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1、半薄切片技术介绍第1页，本讲稿共18页半薄切片图片第2页，本讲稿共18页钙化骨组织切片 眼球附近组织的连续切片 第3页，本讲稿共18页半薄切片：(厚度为 0.5m 1m)第4页，本讲稿共18页半薄切片进行光学显微镜观察的目的：可以根据半薄切片精确定位。了解样品包埋质量，以确定是否继续做超薄切片；与石蜡切片、超薄切片进行对比研究第5页，本讲稿共18页半薄切片的优点：克服了超薄切片的盲目性和电镜视野的局限性清晰度、分辨率远优于石蜡切片，视野也大于超薄切片，有利于获得高质量的光镜图像也是电镜超薄切片技术中一种有效的定位方法。第6页，本讲稿共18页电镜超薄技术中如何应用呢？电镜是观察组织细胞超微结构的
2、一种手段。但由于切片太小，有时难于观察到目标结构，为此需大量制备样品，造成工作量大且消耗多。为使超薄切片能精确地切到目标部位，在做超薄切片前要做半薄切片来进行定位。第7页，本讲稿共18页应用：胚胎学，病理学，动植物细胞学研究中一种普遍的切片方式第8页，本讲稿共18页半薄切片主要步骤半薄切片主要步骤取材取材固定固定漂洗、脱水漂洗、脱水渗透、包埋渗透、包埋半薄切片半薄切片半薄切片染色半薄切片染色每一步都是关键每一步都是关键,任何任何环节的环节的疏疏忽忽都会导致制片都会导致制片的的失败失败第9页，本讲稿共18页FAA固定液固定液制备：福尔马林5-冰醋酸5-70%酒精90应用：半薄/石蜡切片适用：一般
3、固定根、茎、叶、花药、子房组 织切片。补充说明：幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，防止材料收缩；加入5%甘油可防固定液蒸发和材料变硬。第10页，本讲稿共18页卡诺固定液卡诺固定液12纯酒精15ml30ml氯仿5ml 冰醋酸5ml1ml渗透迅速，固定根尖和花药只需渗透迅速，固定根尖和花药只需30-60分钟，但固分钟，但固定时间不能太久，一般不超过一天定时间不能太久，一般不超过一天第11页，本讲稿共18页Leica RM2265旋转薄切片机第12页，本讲稿共18页Leica RM2265旋转薄切片机制作半薄切片（厚度0.25-5m）使用步骤：1接通电源，打开主开关2选择切片厚度3安放包埋块于切片
4、头中央位置，旋转固定螺丝，将样品按要求固定挟紧4安放粘有水槽的玻璃刀，并将玻璃刀口对准样品5选择切片模式（自动/手动），切片计数开始6取切片的材料：捞片，置于载玻片上，加热，脱树脂处理，对材料染色，着色后冲洗、封藏、烘干第13页，本讲稿共18页半薄切片染色半薄切片染色常规染色方法有：甲苯胺兰染色法、天青美兰染色法、碱性复红法、苏木素-伊红法、HE染色法和Giemsa染色法等。无论哪种方法都需预先做处脱树脂处理，否则染料不宜渗入，影响染色效果。第14页，本讲稿共18页脱树脂处理：过程将干燥切片插入氢氧化钾无水酒精饱和溶液l015 min后，无水酒精洗三次，经梯度酒精下行，水洗后染色。此过程即繁琐
5、又费时，所以选择理想的染色剂非常重要。第15页，本讲稿共18页染色方法染色方法现现 象象番红固绿对染法番红固绿对染法木质化的细胞壁及细胞核木质化的细胞壁及细胞核红红纤维素的细胞壁及细胞壁纤维素的细胞壁及细胞壁绿绿铁矾苏木精法铁矾苏木精法细胞一般结构及细胞分裂时期细胞一般结构及细胞分裂时期的优良染剂，细胞分裂时期的的优良染剂，细胞分裂时期的染色体染成染色体染成黑色黑色高碘酸席夫反应法高碘酸席夫反应法（PAS法）法）植物组织染成不同程度的红色，植物组织染成不同程度的红色，可将纤维素细胞壁及淀粉粒染可将纤维素细胞壁及淀粉粒染成成红色红色第16页，本讲稿共18页细胞壁的染料细胞壁的染料酸性品红酸性品红 番红番红 固绿固绿 甲苯胺蓝甲苯胺蓝 苏木苏木精精 结晶紫结晶紫 亮绿亮绿 苏丹苏丹IV细胞核染料细胞核染料（碱性）（碱性）碱性品红碱性品红 苏木精苏木精 洋红洋红 番红番红 地衣红地衣红 结晶紫结晶紫 细胞质染料细胞质染料（酸性）（酸性）酸性品红酸性品红 甲苯胺蓝甲苯胺蓝 曙红曙红 固绿固绿 苦味苦味酸酸各种荧光染料各种荧光染料染色原则：先用碱性染料染再用酸性染料染染色原则：先用碱性染料染再用酸性染料染第17页，本讲稿共18页 谢谢！第18页，本讲稿共18页