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1、实验动物科学设计大纲实验名称:C57BL/6小鼠繁殖性能的观察研究主题来源:可选设计类：设计师:XXX日期:2指导老师:XXXX1.实验设计的目的和意义，实验设计的目的和意义，国外研究现状，存 在的问题，解决问题的思路。目的:研究C57BL/6小鼠的繁殖性能，以提高受孕率，实现最正确配种。.国外研究现状：C5BL/6小鼠是little于1921年利用遗传学原理，以毛色基因为标记培育的近 交小鼠。BL/6纯系小鼠性成熟早，36日龄雄性附睾精液中有活动精子。雌性小鼠 在37日龄时可以排卵和受孕。正常情况下，雌鼠每45天有一个性周期，发情 后23小时可排卵。妊娠期1921天，哺乳期2022天。雌鼠分
2、娩后也可有 发情期，即分娩后24小时排卵。此时交配可使其怀孕，俗称“血交配”，有边喂 边怀孕的现象。现有的研究说明，在各种繁殖实验中，交配季节非常重要，一般应在春秋两季 进行。因为老鼠怕热怕冷，这个季节温度适宜，所以动物受孕率高。在夏季和冬 季，动物房的室温应控制在(222)。结果说明，温度、光照、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期有较大影响。 当温度低于10C时，C BL/6纯系小鼠的受孕率极低，胚胎获取往往失败。光照、 温度、噪音、湿度、营养等因素对小鼠的性周期影响很大。当噪音高于80分贝 时，老鼠躁动不安，打架撕咬，几乎没有交配现象；当空气相对湿度低于30%时， 小鼠脱毛现象严重，同时雌
3、鼠受胎率和产仔数降低。目前提高产仔成活率的方法主要有“预接触”和“超数排卵”两种。“预接 触”：交配前两天，将1只雄性大鼠放入5clliX5cmX5eni的封闭围栏筐内，筐内放 置8只雌性大鼠的鼠笼。雌鼠和雄鼠这样生活2天，第三天晚上把雄鼠放出来，雌 雄交配。“超数排卵”：使用孕马血清促性腺激素(PMSG)联合人绒毛膜促性腺激素 (HCG) o中午12: 00雌性小鼠腹腔注射PMSG 10U, 48小时后腹腔注射HCG10U,当 晚800将小鼠1: 1关笼。我们通常将裸鼠的裸基因(nu)导入C57 BL小鼠进行杂交、杂交、回交，获得大 量裸鼠。但其繁殖力低，给实验动物的研究带来了很大困难。存在
4、的问题:不能很好地把握小鼠性周期四个阶段的特点，不能很好地确认 性周期的发情阶段，对实验结果的判断有一定的影响。但其繁殖率低，给实验动物 的研究带来困难。解决问题的思路是通过产仔成活率判断其繁殖性能，通过阴道涂片和阴道检 查判断其发情情况，可用于指导其动物交配和观察产仔存活数，并用统计学方法分 析实验结果。参考1郝光荣。实验动物科学。：第二军医大学，1999.932官原次郎(原文)，郁超等译。哺乳动物发育工程的实验方法。：大学1992. 71 77o3袁伯钧，王，.军事医学新药L临床前平安性评价与实践科学，19974仪，钟欣，邱黎明。低湿度对实验小鼠生殖的影响。赣南医学院学报,2003, 3:
5、 358o5方靖。动物实验方法论。：人民健康，2001. 174oC57 BL/6小鼠生产能力的观察研究张骞、吴献金、马兰、胡浩、全清丽.（1.怀化大学生物技术系,云南怀化,418008（2、云南大学单克隆抗体技术中心，昆明，650091摘要:为提高受精率，对C57 BL/6小鼠的生产能力进行了研究 说明在性周期中表征estms是重要的。自然获得的合子的质量二、实验设计方案（实验设计目标、要解决的主要问题、实验动物设计、实验专业 设计、实验统计设计、实验方法设计、可行性分析、预期结果、实验设计工作安 排）（一）实验设计目标，需要解决的关键问题目的:研究C57BL/6小鼠的繁殖性能，找出影响受孕
6、率的主要因素，以指 导其繁殖，提高产仔成活率。要解决的关键问题：如何把握小鼠性周期的特点，准确确认性周期的发情 期。.实验设计L实验动物设计（遗传背景、微生物质量、育种、饲养管理、动物模型、实验动物 科学技术）1. 1遗传背景：1921年，Little用Abby Lathrop小鼠品系通过近亲交配繁殖了 几只近交动物，起源是57号雌鼠与52号雄鼠交配，命名为cc,固定为巧克力色 的中等毛色称为C BR；毛色固定为黑色的人称为c BL,其子系统有C BL/6、C 7BL/6J. C 57BL/6N等。C57BL/6对Graftfi白细胞因子敏感，肿瘤自发率约 60%,细胞免疫随年龄增长而下降，繁
