种子制备精选PPT.ppt

《种子制备精选PPT.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《种子制备精选PPT.ppt（56页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。

1、关于种子制备第1页，讲稿共56张，创作于星期二概念概念 种子制备就是将保存在沙土管、冷冻干燥管中处种子制备就是将保存在沙土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一一定数量和质量定数量和质量的纯种的过程。这些纯种培养物的纯种的过程。这些纯种培养物称为种子。称为种子。第2页，讲稿共56张，创作于星期二第一节第一节 概述概述一、种子扩大培养的目的一、种子扩大培养的目的1.1.为每次发酵罐的投料提供一定数量代谢旺盛的种为每次发酵罐的投料提供一定数量代谢旺盛的种

2、子。子。2.2.缩短发酵时间，提高发酵罐利用率，同时也减缩短发酵时间，提高发酵罐利用率，同时也减少染菌机会少染菌机会 第3页，讲稿共56张，创作于星期二二、优质种子必须具备的条件二、优质种子必须具备的条件菌种细胞的菌种细胞的菌种细胞的菌种细胞的生长活力强生长活力强生长活力强生长活力强，移种至发酵罐后能迅速生长，移种至发酵罐后能迅速生长，移种至发酵罐后能迅速生长，移种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短；迟缓期短；迟缓期短；迟缓期短；生理性状稳定生理性状稳定生理性状稳定生理性状稳定，以得到稳定的菌体生长过程；，以得到稳定的菌体生长过程；，以得到稳定的菌体生长过程；，以得到稳定的菌体生长过程；具有适宜的

3、具有适宜的具有适宜的具有适宜的菌体总量及浓度菌体总量及浓度菌体总量及浓度菌体总量及浓度，满足大容量发酵的要求；，满足大容量发酵的要求；，满足大容量发酵的要求；，满足大容量发酵的要求；无杂菌污染无杂菌污染无杂菌污染无杂菌污染，保持保持保持保持稳定的生产能力稳定的生产能力稳定的生产能力稳定的生产能力，使最终产物的生物合成量持续、，使最终产物的生物合成量持续、稳定、高产。稳定、高产。第4页，讲稿共56张，创作于星期二生产菌种质量的检测标准生产菌种质量的检测标准1.1.无菌试验及显微镜镜检观察有无菌试验及显微镜镜检观察有无杂菌无杂菌2.2.生化测定。糖、氮、生化测定。糖、氮、pHpH、菌体浓度等、菌体

4、浓度等代谢指标代谢指标是是否合格。否合格。3.3.菌丝形态，菌丝浓度，培养液外观（色泽、气味、菌丝形态，菌丝浓度，培养液外观（色泽、气味、浑浊度、浑浊度、颗粒等）。颗粒等）。4.4.产物指标，酶活产物指标，酶活等。等。第5页，讲稿共56张，创作于星期二三、种子扩大培养的工艺流程三、种子扩大培养的工艺流程沙土孢子（冷冻干燥孢子）沙土孢子（冷冻干燥孢子）斜面孢子斜面孢子摇瓶液体培养（茄子瓶斜面培养或固体培养基培摇瓶液体培养（茄子瓶斜面培养或固体培养基培养）养）种子罐培养种子罐培养发酵罐发酵发酵罐发酵实验室阶段：实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在不用种子罐，所用的设

5、备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养实验室阶段的种子培养。生产车间阶段：生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。象地称这些培养过程为生产车间阶段。第6页，讲稿共56张，创作于星期二酵母菌种子的制备酵母菌种子的制备 1.啤酒啤酒 crop，pitch（1）传统敞口上面发酵：）传统敞口上面发酵：top fermentation

6、s middle skimmings，treatments（2）锥形罐发酵锥形罐发酵 酵母活力不高，罐底环境，低温，厌氧保存 Sterols 甾醇 与氧，麦汁通风，酵母通风（3）Active dry yeast(ADY),第7页，讲稿共56张，创作于星期二2.面包酵母面包酵母Reed and Nagodawithana(1991b)，eight stages,first three being aseptic，the last three stages are fed-batch.第8页，讲稿共56张，创作于星期二细菌种子制备细菌种子制备-丙酮丁醇梭菌种子制备第9页，讲稿共56张，创作于星期二

