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1、细菌室质控第1页，共46页，编辑于2022年，星期一质量保证质量保证QA（Quality Assurance）质量保证 是实验室报告的质量得到保证的全过程概括总结为：正确的结果是来自于从正确的样品采集的正确的标本；在正确的时间里得到的结果，结果的解释是基于正确的参考资料，当然还要考虑到价格的合理。在强调质量的前提下设计的步骤不能只限于实验室的技术操作步骤。第2页，共46页，编辑于2022年，星期一质量保证和质量控制的关系标本标本检测检测结果结果正确：正确：采集时间采集时间采集标本采集标本采集方法采集方法SOP质量控制质量保证 质质 量量 保保 证证分析前分析前分析中分析中分析后分析后第3页，共
2、46页，编辑于2022年，星期一质量保证和质量控制的关系质量保证和质量控制的关系质量保证和质量控制在目的方面很相似，但在含义和功能上是不同的。其功能是相互作用的关系，因为非常接近而通常被混淆。质量保证比质量控制更难用“量”来限定，每个环节都将影响结果的质量。对每个环节进行控制，构成质量保证体系。第4页，共46页，编辑于2022年，星期一质量保证和质量控制的关系质量保证和质量控制的关系质量控制很少把实验室人员包括在内质量保证是基于实验室和临床医生的对话。第5页，共46页，编辑于2022年，星期一质量保证体系质量保证比质量控制更难用“量”来限定，因为它侧重实验室的检测对患者的影响一个有效的质量保证
3、体系帮助实验室说明，试验数据不是凭空产生的，实验室做的一切最终会对患者的生命产生影响,对患者的生命负责。第6页，共46页，编辑于2022年，星期一得到正确分析结果的基础标本分析前的质量控制 微生物学特殊方面微生物学特殊方面大量的分析前因素影响微生物实验的诊断价值合理的标本采集 向临床提供标本采集说明(sop)，包括正确时间、部位和方法等正确的运送方式 包括运送工具和有效时间及储存方法等有可靠的标本质量评价方法 拒收标本指标 除非不能再采集的标本，否则不予检测；如果培养或检测，要对结果进行说明。第7页，共46页，编辑于2022年，星期一收集和运送微生物标本的容器要求无菌无防腐剂足够大安全严密不易
4、碎运送培养基加强无生长因子或保持特定菌的培养基 避免用木质的棉试子对细菌有毒害第8页，共46页，编辑于2022年，星期一拭子标本拭子标本在运送过程中应防止干燥，可将拭子放进液体肉汤或运送培养基中。为防止标本中的细菌数量减少，标本量应尽可能大。第9页，共46页，编辑于2022年，星期一运送时间及运输贮存温度标本因冷藏冷藏及pH改变或在氧气中暴露氧气中暴露，可能减少很多种细菌的存活时间 脑膜炎球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血杆菌，肺炎链球菌，布氏杆菌，沙门菌，志贺氏菌，霍乱弧菌，空肠弯曲菌及厌养菌 定量评价细菌数的培养（尿标本）对环境敏感菌株在运送中数量快速减少时，如果运送时间太长，其它菌则成倍增长，需
5、要寻找的细菌可同其它菌一起过度生长。需进行细菌学检测的所有标本，应在收集后需进行细菌学检测的所有标本，应在收集后2 2小时内送小时内送到实验室到实验室 第10页，共46页，编辑于2022年，星期一细菌学试验的各种标本的运送及贮存条件细菌学试验的各种标本的运送及贮存条件标本标本 运送运送 贮存温度贮存温度 血血血培养瓶 室温或37 脓脓、脑脊液脑脊液、胸水、心包液胸水、心包液、腹水、关节滑液腹水、关节滑液、鼻窦分泌物鼻窦分泌物 短时间内运送短时间内运送:标本在带帽的注射器内标本在带帽的注射器内保证厌氧条件保证厌氧条件长时间运送长时间运送：使用运送培基使用运送培基室温不用培养避免冷藏支气管肺泡灌洗