7、殖率低。1. 2微生物质量:清洁级（CLA） C57BL/6小鼠,雌雄不限。1. 3c57bl/6小鼠的繁殖和繁殖L3.1育种方法:近亲繁殖，1. 3. 2初始动物的选择:选择一对或几对具有育种目标所需性状的同胞。L3.3性别识别：1 .雄性大鼠的生殖器离肛门很远。2 .雄鼠生殖器和肛门之间的长毛。3 .雄鼠的生殖器比雌鼠的大。4 .雌鼠的乳头比雄鼠明显。性成熟:35-55日龄；年龄:60天左右；成熟时的重量:超过20克1.3. 5发情鉴定:看雌鼠的外阴和阴道口。当外阴肿胀，阴道口张开且干燥时， 可确认为发情期母鼠。同时可以通过阴道涂片观察。涂片上有大量角化上皮细胞和 少量有核上皮细胞，细胞散
8、在分布，不聚成堆，为发情雌鼠。交配:发情前期交配。1. 3.7交配形式:近亲交配（全同胞交配）1.8.8 妊娠诊断:胎儿触诊、阴道涂片、外涂片、直肠检查。1.8.9 繁殖代数:所有作为亲本的同胞（初始动物）记为0代，雌雄1: 1交配，后 代记为1代，从所有同胞中选出一对或多对满意的作为亲本，雌雄1: 1交配，以 此类推，直至20代以上。1.8.10 个体选择:选择保持力和繁殖力强、生命力强、目标形态优良的个体。1. 3.11保种方法:修改平行线系统。1 . 3. 12扩大再生产方法:交通信号法。1.4饲养管理:C57BL/6小鼠应在开放式系统动物房中饲养。由于光照能刺激小鼠 性激素的分泌，对雌
9、性小鼠的性周期有一定的影响，所以采用12h:12h光暗光照， 使用无毒塑料笼。被褥材料选用吸湿性好、无毒、无味、粉尘少的材料，如电刨花 等。一般来说，所有的笼子，垫料，饲料和饮用水都要消毒。温度控制在20- 25,鼠房相对湿度保持在45%-60%,噪音保持在60dB以下。一年四季都要进行 通风。喂食时，应使用特殊的老鼠饲料。高脂牛奶可以添加到粉状饲料中。当饲料 中含有4%-8%的粗脂肪时，C57BL/6小鼠可以获得较好的繁殖效果，对维生素也有 较高的要求。2 .实验专业设计通过研究光照、温度、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期的影响，采用 自然交配法和超数排卵法，确定最正确条件，提高受胎率，增
10、加产仔成活率。3 .实验的统计设计。采用平均值（x）标准差（s）,两组间比拟采用T检验，组间比拟采用方差分 析，结果采用统计软件进行分析。4 .实验动物设计方法：老鼠.实验技术和方法：5. 1.C57BL/6纯系小鼠的选择:选择性成熟未交配的小鼠。母熊60-70天,体 重20-25克。公熊60-70天，体重20-30克。6. 2.确定小鼠性周期的发情期:选择适龄的雌雄小鼠，交配前检查雌鼠的外阴 和阴道口。当外阴肿胀，阴道口张开且干燥时，可确认为发情雌鼠。同时可以通过 阴道涂片观察。涂片上有大量角化上皮细胞和少量有核上皮细胞，细胞散在分布， 不聚成堆，为发情雌鼠。通过观察阴道涂片的细胞学变化和阴
11、道口的变化，可以确 定发情的不同阶段。7. 3.动物交配及孕鼠检查:将已确定发情的雌性大鼠分为实验组和对照组。实 验组采用自然交配法，按雌雄1: 1的比例于晚上8点关笼，次日早晨检查阴道涂 片和阴道栓剂。对照组采用超数排卵法，配种孕马血清促性腺激素(PMSG)联合人绒 毛膜促性腺激素(HCG)。中午12:毛雌性小鼠腹腔注射PMSG 10U, 48小时后腹腔 注射HCG10U。他们晚上8点和公老鼠1: 1关在一起。阴道涂片检查:如果镜检发现 精子，那么为阳性，记录为妊娠0.5d。阴道栓的检查:检查雌鼠是否有阴道栓，必要 时用眼钳插入阴道，翻开阴道口，看是否有阴道栓。有阴道栓剂确实定怀孕。记录 为
12、怀孕o. 5do8. 4.动物交配与妊娠的鉴别：小鼠交配后，雌鼠阴道口内形成白色阴道栓，呈 “Y”形，外表有细横纹，“分叉”段连接阴道深部。一般小鼠雌栓在交配后12 24h自动脱落。尹畅栓的有无被视为判断是否交配的重要标志。鉴别小鼠是否怀 孕，可以通过观察C、BL/6小鼠发情周期是否消失，观察阴道粘膜颜色、粘液性 质、阴道口径变化等来判断。9. 5.统计:大约19-21天后，会有婴儿出生，观察并统计他们的数量。(3)可行性分析：3.1本实验操作简单，实验指标易于观察。3. 2小鼠容易获得和饲养。(四)预期效果:在适宜的实验环境下，实验组小鼠的受孕率和出生率较高。实验设计工作时间表：实验工程工作时间表实验小鼠的选择30分钟确定小鼠的发情周 期。20min小鼠交配和妊娠试验12小时小鼠的妊娠和繁殖19-21d三。完成实验的条件L仪器设备:棉签、载玻片、眼科镜子。2.实验动物来源:C57BL/6小鼠，雄性200只，雌性200 龄60-70天。25元C57BL/6小鼠购自大学华西医学中心。3.药物试剂来源:生理盐水、甲苯胺蓝。只，体重20-30g,年教研室评估意见1、实验设计是否合理，能否到达预期目标?2、设计和技术路线安排是否合适?3、实验条件具备吗?实验教研室年日