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1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。第二十一章 化学发光免疫技术Chapter 21 Chemiluminescence Immunoassay 第一部分 教学内容和要求一、 目的要求掌握: 发光酶免疫分析、 化学发光免疫分析、 电化学发光免疫分析的原理; 熟悉: 化学发光免疫技术的方法评价和在医学检验中的应用; 了解: 各种化学发光免疫技术类型的技术要点、 发光现象、 化学发光剂种类及化学发光标记物的制备。二、 教学内容1。发光与化学发光剂: 发光, 化学发光剂, 化学发光标记物的制备。2。发光酶免疫分析: 原理, 技术要点, 方法学评价。3。化学发光免疫分析: 原
2、理, 技术要点, 方法学评价。4电化学发光免疫分析: 原理, 技术要点, 方法学评价。5化学发光免疫技术在医学检验中的应用。第二部分 测试题一、 选择题( 一) 单项选择题( A型题) 1.化学发光免疫检测的物质不包括A.甲状腺激素 B.生殖激素C.肿瘤标志物 D.血清IgG含量E.血清总IgE含量2. 常见的HRP发光底物为A.鲁米诺或其衍生物 B.AMPPDC.4-MUP D.吖啶酯E.三联吡啶钌3. 常见的ALP化学发光底物为A.鲁米诺或其衍生物 B.对-羟基苯乙酸C.AMPPD D.吖啶酯E.三联吡啶钌4.电化学发光剂为A.鲁米诺或其衍生物 B.对-羟基苯乙酸C.4-MUP D.吖啶酯
3、E.三联吡啶钌5.不需酶催化反应即可发光的发光底物是A.鲁米诺 B.吖啶酯C.三联吡啶钌 D.鲁米诺衍生物E.4-MUP6.4-MUP在ALP催化下生成4-甲基伞形酮, 在激发光作用下发出荧光的波长为A.448nm B.360nmC.525nm D.570nmE.640nm7.电化学发光免疫分析中, 电化学反应进行在A.液相中 B.固相中C.电极表面上 D.气相中E.电磁铁表面8.关于微粒子荧光酶免疫测定检测AFP,下列描述错误的是A.常见的检测方法是双抗体夹心法 B.以微珠作为载体包被抗体C.发光底物为AMPPD D. 常见的标记酶为碱性磷酸酶E.检测时激发波长为360nm9.关于电化学发光
4、免疫分析,下列描述错误的是A.是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应B.包括了电化学反应和光致发光两个过程C.化学发光剂主要是三联吡啶钌Ru(bpy)32+D.检测方法主要有双抗体夹心法、 固相抗原竞争法等模式E.以磁性微珠作为分离载体10.化学发光免疫分析的标记物为A.碱性磷酸酶 B.三联吡啶钌Ru(bpy)32+C.吖啶酯 D.鲁米诺E.鲁米诺衍生物11.参与三联吡啶钌电化学发光过程的物质是 A.碱性磷酸酶 B.三丙胺 C.吖啶酯 D.鲁米诺E.HRP12.化学发光免疫分析的分类依据主要是A.按检测所需的时间长短分类 B.按所检测的物质类型分类C.按检测反应的体系分类 D.按所采
5、用的发光反应体系和标志物不同分类E.按检测反应所采用的分离方法分类13.化学发光酶免疫分析中对鲁米诺和过氧化氢起催化作用的酶是A.ALP B.HRPC.LDH D.ALTE.ACP14.关于电化学发光免疫测定检测血清HCG含量, 下列描述错误的是A.常见的检测方法是双抗体夹心法 B.常见磁分离技术C.标记物是ALP-抗HCG抗体 D.B/F分离剂是抗HCG抗体包被的磁颗粒E.发光反应需要三丙胺参与15.用化学发光免疫测定技术中固相抗原竞争法测定CEA, 若标本中CEA量越多, 则A.形成的固相抗原-标记抗体复合物越少 B.形成的固相抗原-标记抗体复合物越多C.待测的标本抗原-标记抗体复合物越少
6、D.游离的固相抗原越少E.游离的标记抗体越多16.血清总IgE的定量分析不能采用的方法是A.ELISA B.化学发光酶免疫测定C.散射比浊免疫测定 D.电化学发光免疫测定E.放射免疫分析17.以ALP为标记的化学发光酶免疫技术测定HBsAg, 影响测定结果的情况是A.用非抗凝剂的血清 B.肝素钠抗凝血浆C.EDTA抗凝血浆 D.肝素锂抗凝血浆E.用分离胶分离的血清18.可增强HRP催化鲁米诺氧化反应和延长发光时间, 提高发光敏感度的物质是A. 萤火虫荧光素酶 B.H2O2C. 对-羟基苯乙酸 D.4-MUPE. 三联吡啶钌19.有关化学发光免疫分析测定血清AFP的描述, 正确的是A.标记物是吖
