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1、湖南环境生物学院毕业论文湖南环境境生物学学院本 科 毕 业业 论 文论文题目目 丹参酮酮a磺酸酸钠微量量杂质的的分离与与结构鉴鉴定 英文题目目 SSepaarattionn Off Miicrooimppuriity Andd Iddenttifiicattionn OffSoddiumm Taanshhinoone a SSulffonaate 院 系专 业学 号姓 名指导教师师论文工作作时间:20111年55月 至 20111年66月 毕业设计计（论文文）题目目毕业设计计（论文文）英文文题目XXI 摘 要丹参酮IIIa磺磺酸钠，是是从药材材丹参中中提取的的主要脂脂溶性有有效成分分丹参酮酮I
2、Iaa经磺化化反应后后形成的的一种水水溶性钠钠盐，由由于磺酸酸基的引引入，提提高了丹丹参酮IIIa的的水溶性性，在治治疗冠心心病、心心绞痛、心心肌梗塞塞等疾病病方面显显示出与与丹参酮酮IIaa所无法法比拟的的优越性性，成为为主要的的心血管管类中药药。目前从丹丹参中提提取丹参参酮IIIa的方方法和药药理活性性研究较较多，但但对于丹丹参酮IIIa磺磺酸钠杂杂质的研研究很少少，原料料中的微微量杂质质成分的的研究还还是空白白。在对对丹参酮酮IIaa磺酸钠钠的药理理作用，在在药物代代谢动力力学和相相关文献献报导的的制备工工艺等进进行综合合考察的的基础上上本课题题采用色色谱及波波谱方法法对丹参参酮IIIa
3、磺酸酸钠进行行微量杂杂质的分分离及结结构鉴定定。同时时，本文文建立了了高效液液相色谱谱法测定定原料药药丹参酮酮A磺酸酸钠微量量成份含含量的方方法，可可用来对对原料药药和制剂剂进行质质量控制制。关键词：羟基丹丹参酮IIIa磺磺酸钠；丹参酮酮IIaa磺酸钠钠；丹参参酮IIIa；分分离；结结构鉴定定 Sepaarattionn off Miicrooimppuriity andd Iddenttifiicattionn off Soddiumm Taanshhinoone IIaa SuulfoonatteAbsttracct:SSalvvia milltioorrhhizaa iss onne o
4、of tthe mosst iimpoortaant traadittionn Chhineese meddiciinall maaterrialls tthatt poosseess thee fuuncttionn off booth proomottingg blloodd fllow andd reemovvingg blloodd sttasiis wwithh annti-corronaary artteryy diiseaase. Thhe cconssumeed qquanntitty oonlyy inn thhe aaspeect of injjecttionn haas
5、bbeenn exxceeededd 2 billlioon ddosaagess evveryy yeear. Hoowevver, beecauuse thee unndettermmineed aactiive inggreddiennts andd reelaxxed inddex of quaalitty cconttroll innducced thee innstaablee efffeccts of cliinicc trrateermeent, annd, morreovver, ussuallly advversse ffuncctioons, whhichh leead