7、棒酸棒酸clavulanic acidclavulanic acid生产菌生产菌Streptomyces clauuligerusStreptomyces clauuligerus （棒酸链霉菌）种子制备种子制备菌菌丝丝体体种种子子制制备备第10页，讲稿共56张，创作于星期二固化培养基（琼脂培养基）产孢第11页，讲稿共56张，创作于星期二第12页，讲稿共56张，创作于星期二谷类作物 大麦，玉米，大米，小米，麦麸等 比表面积大，孢子量多，湿度控制 固体培养基产孢第13页，讲稿共56张，创作于星期二金霉素链霉菌种子制备第14页，讲稿共56张，创作于星期二浸没培养产孢浸没培养产孢第15页，讲稿共56

8、张，创作于星期二第16页，讲稿共56张，创作于星期二沙沙加加霉霉素素种种子子制制备备第17页，讲稿共56张，创作于星期二四、种子扩大培养的方法四、种子扩大培养的方法1.1.孢子进罐法：孢子进罐法：以孢子形式的种子直接进罐的方法以孢子形式的种子直接进罐的方法以孢子形式的种子直接进罐的方法以孢子形式的种子直接进罐的方法先在固体培养基上生长繁殖成大量孢子，将孢子先在固体培养基上生长繁殖成大量孢子，将孢子直接接入种子罐扩大培养。直接接入种子罐扩大培养。优点：一次可以制备较大量的孢子，易于保存。既优点：一次可以制备较大量的孢子，易于保存。既优点：一次可以制备较大量的孢子，易于保存。既优点：一次可以制备较

9、大量的孢子，易于保存。既可以节省大量的人力、物力和时间，又可减少杂菌可以节省大量的人力、物力和时间，又可减少杂菌可以节省大量的人力、物力和时间，又可减少杂菌可以节省大量的人力、物力和时间，又可减少杂菌污染的机会。污染的机会。污染的机会。污染的机会。缺点：砂土管或冷冻管的用量大。缺点：砂土管或冷冻管的用量大。缺点：砂土管或冷冻管的用量大。缺点：砂土管或冷冻管的用量大。第18页，讲稿共56张，创作于星期二2.2.摇瓶菌丝进罐法摇瓶菌丝进罐法将固体培养基上繁殖的孢子接入摇瓶液体培养基中，将固体培养基上繁殖的孢子接入摇瓶液体培养基中，将固体培养基上繁殖的孢子接入摇瓶液体培养基中，将固体培养基上繁殖的孢

10、子接入摇瓶液体培养基中，使其生长繁殖成菌丝，再将摇瓶菌丝接入种子罐扩使其生长繁殖成菌丝，再将摇瓶菌丝接入种子罐扩使其生长繁殖成菌丝，再将摇瓶菌丝接入种子罐扩使其生长繁殖成菌丝，再将摇瓶菌丝接入种子罐扩大培养；大培养；大培养；大培养；优点：优点：优点：优点：节省砂土管或冷冻管的用量，节省砂土管或冷冻管的用量，节省砂土管或冷冻管的用量，节省砂土管或冷冻管的用量，缩短菌种在缩短菌种在缩短菌种在缩短菌种在种子罐内的生长时间种子罐内的生长时间种子罐内的生长时间种子罐内的生长时间。缺点：缺点：菌丝不易保存，批次更换频繁，批与批之菌丝不易保存，批次更换频繁，批与批之菌丝不易保存，批次更换频繁，批与批之菌丝不

