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1、关于抗生素类药物的分析(11)第1页，此课件共98页哦第一节第一节 概述概述抗生素的定义抗生素的定义 抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。抗生素的来源抗生素的来源1.1.生物合成（发酵）生物合成（发酵）2.2.化学合成或半合成化学合成或半合成第2页，此课件共98页哦抗生素质量的复杂性抗生素质量的复杂性 产品稳定性差产品稳定性差分子结构大多不稳定，降解后分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效或增加毒副作疗效下降、失效或增加毒副作用用发酵过程不易控制易受污染发酵
2、过程不易控制易受污染生产工艺复杂生产工艺复杂发酵液中杂质发酵液中杂质 无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产物、色无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产物、色素、热原、毒性物质素、热原、毒性物质 第3页，此课件共98页哦增加增加 异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌 检查检查含量测定方法含量测定方法（一）生物学方法（一）生物学方法测定抗生素抑菌或杀菌的能力测定抗生素抑菌或杀菌的能力优点优点1、与临床效果一致、与临床效果一致2、灵敏度高、灵敏度高3、干扰物质少、干扰物质少缺点缺点1、操作繁琐、操作繁琐2、培养时间长、培养时间长2、测定误差大、测定误差大
3、第4页，此课件共98页哦（二）化学及物理化学方法（二）化学及物理化学方法以理化方法测定主药含量以理化方法测定主药含量优点优点1.准确度高准确度高2.简单、快速简单、快速1.不一定代表生物效价不一定代表生物效价缺点缺点2.易受杂质干扰易受杂质干扰分类分类（按结构与性质）：（按结构与性质）：内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类、林可霉素类、其他抗氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类、林可霉素类、其他抗生素类生素类第5页，此课件共98页哦第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类第6页，此课件共98页哦头孢菌素类头
4、孢菌素类青霉素青霉素（青霉素（青霉素G、苄青霉素）、苄青霉素）第7页，此课件共98页哦氨苄西林（氨苄青霉素）氨苄西林（氨苄青霉素）阿莫西林（羟氨苄青霉素）阿莫西林（羟氨苄青霉素）第8页，此课件共98页哦普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素头孢氨苄头孢氨苄第9页，此课件共98页哦头孢拉定头孢拉定头孢羟氨苄头孢羟氨苄第10页，此课件共98页哦头孢噻吩钠头孢噻吩钠第11页，此课件共98页哦结构与性质结构与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐，易溶于水成盐，易溶于水（一）羧基（一）羧基 酸性酸性第12页，此课件共98页哦与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐，难溶于水成盐，难溶于水 普鲁
5、卡因普鲁卡因青霉素青霉素第13页，此课件共98页哦（二）手性（二）手性C 旋光性旋光性 (5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 第14页，此课件共98页哦 （三）共轭体系（三）共轭体系 UV 头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 第15页，此课件共98页哦青霉素钠青霉素钠UV7-20第16页，此课件共98页哦第17页，此课件共98页哦（四）（四）内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定性因素
6、不稳定性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 （某些金属离子）（某些金属离子）（温度）（温度）某些氧化剂某些氧化剂第18页，此课件共98页哦例例青霉素的降解反应青霉素的降解反应青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑酰青霉噻唑酰基羟胺酸基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2第19页，此课件共98页哦二、二、K+、Na+反应反应（一）（一）鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 +醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+焰色焰色紫色紫色 +0.1%四苯硼钠四苯硼钠+Ac 白白 K+（二）呈色反应
7、（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类NaOH呈色呈色Fe3+/3H+第20页，此课件共98页哦H+Fe3+/3（红、棕、褐）（红、棕、褐）第21页，此课件共98页哦2、与与H2SO4-HNO3反应反应头孢菌素类头孢菌素类3.茚三酮茚三酮反应反应-氨基氨基第22页，此课件共98页哦-氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色第23页，此课件共98页哦4.双缩脲反应双缩脲反应-内酰胺类内酰胺类（开环分解）（开环分解）似肽键似肽键蓝紫色蓝紫色第24页，此课件共98页哦（三）沉淀反应（三）沉淀反应1.遇酸遇酸在过
8、量在过量在过量在过量HClHCl或或或或有机溶剂中溶解有机溶剂中溶解有机溶剂中溶解有机溶剂中溶解2.有机胺盐反应有机胺盐反应重氮化重氮化-偶合反应偶合反应 重氮化重氮化-偶合反应偶合反应芳伯氨基芳伯氨基第25页，此课件共98页哦普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素第26页，此课件共98页哦光谱法光谱法（四）（四）1、UV法法样品、分解产物样品、分解产物Cu2+头孢氨苄头孢氨苄 max=262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm=1.301.50第27页，此课件共98页哦Cu2+pH3.8第28页，此课件共98页哦第29页，此课件共98页哦氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.