6、sallviaa miiltiiorrrhizza uunabble to acccommmodaate reqquirremeent of conntemmporraryy Chhineese meddiciinall maaterrialls mmelttingg woorldd. SSulffotaanshhinoone soddiumm iss assodiium chlloriide of watter-sollubiilitty aafteer ssulffonaatinng ttansshinnonee IIIa oof llipoosollubiilitty aactiive
7、inggreddienn taabsttraeetedd inn saalviia mmilttiorrrhiiza.It is an efffecttivee meediccinee off anngioocarrdioopatthy to treeat corronaary artteryy diiseaase, annginnacoordiis，aand myoocarrdiaal iinfaarcttionn.Thhe aamouunt of cliincaal uutillizaatioon cconttinuuouss.incrreassingg wiith thee hiigh
8、prooporrtioon oof ppatiientts oof aangiiocaardiiopaathyy innducces raww maaterriall reesouurcee off saalviia mmilttiorrrhiiza inssuffficiientt inn Chhinaa. SSo iit bbecoomess ann exxtennsivve ffocuus ppoinnt iin ffharrmacceutticaal ffacttoryy thhat suffficciennt uutillizee annd ccut dowwn uuymoost d
9、isssippatiion ressourrce of sallviaa miiltiiorrrhizza.Keywwordds:11-Hyydrooxy-Tannshiinonne IIIa suulfoonatte ;sodiium tannshiinonneA ssulpphonnatee(STTS);tannshiinonneIIIa;ssepaarattionn;iddenttifiicattionn0 前 言丹参是活活血化淤淤的传统统中药，具具有良好好的抗冠冠心病等等作用。其其制剂及及复方制制剂品种种繁多，仅仅注射剂剂的年使使用量就就达200亿支以以上，但但多数产产品有效效成分不不
10、明确，质质量控制制指标不不严格，由由此导致致临床疗疗效不稳稳定，不不良反应应时常出出现，因因此不能能适应中中药生产产现代化化和向国国际市场场挺进的的要求。丹参酮IIIa磺磺酸钠，是是从药材材丹参中中提取的的主要脂脂溶性有有效成分分丹参酮酮IIaa经磺化化反应后后形成的的一种水水溶性钠钠盐，由由于磺酸酸基的引引入，提提高了丹丹参酮IIIa的的水溶性性，在治治疗冠心心病、心心绞痛、心心肌梗塞塞等疾病病方面显显示出与与丹参酮酮IIaa所无法法比拟的的优越性性，成为为主要的的心血管管类中药药111。由由于我国国心血管管疾病患患者在人人群中比比例居高高不下，该该药品市市场需求求量呈逐逐年增加加趋势，但但
11、是因为为其杂质质不明确确，安全全问题一一直是制制药企业业关心的的问题。目前从丹丹参中提提取丹参参酮IIIa 的的方法和和药理活活性研究究较多，但但对于丹丹参酮IIIa磺磺酸钠杂杂质的研研究很少少，原料料中的微微量杂质质成分的的研究还还是空白白，且对对杂质分分离也没没有一个个统一较较好的方方法。由由于丹参参酮IIIa磺酸酸钠是丹丹参提取取物经过过化进一一步磺化化制得，因因此其可可能的杂杂质主要要有两个个来源，一一是作为为磺化原原料的参参酮IIIa中没没有纯化化干净的的其他丹丹参酮类类化合物物，一是是磺化过过程中丹丹参酮IIIa其其他残留留丹参酮酮磺化产产物及其其副产物物，在对对丹参酮酮IIaa磺