11、易保存，批次更换频繁，批与批之间的种子质量有差异，容易造成生产上的波动；间的种子质量有差异，容易造成生产上的波动；间的种子质量有差异，容易造成生产上的波动；间的种子质量有差异，容易造成生产上的波动；由由由由于菌丝制备工艺时间长，增加了杂菌污染的机会。于菌丝制备工艺时间长，增加了杂菌污染的机会。于菌丝制备工艺时间长，增加了杂菌污染的机会。于菌丝制备工艺时间长，增加了杂菌污染的机会。第19页，讲稿共56张，创作于星期二第二节第二节 工业发酵种子的制备工业发酵种子的制备一、实验室种子制备一、实验室种子制备二、生产车间种子制备二、生产车间种子制备第20页，讲稿共56张，创作于星期二一、实验室种子制备一

12、、实验室种子制备1.培养物选择的原则培养物选择的原则目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类：最终的培养物可分为两类：1.1.不产孢子和芽胞的微生物不产孢子和芽胞的微生物 获得一定数量和质量的菌体获得一定数量和质量的菌体2.2.产孢子的产孢子的 获得一定数量和质量的孢子获得一定数量和质量的孢子 获得一定数量和质量的菌体获得一定数量和质量的菌体第21页，讲稿共56张，创作于星期二放线菌孢子的制备放线菌孢子的制备1.1.培养基与培养条件培养基与培养条件 （1 1 1 1）琼脂，和其他营养成分如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨、琼脂，和其他

13、营养成分如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨、琼脂，和其他营养成分如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨、琼脂，和其他营养成分如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨、牛肉膏和一些无机盐等，牛肉膏和一些无机盐等，牛肉膏和一些无机盐等，牛肉膏和一些无机盐等，碳源和氮源不要太丰富，碳氮比碳源和氮源不要太丰富，碳氮比碳源和氮源不要太丰富，碳氮比碳源和氮源不要太丰富，碳氮比例大一些为好，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子的例大一些为好，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子的例大一些为好，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子的例大一些为好，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子的形成形成形成形成。（2 2 2 2）多为多为多为多为28282828，部分

14、为，部分为，部分为，部分为3030或或或或37373737。一般在。一般在。一般在。一般在4 47d7d，也，也，也，也有的为有的为有的为有的为14d14d左右。左右。左右。左右。2.2.流程流程 砂土管砂土管冷冻管冷冻管 母斜面母斜面 孢子悬浮液孢子悬浮液 孢子悬浮液孢子悬浮液 种子罐种子罐子斜面子斜面 第22页，讲稿共56张，创作于星期二霉菌孢子的制备霉菌孢子的制备1.1.培养基与培养条件培养基与培养条件 （1 1 1 1）多数采用大米、小米、玉米、麦麸等天然农产品，来源丰富）多数采用大米、小米、玉米、麦麸等天然农产品，来源丰富）多数采用大米、小米、玉米、麦麸等天然农产品，来源丰富）多数采

15、用大米、小米、玉米、麦麸等天然农产品，来源丰富 ，适合霉菌的生长繁殖，表面积较大，适合霉菌的生长繁殖，表面积较大，适合霉菌的生长繁殖，表面积较大，适合霉菌的生长繁殖，表面积较大 。制备大（小）米培养基，。制备大（小）米培养基，。制备大（小）米培养基，。制备大（小）米培养基，严格控制含水量，使其不粘不散严格控制含水量，使其不粘不散严格控制含水量，使其不粘不散严格控制含水量，使其不粘不散。（2 2 2 2）2525252528282828，培养时间随菌种而不同，一般为，培养时间随菌种而不同，一般为，培养时间随菌种而不同，一般为，培养时间随菌种而不同，一般为4 4 4 414d14d14d14d。为

16、。为。为。为了使通气均匀，了使通气均匀，了使通气均匀，了使通气均匀，要注意翻动要注意翻动要注意翻动要注意翻动。2.2.流程流程 砂土管砂土管冷冻管冷冻管 菌悬液菌悬液大（小）米培养基大（小）米培养基“亲米亲米”琼脂斜面琼脂斜面 孢子悬浮液孢子悬浮液 大（小）米培养基大（小）米培养基“生产米生产米”种子罐种子罐 第23页，讲稿共56张，创作于星期二细菌孢子的制备细菌孢子的制备1.1.培养基与培养条件培养基与培养条件 （1 1 1 1）采用采用采用采用碳源限量而氮源丰富的配方碳源限量而氮源丰富的配方碳源限量而氮源丰富的配方碳源限量而氮源丰富的配方。牛肉膏、蛋白胨是。牛肉膏、蛋白胨是。牛肉膏、蛋白胨

