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1、关于植物组织培养技术流程第1页,此课件共14页哦1 1 实验室仪器设备实验室仪器设备第2页,此课件共14页哦第3页,此课件共14页哦2 2 实验基本操作实验基本操作一、母液的配制一、母液的配制1.MS1.MS母液的配制母液的配制2.2.激素母液的配制激素母液的配制大量元素大量元素(20(20倍倍)、微量元素、微量元素(1000(1000倍倍)、铁盐、铁盐(100(100倍倍)、有机元素、有机元素(100(100倍倍)6-BA6-BA、KTKT、ZTZT等浓度为等浓度为0.5mg/ml0.5mg/ml;NAANAA浓度为浓度为0.1mg/ml0.1mg/ml第4页,此课件共14页哦二、培养基的配
2、制与灭菌二、培养基的配制与灭菌 MS+6-BA 2 mg/L+MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉琼脂粉 5.5 mg/L+5.5 mg/L+糖糖 30 mg/L 30 mg/L pH 6.0 1LpH 6.0 1L适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121 121 维持维持202030min30min注意点:加足水、排尽气、气压降到注意点:加足水、排尽气、气压降到0 0时,才能开盖。时,才能开盖。1.1.培养基配制培养基配制2.2.培养基灭菌培养基灭菌第5页,此课件共14页哦三、外植体的消毒与无菌操作三、外植体的消毒与无菌操作消
3、 毒 剂使用浓度(%)消毒时间(min.)效 果残液去除难易乙醇70-750.1-3好易新洁尔灭1020530好易氯化汞0.11215最好最难过氧化氢1012515较好最易抗菌素450mgl-13060较好较难次氯酸钙/纳9 10530好易1.1.外植体消毒外植体消毒第6页,此课件共14页哦正正 确确 错错 误误取流水冲洗(至少5min)过的外植体,用一定的消毒剂浸泡消毒,用无菌水冲洗3-4次,放入无菌培养皿中,用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。第7页,此课件共14页哦1 1、用、用75%75%的酒精喷洒超净工作台。的酒精喷洒超净工作台。2 2、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀
4、剪镊杀菌、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪镊杀菌20min-30min20min-30min。注意:台面上的用品不要放置太多或重叠。注意:台面上的用品不要放置太多或重叠放置,以免降低灭菌效果。放置,以免降低灭菌效果。3 3、关空间紫外灯,过、关空间紫外灯,过5-10min5-10min进入缓冲间,以进入缓冲间,以75%75%洗手和洗手和手臂,进入接种台。手臂,进入接种台。4 4、关闭超净台紫外灯,打开照明灯。、关闭超净台紫外灯,打开照明灯。5 5、试验操作。、试验操作。6 6、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。7 7、收拾无菌纸、材料瓶等。
5、、收拾无菌纸、材料瓶等。2.2.无菌操作无菌操作第8页,此课件共14页哦注意(注意(1 1)进行培养时,动作要准确敏捷,但又不必太快,以)进行培养时,动作要准确敏捷,但又不必太快,以防空气流动,增加污染机会。(防空气流动,增加污染机会。(2 2)不能用手触及已消毒器)不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要重新消毒。(皿,如已接触,要重新消毒。(3 3)为拿取方便,工作台)为拿取方便,工作台面上的用品要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西面上的用品要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西放置在右侧,左手用品在左侧。(放置在右侧,左手用品在左侧。(4 4)工作由始至终要保持)工作由始至终要保持一定
6、顺序性,组织或细胞在未做处理之前,勿过早暴露在空气一定顺序性,组织或细胞在未做处理之前,勿过早暴露在空气中。同样,培养液在未用前,不要过早开瓶;用过之后如不再中。同样,培养液在未用前,不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用,应立即封闭瓶口,直立可增加落菌机会。重复使用,应立即封闭瓶口,直立可增加落菌机会。第9页,此课件共14页哦接种茎段:注意形态学下端插入培养基内,而形态学上接种茎段:注意形态学下端插入培养基内,而形态学上端露于空气中端露于空气中正正 确确 错错 误误第10页,此课件共14页哦3.植物组织培养流程植物组织培养流程路路线线一一第11页,此课件共14页哦路路线线二二第12页,此课件共14页哦路路线线三三第13页,此课件共14页哦感谢大家观看第14页,此课件共14页哦