9、682双氯青霉素双氯青霉素 342 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328(nm)第30页，此课件共98页哦2、IR法法-内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺第31页，此课件共98页哦色谱法色谱法（五）（五）1、TLC法法对照品对照法对照品对照法2、HPLC法法第32页，此课件共98页哦三、三、含量测定含量测定（水解）（水解）碘量法碘量法（一）（一）1.原理原理水解产物水解产物定量过量定量过量剩余剩余-内酰胺类内酰胺类ChP第33页，此课件共98页哦反应分两步进行：反应分两步进行：1.水解反应水解反应 (按化学计算量进行按化学计算量进行)2.氧氧化化-还还原原反反应应 (无无固固定定的的量量关
10、关系系，受受温温度度、PH值值和和时时间间等等因因素素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定)第一步第一步第二步第二步第34页，此课件共98页哦V样空样空V样样对照液对照液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 V对空对空V对对2.方法方法供试液供试液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 空白试验空白试验A、消除样品已降解产物的干扰、消除样品已降解产物的干扰B、消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰、消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰C、消除碘挥发造成的误差、
11、消除碘挥发造成的误差 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定第35页，此课件共98页哦空白空白样品样品I2Na2S2O3I-I2 采用标准品平行对照测定采用标准品平行对照测定A、可消除温度、可消除温度、pH、操作、环境等条件的影响、操作、环境等条件的影响B、使本法测定结果与微生物检定法一致、使本法测定结果与微生物检定法一致第36页，此课件共98页哦3.条件条件（1）弱酸性）弱酸性 pH4.5碱碱 I2 IO3-+I-酸酸 普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐沉淀普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐沉淀（2）温度）温度 2426温度温度38 未水解的供试品亦消耗碘未水解的供试品亦消耗碘
12、（3）水解时间）水解时间以水解以水解20分钟后的分钟后的耗碘量最大耗碘量最大（4）反应时间）反应时间反应反应20分钟后，分钟后，耗碘量随时间的变化较耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误差。小，可减小含量测定的误差。第37页，此课件共98页哦4.特点特点（1）灵敏度高）灵敏度高样品样品:碘碘 =1:8（2）反应条件、实验操作要求高）反应条件、实验操作要求高V对对、V对空对空V样样、V样空样空1份含量份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同加试剂次序、反应时间、滴定速度相同4I28I-5.计算计算原料原料第38页，此课件共98页哦汞量法汞量法（二）（二）1.原理原理（水解）（水解）青霉素族青
13、霉素族ChP2.方法方法醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液pH4.6滴定滴定水解水解pH4.6滴定滴定样样品品 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定第39页，此课件共98页哦3、讨论讨论（1）以第二次滴定突跃为终点以第二次滴定突跃为终点 电位法指示终点电位法指示终点 （2）反应摩尔比反应摩尔比 1:1（3）空白试验空白试验 消除已降解产物干扰消除已降解产物干扰（4）优点优点 不需标准品不需标准品4、计算计算第40页，此课件共98页哦 精密称取含水量为精密称取含水量为0.5%的青霉素钠的青霉素钠0.0502g，按药典方法测定总青，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液霉素含量时，用
14、去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密称取上述。另精密称取上述样品样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液，按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。(去硝酸去硝酸汞滴定液的理论浓度为汞滴定液的理论浓度为0.02mol/L)homework酸碱滴定法酸碱滴定法（三）（三）1、原理原理（钠盐）（钠盐）-内酰胺类内酰胺类ChP第41页，此课件共98页哦2、方法方法第42页，此课件共98页哦3、讨论讨论（1）水解前先中和溶剂和样品水解前先
15、中和溶剂和样品（2）加热时避免吸收加热时避免吸收CO2不能使酚酞变红不能使酚酞变红（3）空白试验校正空白试验校正(消除消除Na2CO3干扰干扰)（4）特点特点 简便快速，不适用于有残留酯的产品简便快速，不适用于有残留酯的产品第43页，此课件共98页哦（水解）（水解）可见可见-紫外分光光度法紫外分光光度法（四）（四）1、酸水解法（铜盐法）酸水解法（铜盐法）（1）原理）原理稳定剂稳定剂JP青霉素族青霉素族（2）计算）计算2、硫醇汞盐法硫醇汞盐法（1）原理）原理（咪唑）（咪唑）青霉素族青霉素族ChP第44页，此课件共98页哦咪唑咪唑第45页，此课件共98页哦（2）方法）方法对照品法对照品法计算计算p