17、是。牛肉膏、蛋白胨是常用的有机氮源。常用的有机氮源。常用的有机氮源。常用的有机氮源。（2 2 2 2）细菌培养温度大多数为细菌培养温度大多数为细菌培养温度大多数为细菌培养温度大多数为37373737，少数为，少数为，少数为，少数为28282828。细菌菌。细菌菌。细菌菌。细菌菌体培养时间一般为体培养时间一般为体培养时间一般为体培养时间一般为1 1 1 12d2d2d2d，产芽孢的细菌则需培养，产芽孢的细菌则需培养，产芽孢的细菌则需培养，产芽孢的细菌则需培养5 5 5 510d10d10d10d。2.2.流程流程 冷冻管冷冻管 砂土管砂土管种子罐种子罐斜面斜面F1（第（第1代）代）斜面斜面F2（

18、第（第2代）代）Fn（n代代)第24页，讲稿共56张，创作于星期二2 2、培养基选择的原则、培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基培养基应该是有利于孢子的生长应该是有利于孢子的生长。在原料方面，实验室种子培养阶段，规模在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。培养基的原料一般都比较精细。第25页，讲稿共56张，创作于星期二3 3、起始接种物的传代问题、起始接种物的传代问题细菌和酵母细菌和酵母保藏斜面保藏斜面 活化斜面活化斜面产孢子

19、产孢子保藏保藏 母斜面母斜面 子斜面子斜面目的目的：使菌种的传代次数尽可能的少。：使菌种的传代次数尽可能的少。第26页，讲稿共56张，创作于星期二 母瓶：母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去除变异株。活化、纯化，使保藏菌种生长，并去除变异株。所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。子瓶子瓶:大量繁殖，得到大量孢子。大量繁殖，得到大量孢子。接种：接种：从母斜面上点接种，选取生长好的单菌落。从母斜面上点接种，选取生长好的单菌落。接种时密一点，得到大量的孢子。接种时密一点，得到大量的孢子。孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过孢子培养时注意湿度，子斜面

20、使用一般不超过1 1个月个月孢子培养过程孢子培养过程第27页，讲稿共56张，创作于星期二二、生产车间阶段二、生产车间阶段1 1、培养物的选择原则、培养物的选择原则最终一般都是获得一定数量的菌丝体。最终一般都是获得一定数量的菌丝体。(1)(1)缩短发酵时间缩短发酵时间(2)(2)有利于获得好的发酵结果有利于获得好的发酵结果菌丝体比孢子要有利：菌丝体比孢子要有利：第28页，讲稿共56张，创作于星期二2 2、培养基选择的原则、培养基选择的原则目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的择应首先考虑的是有利于孢子的

21、发育和菌体的生长，所以生长，所以营养要比发酵培养基丰富。营养要比发酵培养基丰富。在原料方面：在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而是本接近不如实验室阶段那么精细，而是本接近于发酵培养基于发酵培养基，这有两个方面的原因，这有两个方面的原因:一是成本一是成本 二是驯化二是驯化第29页，讲稿共56张，创作于星期二例：柠檬酸发酵例：柠檬酸发酵1.以蔗糖为原料以蔗糖为原料成分成分 斜面斜面 种子罐种子罐 发酵发酵麦芽汁麦芽汁 麦汁麦汁 蔗糖蔗糖 2.5-5%20%NH4NO3 0.225%0.11%K2HPO4 0.03%MgSO4.H2O 0.025%0.025%KCl 0.015%琼脂琼脂 2%第3