12、酸钠钠的药理理作用，药药物代谢谢动力学学和相关关文献报报导的制制备工艺艺等进行行综合考考察的基基础上本本课题采采用色谱谱及波谱谱方法对对丹参酮酮IIaa磺酸钠钠进行微微量杂质质的分离离及结构构鉴定。1 文献献综述1.1 丹参形形态丹参是唇唇形科鼠鼠尾草属属植物丹丹参(SSalvvia milltioorrhhizaa Bgge)的干燥燥根及根根茎。该该属植物物约9000-111000种，主主要分布布于热带带或温带带。我国国有约884种，分分布于全全国各地地，尤以以西南为为多。除除了丹参参外，三三叶鼠尾尾草，云云南鼠尾尾草的根根也可以以作为丹丹参入药药。其植植物学性性状和产产地如下下6,7（见见
13、图1）：图1多年生直直立草本本；根肥肥厚，肉肉质，外外面朱红红色，内内面白色色，长55-155厘米，直直径4-14毫毫米，疏疏生支根根。茎直直立，高高40-80厘厘米，四四棱形，具具槽，密密被长柔柔毛，多多分枝。叶叶常为奇奇数羽状状复叶，叶叶柄长11.3-7.55厘米，密密被向下下长柔毛毛，小叶叶3-55，长11.5-8厘米米，宽11-4厘厘米，卵卵圆形成成椭圆状状卵圆形形或宽披披针形，先先端锐尖尖或渐尖尖，基部部圆形成成偏斜，边边缘具圆圆齿，草草质，两两面被疏疏柔毛，下下面较密密，小叶叶柄长22-144毫米，与与叶轴密密被长柔柔毛。轮轮伞花序序6花或或多花，下下部者疏疏离，上上部者密密集，组
14、组成长44.5-17厘厘米县长长梗的顶顶生或腋腋生总状状花序；苞片技技针形，先先端渐尖尖，基部部楔形，全全缘，上上面无毛毛，下面面略被疏疏柔毛，比比花梗长长或短；花梗长长34毫米米，花序序轴密被被长柔毛毛或具腺腺长柔毛毛。花萼萼钟形，带带紫色，长长约1.1厘米米，花后后稍增大大。外面面被疏长长柔毛及及具腺长长柔毛，具具缘毛，内内面中部部密被白白色长硬硬毛，具具11脉脉，二唇唇形，上上唇全缘缘，三角角形，长长约4毫毫米宽宽约8毫毫米，先先端具33个小尖尖头，侧侧脉外缘缘具狭翅翅，下辱辱与上唇唇近等长长，深裂裂成2齿齿，齿三三角形，先先端渐尖尖。花冠冠紫蓝色色，长22-2.7厘米米，外被被具腺短短
15、柔毛，尤尤以上唇唇为密，内内面离冠冠筒基部部约2-3毫米米有斜生生不完全全小疏柔柔毛毛环环，冠筒筒外伸，比比冠檐短短，基部部宽2毫毫米，向向上渐宽宽，至喉喉部宽达达8毫米米，冠檐檐二唇形形，上唇唇长122-155毫米，镰镰刀伏，向向上竖立立，先端端微缺，下下唇短于于上唇，33裂，中中裂片长长5毫米米，宽达达10毫毫米，先先端二裂裂，裂片片顶端具具不整齐齐的尖齿齿，侧裂裂片短，顶顶端圆形形，宽约约3毫米米。能育育雄蕊22，伸至至上唇片片，花丝丝长3.5-44毫米，药药隔长11720毫毫米，中中部关节节处略被被小疏柔柔毛，上上臂十分分伸长，长长14-17毫毫米，下下臂短而而增粗，药药室不育育，顶端
16、端联合。退退化雄蕊蕊线形，长长约4毫毫米。花花柱远外外伸，长长达400毫米，先先端不相相等2裂裂，后裂裂片极短短，前裂裂片线形形。花盘盘前方稍稍膨大。小小坚果黑黑色，椭椭圆形，长长约3.2厘米米，直径径1.55毫米。花花期4-8月，花花后见果果。产河河北，山山西，陕陕西，山山东，河河南，江江苏，浙浙江，安安徽，江江西及湖湖南；生生于山坡坡、林下下草丛或或溪谷旁旁，海拔拔1200-13300米米。日本本也有6,77。1.2丹丹参的化化学成分分及其药药理作用用丹参为唇唇形科植植物丹参参(SSalvviaee miiltiiorrrhizzaeBBge.)的干干燥根及及根茎。性性微寒, 味苦苦, 是