7、啶酯标记抗AFP抗体 B.B/F分离采用PR沉淀试剂法C.发光促进剂是萤火虫荧光素酶 D.常采用间接法E.化学发光的条件是发光体系呈酸性20.在微粒子荧光酶免疫分析中, 作用于荧光底物4-MUP的标记酶是A.ALP B.HRPC.萤火虫荧光素酶 D.过氧化氢酶E.葡萄糖氧化酶( 二) 多项选择题( X型题) 1.化学发光免疫技术的方法学类型包括A.时间分辨荧光免疫测定 B.化学发光免疫测定C.荧光偏振免疫测定 D.化学发光酶免疫测定E.电化学发光免疫测定2. 发光免疫技术的方法学类型包括A.时间分辨荧光免疫测定 B.化学发光免疫测定C.荧光偏振免疫测定 D.化学发光酶免疫测定E.电化学发光免疫
8、测定3.可用于HRP的发光底物包括A.鲁米诺或其衍生物 B.对-羟基苯乙酸C.4-MUP D.吖啶酯E.三联吡啶钌4.ALP的常见发光底物包括A.鲁米诺或其衍生物 B.AMPPD C.4-MUP D.吖啶酯E.三联吡啶钌5. 在发光酶免疫分析中, 抗原抗体反应模式主要有A.固相抗原竞争法 B.双抗体夹心法C.双抗原夹心法 D.PAP法E.补体法6.在化学发光免疫技术中, 常见的B/F分离技术包括A.磁颗粒分离法 B.微粒子捕获法C.PEG沉淀法 D.PR试剂法E.包被珠分离法7.吖啶酯的发光特点包括A.发光背景噪音低 B.化学反应简单C.发光反应快速而无需催化剂 D.发光反应易受标本中抗凝剂(
9、 如EDTA) 影响E.易受血清非特异性酶的影响8.在化学发光酶免疫测定技术中, 常见的标记酶有A.LDH B.ALPC.HRP D.glucose oxidaseE.acid phosphatase9.化学发光免疫分析一般见于A.甲状腺激素检测 B.生殖激素检测C.肿瘤标志物分子检测 D.贫血因子检测E.淋巴细胞亚群检测10.有关发光底物4-MUP发光特点的描述, 正确的是A.4-MUP在ALP催化下生成4-甲基伞形酮B.激发光波长为360nmC.荧光波长为448nmD.需要H2O2参与发光反应E.需在弱碱性的环境下才能发光11.关于电化学发光免疫分析, 下列描述正确的是A.是一种在电极表面
10、由电化学引发的特异性化学发光反应B.包括了电化学和化学发光两个过程C.化学发光剂是三联吡啶钌Ru(bpy)32+D.检测方法主要有双抗体夹心法、 固相抗原竞争法等模式E.采用磁颗粒分离技术12.下列关于化学发光免疫分析描述, 正确的是A.双抗体夹心法是用固相抗体和标记抗体与待测标本中相应抗原反应B.双抗体夹心法分析其检测的发光量与待测的抗原含量成反比C.固相抗原竞争法常见于小分子抗原的测定D.固相抗原竞争法分析其检测的发光量与待测的抗原含量成正比E.双抗体夹心法常见于大分子抗原的测定13.化学发光酶免疫技术采用双抗体夹心法测定血清AFP, 若血清中AFP含量越多, 则A.形成的固相抗体-抗原-
11、标记抗体越多B.形成的固相抗体-抗原-标记抗体越少C.游离的固相抗体越少D.游离的标记抗体越少E.游离的标记抗体越多14.作为化学发光剂应具备的条件包括A.能参与化学发光反应B.能与抗原或抗体偶联后形成稳定的结合物C.偶联后仍保持高的量子效应和反应动力D.能参与抗原抗体反应E.不改变或极少改变被标记物的免疫活性15.属于化学发光现象的是A.FITC在激发光作用下发出荧光 B.对-羟基苯乙酸被HRP氧化而发光C.萤火虫发光 D.AMPPD在碱性条件下被ALP酶解而发光E.吖啶酯在稀碱溶液中发光二、 填空题1.化学发光免疫技术根据发光方式不同分为 、 和 。2.根据形成激发态分子的激发能可将发光分
12、为三种类型 、 和 , 发光剂分为 、 和 三种。3.HRP常见的发光底物为 ; ALP常见的发光底物为 和 。4.发光酶免疫分析的技术要点包括 、 和 三个过程。5.发光酶免疫分析常见的标记酶有 和 ,根据酶促反应底物不同, 发光酶免疫分析可分为 和 。6.电化学发光免疫分析是 和 相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般化学发光不同, 是一种在电极表面由 引发的特异性化学发光反应, 实际上包括了 和 两个过程。ECL经过 启动发光反应, 而CL是经过 启动发光反应。三、 名词解释1.发光免疫技术(luminescence immunoassay) 2.化学发光免疫技术(chemilumi