22、0页，讲稿共56张，创作于星期二2.2.薯干粉薯干粉成分成分 斜面斜面 种子罐种子罐 发酵发酵麦芽汁麦芽汁 麦汁麦汁 薯干粉薯干粉 10%22-28%(NH4)2SO4 0.5%琼脂琼脂 2%第31页，讲稿共56张，创作于星期二3 3、种子罐级数的确定、种子罐级数的确定谷氨酸：谷氨酸：一级种子扩大培养，二级发酵一级种子扩大培养，二级发酵茄子瓶斜面或摇瓶种子茄子瓶斜面或摇瓶种子一级种子罐一级种子罐发酵罐发酵罐青霉素：青霉素：二级种子扩大培养，三级发酵二级种子扩大培养，三级发酵孢子悬液孢子悬液 一级种子罐一级种子罐 二级种子罐二级种子罐发酵罐发酵罐 50m50m3 3发芽罐发芽罐繁殖罐繁殖罐链霉素

23、：链霉素：三级种子扩大培养，四级发酵三级种子扩大培养，四级发酵小型罐（小型罐（5-30L5-30L）：直接孢子或菌丝体接入罐中发酵，）：直接孢子或菌丝体接入罐中发酵，一级发酵一级发酵第32页，讲稿共56张，创作于星期二发酵级数确定的依据发酵级数确定的依据q 级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量的影响级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量的影响q 级数大，难控制、易染菌、易变异，管理困级数大，难控制、易染菌、易变异，管理困难，一般难，一般2-42-4级。级。第33页，讲稿共56张，创作于星期二4 4、接种量的确定、接种量的确定 移入种子的体积移入种子的体积接种量接种量 接种后培养液的体积接种后培养

24、液的体积过大过小都不好，最终以实践定，如大多数抗生素为过大过小都不好，最终以实践定，如大多数抗生素为7-7-15%15%。但是一般认为大一点好。但是一般认为大一点好。双种：两个种子罐接种到一个发酵罐中。双种：两个种子罐接种到一个发酵罐中。倒种：一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发倒种：一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发酵罐。酵罐。第34页，讲稿共56张，创作于星期二5 5、种龄、种龄种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。或发酵罐时的培养时间。种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。原则

25、：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。大，但是最终由实验结果定。第35页，讲稿共56张，创作于星期二6 6、种子的质量要求：、种子的质量要求：量：要求达到一定的浓度量：要求达到一定的浓度质质:形态形态 （生长处于某个阶段、均匀等等）（生长处于某个阶段、均匀等等）理化指标：理化指标：C C、N N、P P的含量，的含量，pHpH，酶活等，酶活等 无污染无污染第36页，讲稿共56张，创作于星期二影响种子质量的因素影响种子质量的因素1.1.1.1.原材料质量原材料质量原材料质量原材料质量 麸皮，大（小）米；蛋白胨等，主要是无

26、机离子含量不同。麸皮，大（小）米；蛋白胨等，主要是无机离子含量不同。麸皮，大（小）米；蛋白胨等，主要是无机离子含量不同。麸皮，大（小）米；蛋白胨等，主要是无机离子含量不同。2.2.2.2.培养温度培养温度培养温度培养温度对多数微生物的斜面孢子质量有显著影响对多数微生物的斜面孢子质量有显著影响对多数微生物的斜面孢子质量有显著影响对多数微生物的斜面孢子质量有显著影响龟裂链霉菌斜面，最适温度为龟裂链霉菌斜面，最适温度为龟裂链霉菌斜面，最适温度为龟裂链霉菌斜面，最适温度为36.536.536.536.537373737；温度高于；温度高于；温度高于；温度高于37373737，则孢子成熟早、易老化，则孢

27、子成熟早、易老化，则孢子成熟早、易老化，则孢子成熟早、易老化 3.3.3.3.湿度湿度湿度湿度斜面孢子培养基的湿度对孢子形成的速度、数量和质量有很大影响。斜面孢子培养基的湿度对孢子形成的速度、数量和质量有很大影响。斜面孢子培养基的湿度对孢子形成的速度、数量和质量有很大影响。斜面孢子培养基的湿度对孢子形成的速度、数量和质量有很大影响。4.4.4.4.通风与搅拌通风与搅拌通风与搅拌通风与搅拌种子罐中种子罐中种子罐中种子罐中5.5.5.5.培养时间和冷藏时间培养时间和冷藏时间培养时间和冷藏时间培养时间和冷藏时间衰老的孢子不如年轻的孢子，因为衰老的孢子已在逐步进入发芽阶段，物质趋于衰老的孢子不如年轻的