17、是临床最最常用中中药之一一。具有有祛瘀止止疼、活活血调经经、清心心除烦的的功效、是是活血化化瘀的常常用中药药。丹参的主主要有效效成分为为脂溶性性的二帖帖类化合合物和水水溶性酚酚酸类化化合物。其其中的丹丹参酮II、III，异丹丹参酮II、III，异丹丹参酮、丹丹参酸甲甲醋、丹丹参新酮酮、丹参参酚、原原儿茶醛醛、原儿儿茶酸等等都具有有药学活活性。由由于丹参参的上述述各种疗疗效均与与丹参酮酮IIaa直接相相关，且且丹参酮酮IIaa标准品品较易得得到，其其色谱行行为与其其它成分分差距较较大，以以及丹参参酮IIIa具有有广泛药药理作用用，因此此作为脂脂溶性成成分的代代表，并并被中华华人民共共和国药药典用
18、作作为丹参参药材的的质量控控制指标标1。丹参参广泛用用于治疗疗心血管管疾病的的中药复复中，以以丹参为为主要的的中药制制剂开发发也相当当活跃14【丹参酮酮】（taanshhinoone）具具有多种种生物活活性，如如抗肿瘤瘤、抗血血栓形成成和抗炎炎等，常常在中医医中被用用来治疗疗炎性疾疾病。丹丹参酮IIIa（ttansshinnonee IIIa）在在丹参中中含量最最多，丹丹参酮IIIa磺磺酸钠（ssodiium tannshiinonne IIIa sullphoonatte, STSS）是丹丹参酮IIIa的的衍生物物。【丹参酮酮IIaa】( TTansshinnoneeIIaa)是从从传统的的
19、活血化化淤类中中药丹参参( SSalvvia milltioorrhhizaa Bgge)中中提取的的脂溶性性有效成成分,易易溶于乙乙醇、丙丙酮、乙乙醚等有有机溶剂剂, 微微溶于水水, 分分子式为为C H O , 分子量量2944.333,室温温下外观观性状为为红褐色色粉末或或红色结结晶。丹丹参酮几几乎不溶溶于水，口口服吸收收差,生生物利用用度低,一般应应通过注注射给药药。在空空气中丹丹参酮A迅速速降解,而pHH和复方方成分则则对该成成分降解解影响不不大。丹丹参有效效成分可可分为脂脂溶性的的丹参酮酮类(主主要成分分为1)及水溶溶性的丹丹参酸类类(包括括丹参素素、原儿儿茶醛等等) 35。有效成分
20、具有有抗心肌肌缺血、抗抗菌、抗抗雄性激激素作用用,水溶溶性成分分具有抗抗心肌缺缺血和增增加冠状状动脉血血流量等等生物活活性44。故故中国药药典20000年年版中将将丹参的的提取工工艺定为为醇提和和水提结结合的工工艺路线线。不少少生产厂厂家虽按按药典工工艺生产产,但产产品检测测结果往往往仍不不合格。为为此,本本文从原原料、提提取工艺艺以等方方面对丹丹参酮IIIa磺磺酸钠质质量问题题进行研研究9。上世纪660年代代Kakkissswa确确定了丹丹参酮IIIa的的结构式式；随后后，Baaidllie等等人合成成了丹参参酮IIIa。由由于丹参参酮IIIa肠道道吸收差差， 临床起起效慢，故故植物化化学家
21、钱钱明坤等等人半合合成了丹丹参酮IIIa磺磺酸钠，并并由上海海制药一一厂、中中药三厂厂等制备备成注射射液制剂剂，用于于心脑血血管疾病病的治疗疗和预防防。注射射液推向向市场其其确切的的疗效得得到广大大医患的的欢迎。【丹参酮酮IIaa磺酸钠钠】( SSodiium tannshiinonne IIIa sullfonnatee , STSS)是从从丹参中中分离出出二萜醌醌类化合合物丹参参酮后经经磺化得得到的水水溶性物物质。化化学成份份主要有有隐丹参参酮,丹丹参酮a( tannshiinonne IIIa) ,羟羟基丹参参酮IIIa,丹丹参酮甲甲脂,异异隐丹参参酮以及及丹参新新酮等。适适用于冠冠心病
22、、脑脑中风等等心脑血血管疾病病。8 ,91.3丹丹参酮IIIa磺磺酸钠药药理作用用的研究究现状:1.3.1丹参酮酮IIaa磺酸钠钠对心血血管系统统的影响响对心肌的的影响药理实验验表明，对对麻醉狗狗一次静静脉推注注STSS 200 mgg/kgg后，血血压升高高，心输输出量和和左心室室做功量量稍有增增加，心心率和外外周血管管阻力的的变化不不显著。王王志敏等等进一步步报道SSTS增增加在位位大鼠心心脏的收收缩幅度度与上面面的结果果一致，并并对STTS对心心肌和溶溶血的作作用进行行了观察察，发现现离体豚豚鼠心脏脏灌流中中，STTS 00.5 - 220g/ mL灌灌流200 miin，随随浓度而而加