6、液、支气管肺泡灌洗液、痰，其它分泌物痰，其它分泌物 、便便 立刻送检（2-3小时）冷藏 眼眼、耳耳、嘴嘴、咽咽、鼻鼻、尿尿道道、生生殖殖道道、直肠、直肠、伤口伤口用运送培养基用运送培养基(运送时间运送时间44小时小时)室温室温不培养不培养第11页，共46页，编辑于2022年，星期一仪器和设备质控活动室内质控室内质控室间质评室间质评日常维护和清洁室内监测或使用者检查按日程进行调整操作步骤试运行和重试运行操作步骤试运行和重试运行操作步骤第12页，共46页，编辑于2022年，星期一培养葙、水浴和冰箱可接受温度范围温度温度可接受范围可接受范围目的目的251.0酵母菌、霉菌351.0常规301.0酵母菌
7、和霉菌、李斯特420.5沙门/弯曲菌分离、鲍曼不动杆菌冷藏4-8储存培养基、试剂冷冻-20低温储存标本、试剂、贮存菌种冷冻-70超低温储存参考菌株和血清第13页，共46页，编辑于2022年，星期一定期维护和校准、记录pH计厌氧指示剂水浴葙天平加样器自动高压灭菌器生物安全柜年检、验证第14页，共46页，编辑于2022年，星期一成品商业培养基接收时记录批号，接收日期；厂家提供质控文件，如实沿用气体，培养时间长度，可接受的结果；使用的实验室必须检查外观，破损、污染、溶血或冻坏情况；有效期内质量是否有变化第15页，共46页，编辑于2022年，星期一必须做质控的商业培养基做药敏试验 MH培养基 巧克力琼
8、脂 弯曲菌琼脂 淋球菌选择培养基用于主要的微生物鉴定 试剂盒中的培养基有两种或更多的底物有相对高的失败率厂家不做的羊血琼脂CAMP细胞培养用第16页，共46页，编辑于2022年，星期一自制培养基每批做质控用菌株根据期望结果选择确认要求生长特性（溶血、特征菌落等）选择性（生长/不生长）加强营养（苛养菌）鉴定用生化反应（阴性、阳性，如：氧化/发酵，动力等）质控菌株的贮存日常用：4-8,胰酶消化大豆肉汤（非苛养菌）；高营养巧克力琼脂斜面（苛养菌），每周转种。中期贮存：50胎牛血清肉汤，脱纤维羊血或脱脂牛奶，10-15甘油胰酶消化大豆肉汤，-20。长期贮存：冻干或液氮。第17页，共46页，编辑于202
9、2年，星期一试剂所有试剂(水、干燥培养基、菌株和药敏纸片)必须标记成份、浓度、配制日期、接收日期、贮存地方、失效期和库存量。按厂家要求保存试剂过期试剂应该弃去参考菌株用于检测所有菌株、试剂、阳性和阴性反应。第18页，共46页，编辑于2022年，星期一试剂质控触酶（粪肠球菌、金葡菌）凝固酶（金黄色葡萄球菌、表葡菌）氧化酶（绿脓假单胞菌、大肠杆菌）-内酰胺酶杆菌肽（A群链球菌）OP（肺炎链球菌S,草绿色链球菌R）X+V纸片（流感嗜血杆菌）抗酸染色（快生长分枝杆菌）G染色（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）诊断抗血清用已知阳性和阴性菌株做对照！第19页，共46页，编辑于2022年，星期一抗生素药敏试验纸片法