13、nescence immunoassay, CLIA) 3.发光(luminescence) 4.发光剂 (luminescence reagent) 5.化学发光酶免疫测定(chemiluminescence enzyme immunoassay)四、 问答题1.简述化学发光免疫分析的原理。2.简述电化学发光免疫分析的原理。3.化学发光与荧光的根本区别是什么?简述化学发光的基本原理。4.标记用的化学发光剂应符合什么条件? 5.在化学发光标记免疫测定中, 使用吖啶酯作为标记物有何优点? 第三部分 参考答案与题解一、 选择题( 一) 单项选择题( A型题) 1.D 2.A 3.C 4。E 5.B
14、 6.A 7.C 8.C 9.B 10.C 11.B 12.D 13.B 14.C 15.A 16.C 17.C 18.A 19.A 20.A ( 二) 多项选择题( X型题) 1.BDE 2.ABCDE 3.AB 4.BC 5.ABC 6.ABE 7.ABC 8.BC 9.ABCD 10.ABC 11.ABCDE 12.ACE 13.ACD 14.ABCE 15.BDE二、 填空题1.化学发光酶免疫分析、 化学发光免疫分析和电化学发光免疫分析2.光照发光、 生物发光、 化学发光, 荧光素、 生物发光剂、 化学发光剂3.鲁米诺、 AMPPD、 4-MUP4.抗原抗体反应、 标记物游离部分和结合
15、部分分离、 酶促发光反应及检测5.ALP、 HRP, 荧光酶免疫分析、 化学发光酶免疫分析6.电化学发光、 免疫测定, 电化学、 电化学、 化学发光, 电、 化合物混合三、 名词解释1.发光免疫技术: 是将发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。这种方法不但具有发光分析的高灵敏度而且具有抗原抗体反应的高度特异性, 包括光致发光免疫技术和化学发光免疫测定技术。2. 化学发光免疫技术: 是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。该方法不但具有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性,而且还具有分离简便,能够实现自动化分析的特点, 包括发光酶免疫分析、 化学发光
16、免疫分析和电化学发光免疫分析。3. 发光: 一种物质由电子激发态回复到基态时, 释放出的能量表现为光的发射, 称为发光。分为光照发光、 生物发光和化学发光。4. 发光剂: 是指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物, 分为荧光素、 生物发光剂和化学发光剂。5. 化学发光酶免疫测定: 是采用以催化反应参与发光的酶如HRP或ALP作为标记物, 标记检测用的抗原或抗体, 待测标本与检测试剂进行免疫反应后, 形成酶标抗原抗体复合物, 结合在复合物上的酶催化其底物发生反应并产生发光效应。四、 问答题1.化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记的抗原或抗体与待测标本中相应抗体或抗原、
17、 磁颗粒性的抗原或抗体反应, 经过磁场把结合状态( B) 和游离状态( F) 的化学发光剂标记物分离开来, 然后在结合状态( B) 部分中加入发光促进剂进行发光反应, 经过对结合状态( B) 发光强度的检测进行定量或定性检测。2.电化学发光免疫分析是电化学发光和免疫测定相结合的技术, 是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应, 实际上包括了电化学和化学发光两个过程。ECL是电启动发光反应。化学发光剂三联吡啶钌Ru(bpy)32+标记抗体, 经过抗原抗体反应和磁颗粒分离技术, 根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度的大小对待测的抗原或抗体进行定量或定性验测。3.化学发光和荧光的根本区别是形成
18、激发态分子的激发能原理不同, 荧光是发光物质吸收了激发光后使分子产生发射光, 化学发光是化学反应过程中所产生的化学能使分子激发产生的发射光。化学发光反应系统中以化学反应为基础, 首要条件是吸收了化学能而处于激发态的分子或原子必须能释放出光子或者能将能量转移到另一个物质的分子上并使这种分子激发, 当这种分子回到基态时能释放出光子。4.能参与化学发光反应; 与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂; 偶联后仍保持高的量子效应和反应动力; 应不改变或极少改变被标记物的理化性质, 特别是免疫活性。5.氧化反应不需催化剂, 只要在碱性环境中就可进行, 发光反应迅速, 本底低; 在氧化反应中, 结合物被分解, 因此游离的吖啶酯的发光不受抑制; 试剂稳定性好。 (陶志华 林向阳)