23、重抑抑制心脏脏收缩幅幅度。麻麻醉大白白鼠静脉脉注射440 mmg/kkg能轻轻度增加加在位心心脏收缩缩幅度，0.1 mg/ mL对离体兔左心室乳头肌在缺氧条件下，电刺激收缩幅度下降一半所需要的时间延长。0.02 或0.1 mg/ mL使兔红细胞在低渗条件下的破裂减小，又减少牛血清白蛋白凝固。25 - 75g/ mL对离体豚鼠左心室乳头肌膜电位和动作电位的振幅和时程无明显影响。并进一步推测药物对离体心脏和在体心脏的影响不同，可能由于：在离体心心脏灌流流中，SSTS抑抑制心肌肌收缩是是药物直直接长时时间作用用于心肌肌，而体体内给药药中，药药物在给给药瞬间间血浓度度很高，但但很快趋趋向下降降；药物物
24、在体内内受到代代谢转化化；神经经系统的的影响；豚鼠与与大白鼠鼠的种鼠鼠差异。STS能轻度增加大鼠在位心脏收缩力。增加收缩力的药物可能会增加心肌耗氧量。但这类药物也可能通过降低左心室舒张末期压和心容积，即降低室壁张力和心脏体积而降低心肌耗氧量。又从STS对乳头肌在缺氧条件下收缩力下降50所需要的时间延长，表明药物似乎可以减少心肌对氧的需求，有助于心绞痛缓解。接着，我国学者从分子水平进一步对STS对心肌的作用机制进行了探讨。通过豚鼠离体心脏Langendorff灌流法，造成心肌钙反常模型，给予不同浓度的STS作为心肌保护剂，观察STS对心肌钙反常的保护作用，并与已知的钙拮剂异搏定比较，探讨STS的
25、钙拮抗作用。实验结果表明，STS对心肌钙反常损伤具有明显的保护作用，抑制钙内流，减轻钙反常过程中心肌组织钙沉积和心肌损伤所致的蛋白酶释放 （P 0.01），且该作用在一定范围内具有剂量依赖关系，且作用效果优于异搏定。同时作者用电镜进行了超微结构观察，比较了正常对照组，钙反常组，钙反常加异搏定组，钙反常加STS组。结果表明与正常对照组相比，钙反常组出现典型损伤，肌原纤维极度收缩，I、A带融合，Z线扭曲、排列紊乱，形成许多同心收缩带，线粒体明显肿胀、基质疏松。部分线粒体内外膜及嵴断裂；肌膜破裂，间盘严重分离。钙反常组加STS 10mg/L、20mg/L的两组心肌形态学改善不佳，加30 mg/L、4
26、0 mg/L的两组心肌形态学明显改善，尤以30mg/L组为佳，除线粒体轻度肿胀、糖原略减少外，心肌细胞结构基本正常。2 mg/L异搏定组心肌形态学亦有改善，但不如STS 30mg/L、40 mg/L两组。进一步证实STS系通过其钙拮抗作用保护心肌免受钙反常损伤。新制备的家兔心肌细胞线粒体，在体外条件研究了STS对家兔正常的和异丙基肾上腺素(ISP)兴奋的心肌线粒体摄取钙活力的响。结果表明STS对线粒体的主动摄取钙的影响也是具有钙通道阻滞剂样的作用。并能减少或抑制ISP所引起的心肌线粒体钙超载，从而起到保护心肌线粒体和心肌细胞免遭上述病理原因引起的高钙冲击和细胞坏死的后果。这可能即是T治疗冠心病
27、心绞痛和胸闷及改善缺血性心电图；抗心肌缺血和缩小梗塞范围；降低缺血后的乳酸增加等药理作用的共同生化基础。通过分离的成年豚鼠心室肌单细胞在高钾(25 mmol/L)溶液中部分除极化使钠通道失活，用细胞内刺激诱发慢反应动作电位。20 mol/L的STS对这种慢反应动作电位有明显的抑制作用。在1-20mol/L浓度范围内，STS对0.28 mol/L的异丙肾上腺素强化的慢反应动作电位有浓度依赖性抑制作用。而且，随异丙肾上腺素浓度的增加(69-0.55 mol/L)抑制作用更加明显，进一步说明STS可能是一种钙拮抗剂。通过甲状状腺粉在在诱导大大鼠甲亢亢过程中中心肌微微粒体NNa+，K+-ATPPase