10、 新批号药做；一般每周做；失控时天天做，连续30天，准确度和精确 度达到后才恢复每天做；一个药物失控时，重新测5天。稀释法 琼脂法、微量肉汤法每次同时做质控第20页，共46页，编辑于2022年，星期一药敏试验失控措施按美国NCCLS（CLSI)规定(1)质控菌株应按标准方法与临床标本种分离菌同步进行药敏试验；(2)更换药物或培养基时必须用相应质控菌株测试；(3)所有质控菌株在实行常规监控（一周一次质控）前应连续监测30天。第21页，共46页，编辑于2022年，星期一自动和半自动系统厂家提供鉴定和药敏试剂所用菌株号及预期结果可以验证是否操作按照SOP标准规范操作第22页，共46页，编辑于2022
11、年，星期一药敏试验失控措施对每种药物、每种菌株，30次试验总失控结果不能超过3个。如果30天监控结果完全符合上述要求，可转为一周一次质控的方法。只要抑菌环直径超出可接收范围都必须校正当失控原因不明时，可用相应质控菌株连续监测5天；每种菌株对质控中每种抗菌药物同时测试5个抑菌环，如果结果全部达到可接收范围，可恢复一周一次质控。第23页，共46页，编辑于2022年，星期一实验室间质量评价实验室间质量评价(EQA)室间质评是考察试验结果的正确性（accuracy)，是检查不同实验室操作的差异。室内质控是考察实验室试验结果的重复性（精确性precision），而无法检验的正确性。参加微生物室间质量评价
12、活动 可以检查实验室室内质控的质量，同时了解自己实验室与其他实验室之间的差异。实验室认可的要求 第24页，共46页，编辑于2022年，星期一室间质量评价的误区正确的做法正确的做法：室室间间质质评评样样本本应应与与常常规规工工作作放放在在一一起起做做，当作临床标本；由做常规工作的人员操作；所有的技术人员都应参加最好。与常规工作相同的方法、操作步骤和试剂 错误的做法错误的做法：特殊对待，单独操作专人专做专人专做与与常常规规方方法法、所所用用试试剂不同剂不同第25页，共46页，编辑于2022年，星期一4、肠杆菌科第26页，共46页，编辑于2022年，星期一4、非发酵菌第27页，共46页，编辑于202
13、2年，星期一G群链球菌（非三甲医院统计）第28页，共46页，编辑于2022年，星期一1、G群链球菌（三甲医院统计）第29页，共46页，编辑于2022年，星期一2、非O1群霍乱弧菌第30页，共46页，编辑于2022年，星期一4、0214号产酸克雷伯菌（敏感株）敏感正确率：头孢唑林 81.4%阿莫西林/棒酸 59.4%亚安培南92.5%第31页，共46页，编辑于2022年，星期一2、0205号洛菲不动杆菌头孢哌酮 敏感正确 率65.5%第32页，共46页，编辑于2022年，星期一3、0314嗜麦芽窄食单胞菌亚胺培南天然耐药7个实验室报告敏感第33页，共46页，编辑于2022年，星期一三、葡萄球菌属
14、0115号金黄色葡萄球菌(MSSA)敏感正确率:*苯唑西林90.8%万古霉素97.2%头孢曲松92.2%*氨苄西林/舒巴坦86.7%第34页，共46页，编辑于2022年，星期一0209号金黄色葡萄球菌(MRSA)正确率：苯唑西林79.7%万古霉97.9%氨苄西林/舒巴坦 应该报告耐药，报告敏感的实验室占30.9%第35页，共46页，编辑于2022年，星期一四、肠球菌0110粪肠球菌（HLAR）敏感正确率：*青霉素72.5%*万古霉素 85.5%耐药正确率：庆大霉素 98.8%第36页，共46页，编辑于2022年，星期一五、苛养菌药敏苯唑西林筛选试验可能耐药正确率为89.7%有303个实验室可以