28、孢子，因为衰老的孢子已在逐步进入发芽阶段，物质趋于衰老的孢子不如年轻的孢子，因为衰老的孢子已在逐步进入发芽阶段，物质趋于衰老的孢子不如年轻的孢子，因为衰老的孢子已在逐步进入发芽阶段，物质趋于分化状态。分化状态。分化状态。分化状态。土霉素菌种斜面培养土霉素菌种斜面培养土霉素菌种斜面培养土霉素菌种斜面培养4.5d4.5d4.5d4.5d，孢子尚未完全成熟，冷藏，孢子尚未完全成熟，冷藏，孢子尚未完全成熟，冷藏，孢子尚未完全成熟，冷藏7 7 7 78d8d8d8d菌丝即开始自溶；培养菌丝即开始自溶；培养菌丝即开始自溶；培养菌丝即开始自溶；培养5d5d5d5d，孢子完全成熟，冷藏，孢子完全成熟，冷藏，孢

29、子完全成熟，冷藏，孢子完全成熟，冷藏20d20d20d20d也不会自溶也不会自溶也不会自溶也不会自溶 第37页，讲稿共56张，创作于星期二1.松a,关E，开F，蒸汽过A，杀菌；2.关F，开E，移走a，无菌空气过A，降温；3.松B，连接A和B，关E，C通入无菌空气，增压；4.开E，种子压入发酵罐；5.关E，移走种子罐，上a，开F，杀菌种子无菌进罐方法种子无菌进罐方法种子无菌进罐方法种子无菌进罐方法第38页，讲稿共56张，创作于星期二第39页，讲稿共56张，创作于星期二1.松松A,B，人蒸汽，人蒸汽20min，灭菌灭菌;2.紧紧A,B，关，关E,G，开，开D,F,C，无菌空气进大罐，无菌空气进大罐

30、，降温；降温；3.种子罐与种子罐与A,B松连，关松连，关D,H,I,C，开，开E,F,G,20min；4.紧紧A,B，关，关E,G，开，开D，保压，降温；保压，降温；5.当大罐压力低于当大罐压力低于5psi，关，关F，开，开H,I,C，压入种子液，压入种子液6.关关D,H,I,C，加塞，加塞，开，杀菌，清管线。开，杀菌，清管线。第40页，讲稿共56张，创作于星期二1.开，开，D,I,A,B,H,E,F开，开，C关，实罐灭菌，关，实罐灭菌，2.20min后，关小后，关小GJ，闭闭H,I，维持适当压力，维持适当压力，F,E,D保持开，使连接保持开，使连接管充满无菌培养基，管充满无菌培养基，待发酵内

31、培养基降至待发酵内培养基降至预期温度，种子罐加预期温度，种子罐加压至压至10psi，发酵罐维，发酵罐维持持2psi。3.开开C，压入，压入4.连接管灭菌，移走连接管灭菌，移走第41页，讲稿共56张，创作于星期二一、谷氨酸生产的种子制备一、谷氨酸生产的种子制备制备过程制备过程斜面菌种斜面菌种一级种子培养一级种子培养二级种子培养二级种子培养发酵发酵第三节第三节 种子制备过程举例种子制备过程举例第42页，讲稿共56张，创作于星期二1 1、斜面、斜面 (AS1.299)(AS1.299)培养基：蛋白胨培养基：蛋白胨 1%1%，牛肉膏，牛肉膏1%1%，氯化钠，氯化钠 0.50.5 琼脂琼脂 2%2%，p