28、e，Ca22+-AATPaaseMMg2+-ATTPasse活性性变化，曾曾林等探探讨高甲甲状腺激激素水平平作用下下STSS对大鼠鼠心肌微微粒体AATPaase活活性的保保护作用用及机制制。实验验证实SSTS不不干扰甲甲状腺粉粉诱脉流流量，供供给了心心肌充足足的氧，保保护ATTPasse活性性，以纠纠正心肌肌细胞内内异常的的钙代谢谢，减少少细胞内内Ca22+超载载，对心心肌起到到保护作作用。应应用膜片片钳技术术，研究究STSS对猪冠冠脉平滑滑肌KAATP和和KCaa的作用用，从分分子水平平阐明其其扩冠机机制。实实验结果果表明，在在内面向向外式膜膜片方式式下，55 20moll/ LL 的STS
29、S可明显显激活KKATPP，表现现为通道道开放概概率、膜膜片通道道开放数数目增加加，而且且STSS也可明明显增加加KCaa通道开开放概率率，表现现出明显显激活作作用，因因此，SSTS对对原代培培养猪冠冠脉平滑滑肌上KKATPP和KCaa均有直直接激活活作用，STS对这两种通道是否有间接作用尚需进一步证实。实验结果进一步从分子水平证实STS 对原代培养猪冠脉平滑肌上KATP和KCa均有直接激活作用，这可能也是它们舒张冠脉的重要机制之一，而且由此可推测，STS通过对KATP、KCa的钾通道开放和钙通道阻滞的协同或联合作用，可明显减少血管平滑肌上的自发电活动，引起血管舒张，在心血管疾病的治疗中具有重
30、要的应用价值。利用在体家兔缺血预适应（ischemia preconditioning，IPC）模型，随机将家兔24 只分为心肌缺血组（IR）、缺血预适应组（IPC）和STS联合缺血预适应组（DS-201+IPC），应用心外膜单相动作电位（MAP）探针记录技术检测缺血-再灌注过程中心肌复极50时（MAPD50）及心律失常发生率和持续时间；TTC染色测定梗死面积；HE染色病理组织学观察，研究STS对家兔缺血预适应心肌电生理参数的影响及保护作用。结果表明，与IR组相比，IPC组缺血5 min时的MAPD50：迅速缩短（P 0.05），缺血20 min时的MAPD50缩短明显减小（P 0.05），复
31、灌30 min后MAPD50的过度延长程度明显减小（P 0.05）。同时，缺血再灌注中室性心律失常发生率明显降低（P 0.05）。在DS - 201+IPC组，缺血5 min时未见MAPD50迅速缩短（P 0.05），缺血20 min及复灌30 min后MAPD50及缺血再灌注中室性心律失常发生率与IPC组无差异（P 0.05）。病理学检测显示，IPC组心肌梗死面积及组织损伤程度均明显小于IR组3,4。DS-201+IPC组心肌梗死面积及组织损伤程度均小于IPC组。实验结果显示，DS-201 联合IPC取消了缺血早期IPC显著缩短MAPD50的效应。但对IPC抗缺血再灌注心律失常作用无显著影响
32、；STS能增强IPC缩小心肌梗死面积和减轻组织损伤的作用。其机制可能是IPC能抑制心肌细胞线粒体ATP酶，减少ATP的水解，有效保存心肌细胞的能量储备。STS能降低IR后线粒体脂质过氧化物的含量，改善线粒体膜的流动性。用培养的新生大鼠心肌细胞STS对血管紧张素诱导的心肌细胞肥大及p-JNK，丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶表达的影响，发现STS能显著降低血管紧张素诱导的心肌细胞蛋白含量、蛋白合成速率的增加，对p-JNK表达具有剂量依赖性的抑制作用；同时上调丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶表达。据此推测，STS抗心肌肥厚机制与上调丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶，抑制p-JNK表达相关。下一步研究应着重于STS对ERK
