肾脏质脆，花斑肾.心血管系统:心脏心包积液，
7、心冠脂肪出血，心脏有出血点,充血严重。淋巴系统:胸腺肿大;脾脏肿大有坏死灶，成大理石样；法氏囊有出血点。神经系统：神经无明显症状。（二） 病料接种培养（血平皿培养）1、大鸭子平板：菌落均呈乳白色,光滑，圆形菌落，无溶血现象.2、小鸭子平板；有两种形态菌落，一种呈光滑透明圆形菌落,一种呈光滑灰白菌落有溶血现象.（三）特殊平板培养麦康凯培养基培养:大鸭子接种菌生长较好,呈红色；小鸭子接种菌白色菌呈灰白色生长.（四)生化实验实验中接种的三套可疑菌落生化管为如下结果：试剂/菌种甘露醇鼠李糖蔗糖半乳糖果糖葡萄糖大鸭，+，+，+，+小鸭(白色菌落)，+，+，+，+-小鸭（透明菌落），+,+，+，+，+注：
8、 阳性或产酸；+ 产酸又产气;- 阴性或不发酵。大肠杆菌:能发酵多种碳水化合物产酸产气,大多数菌种可迅速发酵乳糖和山梨醇,仅极少数迟发酵或不发酵；约半数菌株不分解蔗糖。沙门氏菌:发酵葡萄糖，麦芽糖，甘露醇和山梨醇产气；不发酵乳糖、蔗糖链球菌：能发酵简单的糖类,产酸不产气。巴氏杆菌：可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖,产酸不产气;一般发酵乳糖、鼠李糖、水杨苷、肌醇、菊糖。(五)药敏试验二、 实验结果（1)大鸭抑菌圈直径（mm）判定标准耐药 中介 敏感卡那霉素2413 1417 18氨苄西林5 13 14 17氟苯尼考 2 1317 18头孢曲松 19 222 23多西环素2 1 315 1
9、6恩诺沙星515 6-20 1磺胺甲基异恶唑812 1316 17（2） 小鸭（白色菌落）抑菌圈直径(mm）判定标准耐药 中介 敏感卡那霉素13 1-7 18氨苄西林13 -16 17氟苯尼考1312 137 18头孢曲松1519 202 23多西环素12 3-15 6恩诺沙星5 160 21磺胺甲基异恶唑302 1316 17（3） 小鸭（透明菌落）抑菌圈直径（mm)判定标准耐药 中介 敏感卡那霉素73 141 1氨苄西林71 14- 17氟苯尼考12 317 18头孢曲松 2022 23多西环素72 35 恩诺沙星15 16-20 21磺胺甲基异恶唑12 116 （六）动物实验解剖后病理特
10、征：1、小鼠1号（接种大鸭子菌）：皮下出血，有胶冻样物质；心脏出血严重;肝脏出血肿大；肠粘膜出血;肾脏出血；肺脏出血;胃出血；脾脏肿大.2、小鼠2号（接种小鸭子无色菌）：打开腹腔有恶臭味；皮下有胶冻样物质；心脏有出血充血；肝脏表面斑驳，有坏死灶；胃充血；肠道充血；肺脏充血出血；肾脏肿大。3、小鼠3号（接种小鸭子白色菌）:心脏出血;肺脏出血;肝脏肿大出血；胃出血；脾脏肿大；肠系膜出血;胰腺出血质脆易碎；肾脏肿大出血. (七)玻板凝集实验(演示实验)1号凝集现象最明显,号凝集现象不明显，3号无凝集现象。五、 结果与分析1、 大鸭子的分析：特征病理病变为肝脏肿胀,质脆易碎，表面斑驳有针尖大小的坏死灶
11、；胰脏有透明样坏死灶。心脏心包积液；肺脏出血;气囊出血.其菌落在麦康凯上生长为红色生长良好。其动物实验病理症状呈全身性败血变化和皮下胶冻样渗出。综合生化与药敏，初步怀疑为沙门氏菌与大肠杆菌的混合感染.沙门氏菌造成全身性败血变化，大肠杆菌可能造成皮下腹腔胶冻样渗出。、小鸭子分离出两种菌落.白色菌落在血平皿上有溶血现象,镜检形态为球状,呈链状排列.接种动物病变呈全身性败血,初步怀疑为链球菌.小鸭病理病变主要有全身性败血变化，胰腺有针尖大小坏死灶, 肾脏质脆,花斑肾。心脏心包积液,胸腺肿大;脾脏肿大有坏死灶,成大理石样。接种无色菌落在麦康凯上不生长，在动物实验打开腹腔有恶臭味；皮下有胶冻样物质;肝脏表面斑驳，有坏死灶;肾脏肿大,其他部位呈全身性败血变化。综合生化和药敏实验初步怀疑为巴氏杆菌。所以小鸭可能是链球菌和巴氏杆菌的混合感染。