15、进行青霉素MIC检测，耐药正确率62%头孢噻肟MIC耐药正确19.0%四环素耐药正确率74.4%。第37页，共46页，编辑于2022年，星期一0301号流感嗜血杆菌耐药正确率：氨苄西林93.3%敏感正确率：氨苄西林/舒巴坦 76.4%头孢克罗73.6%氯霉素88.3%四环素71.1%第38页，共46页，编辑于2022年，星期一六、其他链球菌0309号牛链球菌（敏感株）敏感正确率：青霉素 90.3%头孢噻肟90.4%红霉素 94.4%万古霉素 96.7%第39页，共46页，编辑于2022年，星期一七、-内酰胺酶试验第40页，共46页，编辑于2022年，星期一实验室应具备多种检测手段分离、培养 非
16、选择培养基、选择培养基、鉴别培养基等、分离不同营养和气体环境要求的病原菌鉴定 标准化的商品试剂、自动半自动仪器、自制、血清学等试剂药敏试验 纸片法、微量肉汤稀释法、E-test第41页，共46页，编辑于2022年，星期一注重培养微生物工作人员的质量控制意识注重培养微生物工作人员的质量控制意识有形的、看得见的 微生物实验的质量可以通过正确的操作来体现，例如革兰染色试剂，可以通过对标准质控菌株的染色来反映操作和试剂的质量。质量控制更依赖于工作人员的认知能力 一个受过充分培训的、能够严谨地分析实验结果的工作人员，不是只能够忠实地记录实验数据，而是可以实施更加严格的标准。第42页，共46页，编辑于20
17、22年，星期一注重培养微生物工作人员的质量控制意识注重培养微生物工作人员的质量控制意识 具有质量意识的微生物技术人员 应该对标准烂熟于心，能对不常见的结果提出疑问：象不可能的或迄今为止从未见过的药敏表型 出现少见菌或非常驻菌，以及增加的污染率等。各种质量控制方法都很难检查出来 这些和其他的技术错误或书写错误不是经常发生，或散在发生实验室应该鼓励工作人员的质量意识他们做出的结果可以得到临床医生的信赖信赖第43页，共46页，编辑于2022年，星期一G+未报道过的表型、不常见结果或技术错误造成不常见表型/技术错误造成结果，要确认耐药结果肠球菌属DaptomicinNSVanR粪肠球菌氨苄或青霉素R,
18、Daptomicin NS,喹达喹达S，Linezolid R高水平庆大R(特别是来自无菌部位标本）屎肠球菌Daptomicin NS，Linezolid R高水平庆大R(无菌部位标本），喹喹达达R金葡菌Daptomicin NS,VanI,RLinezolid NS 喹达喹达I,R苯唑西林R凝阴性葡Daptomicin NS,VanI,RLinezolid NS肺炎链球菌氟喹诺酮R，Linezolid NS,VanNS青霉素R,三代头孢RB溶血链球氨苄或青霉素NS,三代头孢NSDaptomicin NS,Linezolid NS,VanNS草绿链Daptomicin NS,Linezolid
19、 NS,VanNS青霉素I,R任何菌对所有常规检测抗生素都耐药需证实药敏试验的结果和确认菌种的鉴定第44页，共46页，编辑于2022年，星期一G-未报道过的表型、不常见结果或技术错误造成不常见表型/技术错误造成结果，要确认耐药结果任何肠杆菌科卡巴配能I,R阿米卡星R,氟喹诺酮R弗氏枸橼酸，肠杆菌属，粘质沙雷氨苄，头孢唑啉或头孢噻吩S克雷伯属氨苄S确认ESBL+(大肠）普通变形，普鲁威登属氨苄S沙门属三代头孢I,R,氟喹诺酮I,R奈啶酸R嗜麦芽窄食单胞菌卡巴配能S复方新诺明R流感嗜血杆菌氨曲南NS,卡巴配能NS三代头孢NS，氟喹诺酮NS氨苄R和-内酰胺酶阴性阿莫西林/棒酸 R淋病奈瑟菌三代头孢R氟喹诺酮R任何细菌对常规所有抗生素R需证实药敏试验的结果和确认菌种的鉴定第45页，共46页，编辑于2022年，星期一谢谢！第46页，共46页，编辑于2022年，星期一