33、以及p35 信号通路的上下游分子的影响，进一步阐明STS抗心肌肥厚的机制，为其在临床用于心肌肥厚的防治提供实验依据11,13对心血管管系统的的影响、对对脑血管管和细胞胞的影响响、对肿肿瘤细胞胞的作用用、对神神经系统统的影响响、抗菌菌作用目目前对丹丹参酮IIIa 及其钠钠盐的药药理作用用研究取取得了一一定成果果，但很很少有人人报道其其在心血血管受体体的药理理学方面面和在体体内与其其他药物物的相互互作用方方面的研研究55。但但是其杂杂质一直直很少有有研究，丹丹参酮IIIa磺磺酸钠原原料及丹丹参酮IIIA磺磺酸钠注注射液上上市后，发发现无论论是原料料还是水水针剂在在生产和和销售过过程中都都会由于于储
34、存而而出现酸酸性增强强，含量量降低的的现象因因为原有有质量标标准没有有对丹参参酮IIIa磺酸酸钠原料料及丹参参酮IIIa磺酸酸钠制剂剂有关物物质进行行有效监监控。经经HPLLC检查查，丹参参酮IIIa磺酸酸钠原料料及制剂剂中均存存在一未未知杂质质成分高高达7%-155%。目前，丹丹参酮IIIa磺磺酸钠研研究主要要还是集集中在其其药理活活性的探探讨上，原原料中的的微量杂杂质成分分的研究究还是空空白。由由于丹参参酮IIIa磺酸酸钠是丹丹参提取取物经过过化进一一步磺化化制得，因因此其可可能的杂杂质主要要有两个个来源，一一是作为为磺化原原料的参参酮IIIa中没没有纯化化干净的的其他丹丹参酮类类化合物物
35、，一是是磺化过过程中丹丹参酮IIIa其其他残留留丹参酮酮磺化产产物及其其副产物物，基于于此方面面的考虑虑，本课课题采用用色谱及及波谱方方法对丹丹参酮IIIa磺磺酸钠的的微量杂杂质的分分离及结结构鉴定定。采用用硅胶、大大孔树脂脂等柱层层析方法法对丹参参酮IIIa磺酸酸钠的微微量杂质质进行制制备分离离，运用用1H,133C，NNMR等等波谱技技术鉴定定化合物物的结构构。我们们准备在在这方面面进行初初步的研研究。进进一步制制备大量量高纯度度样品作作为杂质质含量测测定和结结构鉴别别及质量量控制的的方法，并并比较了了不同条条件下的的分离效效果，建建立了一一个简单单的含量量测定方方法可以以用来作作为原料料
36、药的和和注射剂剂的质量量控制。2原料药药中微量量成分的的分离及及结构鉴鉴定2.1实实验方法法2.1.1实验验仪器Agillentt 11100 系列高高效液相相色谱仪仪Shimm-paack CLCC-ODDS-CC18(1500mn*6.00mn 5m)色谱谱柱VWD型型紫外检检测器HP CChemmstaatioon 色色谱工作作站（美美国惠普普公司）JZH柱柱温箱（天天津金洲洲科学仪仪器有限限公司）旋蒸蒸发发仪2.1.2 实实验试剂剂甲醇（色色谱纯，江江苏汉邦邦科技有有限公司司）乙酸（分分析纯，南南京化学学试剂有有限公司司）氯仿（分分析纯，上上海凌峰峰化学试试剂有限限公司）丙酮（分分析纯
37、，南南京化学学试剂有有限公司司 ）95%乙乙醇 硅胶HH（2000-3300目目）大孔树脂脂2.1.3 原原料药中中微量成成分的分分离准确称取取原料药药粗品22g，置置于1000mll圆底烧烧瓶中加加水约225mll，超声声使其充充分溶解解。然后后置于回回流装置置上温度度90回流四四个小时时，将样样品转移移到5000mll楔形瓶瓶内置旋旋蒸仪上上蒸干，样样品用440乙乙醇溶解解，抽滤滤。冷却却后上样样。(原原料药高高效液相相色谱见见图1)图1原料料药粗品品高效液液相色谱谱图原料药上上大孔树树脂吸附附两个小小时后用用40乙醇洗洗脱。用用试管接接馏分，流流速不能能过快。大孔树脂脂收集所所得馏分分反
38、相板板检识（展展开剂550%甲甲醇），对对照品用用95%乙醇溶溶解。点点板后合合并相同同馏分，置置于1000mll楔形瓶瓶内于旋旋蒸仪上上蒸干，然然后用995%乙乙醇少量量溶解，旋旋蒸蒸干干（如果果残留物物成大片片状且色色泽不均均匀可用用95%乙醇再再次溶解解，然后后蒸干）。取取出残留留物转入入试剂瓶瓶内，得得DSTT-1粗品.待上硅硅胶柱。取DSTT-1粗品1100mmg。取取硅胶220g，硅硅胶柱采采用湿法法装柱,干法上上样。以以氯仿：丙酮=1：11洗脱，气气泵加压压。用110mll试管收收集馏分分，TLLC检识识 展开开剂为氯氯仿：甲甲醇=88：2。合合并馏分分后，高高效液相相检测，流流