32、H 7.0-7.2pH 7.0-7.2培养基特点：培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细有利于菌体的生长，原料比较精细培养条件：培养条件：3232，生长，生长18-2418-24小时小时生长斜面要求：生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过生长良好，所使用斜面连续传代不超过3 3次次第43页，讲稿共56张，创作于星期二2.一级一级种子（摇瓶）种子（摇瓶）培养条件：于培养条件：于1000ml三角瓶中，装液三角瓶中，装液200-250ml,32培培养养12小时。小时。培养基：葡萄糖培养基：葡萄糖2%，尿素，尿素0.5%，玉米浆，玉米浆 2.5%，K2HPO4 0.1%培养基特点：培养基

33、特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基有利于菌体的生长，所使用的原料已经基本接近于发酵培养基本接近于发酵培养基 第44页，讲稿共56张，创作于星期二3.3.二级种子二级种子(种子罐种子罐)培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%1%），），3232培养培养7-107-10个小时个小时培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，浓度为替，浓度为2.5%2.5%培养基的特点培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基：长菌体，更接近于发酵培养基第45页，讲稿共56张，创作于星期二种子的质量要求：种子的质量要

34、求：10108 8-10-109 9个个/ml/ml大小均匀，呈单个或八字排列大小均匀，呈单个或八字排列PH 7.0-7.2PH 7.0-7.2时结束，时结束，6.887.0-7.26.887.0-7.2活力旺盛活力旺盛第46页，讲稿共56张，创作于星期二二、青霉素生产的种子制备二、青霉素生产的种子制备制备过程制备过程安瓿管安瓿管 斜面孢子斜面孢子 大米孢子大米孢子 一级种子一级种子 二级种子二级种子 发酵发酵第47页，讲稿共56张，创作于星期二一、斜面孢子一、斜面孢子培养基：甘油、培养基：甘油、葡萄糖、葡萄糖、蛋白胨等蛋白胨等培养基特点：培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细有利于长孢子，用

35、量少而精细培养条件：培养条件：2525、7 7天天,注意湿度注意湿度50%50%左右左右第48页，讲稿共56张，创作于星期二二、大米孢子二、大米孢子培养基：大米及氮源（玉米浆）培养基：大米及氮源（玉米浆）培养基的特点：培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于孢子的生长。白点小）有利于孢子的生长。培养条件：培养条件：2525、7 7天，控制湿度天，控制湿度大米孢子的要求：大米孢子的要求：1 1粒米含粒米含1.4*101.4*106 6个孢子个孢子第49页，讲稿共56张，创作

36、于星期二3 3、一级种子、一级种子培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆目的：目的：长菌体长菌体培养条件：培养条件：2727，4040小时小时接种量：接种量：200200亿孢子亿孢子/吨吨4 4、二级种子、二级种子培养基：同上培养基：同上培养条件：培养条件：2727、10-1410-14小时小时接种量：接种量：10%10%第50页，讲稿共56张，创作于星期二种子的质量要求种子的质量要求菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于期期青霉素发酵菌丝体的生长共分为青霉素发酵菌丝体的生长共分为6 6个期，个期，1-41

37、-4为年青期，为年青期，4-64-6期合成青霉素的能力最强期合成青霉素的能力最强第51页，讲稿共56张，创作于星期二本章小节：本章小节：了解种子扩培的工艺过程及其中的基本概念了解种子扩培的工艺过程及其中的基本概念理解种子扩培的目的和要求理解种子扩培的目的和要求掌握控制种子质量的基本方法和手段掌握控制种子质量的基本方法和手段第52页，讲稿共56张，创作于星期二 pichia stipitis 等天然酵母的木糖乙醇发酵 Saccharomyces cerevisiae 的葡萄糖乙醇发酵第53页，讲稿共56张，创作于星期二第54页，讲稿共56张，创作于星期二0.51 g ethanol/g xylo

38、seIf the XR and XDH reaction stoichiometry is replaced with xylose isomerase(XI)in the reaction network,the following extreme pathway is obtained:This represents anaerobic xylose fermentationif we consider cell growth,the maximum ethanol yield becomes 0.26 g ethanol/g xylose.第55页，讲稿共56张，创作于星期二03.10.202203.10.2022感感谢谢大大家家观观看看第56页，讲稿共56张，创作于星期二