39、动相：甲醇：2%醋醋酸水=60%：400%；柱柱温355；流速速：1mml/mmin； 检测测波长：2722nm；检测含含量达到到97%以上( 见图图2-11，2-2)。图2-11 DDST-1粗品品高效液液相色谱谱图图2-22 DDST-1粗品品高效液液相色谱谱图2. 22目标化化合物的的结构鉴鉴定及结结果讨论论：羟基丹参参酮IIIa磺酸酸钠的结结构鉴定定：对DDST-1粗品品上硅胶胶柱分离离得到的的样品DDST-1，进进行氢谱谱共振检检测，测测定结果果见图。图3-11DSTT-1样样品氢谱谱扫描图图图3-22样品氢氢谱扫描描图)2.2.1丹参参酮IIIa磺酸酸钠的结结构鉴定定1HNMMR数
40、据据（5000MHHz，TTMS，DDMSOO-d66，(pppm)）77.855(1HH,d,J=88.4 Hz)，7.56(1H,d,JJ=8.1 HHz)说说明为芳芳环上的的氢，22.333(3HH，s)为甲基基峰，且且与双键键相连，11.299(6HH，s)为两个个甲基峰峰，3.08(2H,t,JJ=6.1Hzz)，11.722(2HH,m)，1.62(2H,m)为为三个-CH22-，结结构片断断与丹参参酮IIIa骨架架结构相相似，与与文献报报道的丹丹参酮IIIa磺磺酸钠数数据相比比，化学学位移向向低场移移动，且且峰的裂裂分要清清晰；与与丹参酮酮IIaa相比，H 77.166(1HH,
41、d,J=11.1)峰消失失，且22.333(3HH，s)没有被被裂分，但但其他的的峰位与与裂分基基本相似似，说明明STSS的母核核结构为为丹参酮酮IIaa，且在在16位位磺化。（见见表2.1）2.2.2羟基基丹参酮酮IIaa磺酸钠钠的结构构鉴定1H NNMR数数据H(pppm)：7.87(d,JJ=8HHz,11H)、77.855(d,J=88Hz,1H)为两相相互偶合合的芳环环氢，22.488(s,3H)为甲基基，与双双键相连连，1.40(s,33H)为为甲基，11.288(s,3H)为甲基基，1.98(m,22H)为为两个次次甲基上上的氢，22.155(m,1H)，1.53（mm,1HH）
42、为次次甲基上上的两个个氢，和和化合物物丹参酮酮IIaa磺酸钠钠相比，少少了一个个次甲基基，但多多出两个个相互偶偶合，化化学位移移在5.38(d,JJ=2HHz,11H)，44.599(d,J=22.5HHz,11H)的的氢，考考虑到二二者的化化学位移移，以及及偶极溶溶剂DMMSO-d6与与羟基形形成氢键键，可以以初步推推断其可可能为羟羟基与叔叔甲基相相连的结结构片断断。再加加上在22.155(m,J=113.335Hzz,1HH) ,1.553(mm,J=13.35HHz,11H),可知这这两个氢氢是谐偶偶，由此此可知，该该羟基应应该连在在1位。综合以上上数据确确定目标标化合物物为羟基基丹参酮
43、酮IIaa磺酸钠钠。（其其结构如如图）图 羟基基丹参酮酮IIaa磺酸钠钠结构参考文献献1 、张均均田丹丹参现代代研究概概况与进进展(续续一)医药导导报，220044，233(6)：35536002 、杜冠冠华，张张均田丹参现现代研究究概况与与进展医药导导报，220044,233(7)：433544003 、梁勇勇,羊裔裔明,袁袁淑兰丹参酮酮药理作作用及临临床应用用研究进进展中中草药,20000,31(44)：330430554 、吴杲杲，何招招兵，吴吴汉斌。丹丹参酮的的药理作作用研究究进展。现现代中西西医结合合杂志20055,144(100)：113822133855 、钱名名堃,杨杨保津,顾
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