16、H 9（3）讨论）讨论a.咪唑催化的水解产率高，硫醇汞盐稳定（咪唑催化的水解产率高，硫醇汞盐稳定（3h）b.侧链有侧链有-NH2时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发生上时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发生上述反应述反应第46页，此课件共98页哦pH9（4）特点）特点A、简便快速、简便快速B、用标准品对照，重现性良好，、用标准品对照，重现性良好，RSD1%第47页，此课件共98页哦HPLC法法（五）（五）特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）一法多用（鉴别、检查、含测）第48页，此课件共98页哦第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖
17、苷类抗生素链霉素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素 新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素链霉胍链霉胍+链霉糖链霉糖+N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺第49页，此课件共98页哦链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺第50页，此课件共98页哦链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺第51页，此课件共98页哦庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 +脱氧链霉胺脱氧链霉胺 +加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 第52页，此课件共98页哦绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加
18、洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺第53页，此课件共98页哦绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺第54页，此课件共98页哦庆大霉素庆大霉素C复合物复合物 庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1=R2=H 庆大霉素庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3第55页，此课件共98页哦一、一、结构与性质结构与性质多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素
19、3个个庆大霉素庆大霉素 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）第56页，此课件共98页哦链霉素链霉素 pH57.5庆大霉素庆大霉素 pH212 稳定稳定UV（三）（三）稳定性稳定性（四）（四）链霉素水解产物反应链霉素水解产物反应（五）（五）第57页，此课件共98页哦坂口反应坂口反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应麦芽酚反应麦芽酚反应第58页，此课件共98页哦二、二、鉴别鉴别 茚三酮反应茚三酮反应（一）（一）羟基胺结构羟基胺结构第59页，此课件共98页哦N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（二）（二）乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨
20、基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+红色红色（Elson-Morgan反应）反应）第60页，此课件共98页哦(缩合缩合)第61页，此课件共98页哦红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+第62页，此课件共98页哦 麦芽酚反应麦芽酚反应（三）（三）链霉糖特有反应链霉糖特有反应H+分子重排分子重排第63页，此课件共98页哦紫红紫红麦芽酚麦芽酚第64页，此课件共98页哦链霉胍特有反应链霉胍特有反应（或或-萘酚萘酚）8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反应坂口反应（四）（四）-萘酚萘酚第65页，此课件共98页哦第66页，此课件共98页哦（四）（四）反应反应H+UV法法（五）（五）IR法法（六）（六）庆大霉素无庆大
21、霉素无UV吸收吸收TLC法法（七）（七）第67页，此课件共98页哦三、三、检查检查链霉素杂质链霉素杂质（一）（一）链霉素链霉素B（甘露糖链霉素）（甘露糖链霉素）2.方法方法 TLC中的对照品法中的对照品法3.（BP）1.来源来源 反应中间体反应中间体第68页，此课件共98页哦对微生物的活性无明显差异对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分含量规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素庆大霉素C组分的测定组分的测定（二）（二）第69页，此课件共98页哦max=330
22、nm衍生化原理衍生化原理 1.1.第70页，此课件共98页哦1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基异吲哚衍生物异吲哚衍生物第71页，此课件共98页哦第72页，此课件共98页哦第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素ABCD第73页，此课件共98页哦123456789101112第74页，此课件共98页哦四环素四环素（TC）tetracycline第75页，此课件共98页哦金霉素金霉素(CTC)chlortetracycline氯四环素氯四环素第76页，此课件共98页哦土霉素土霉素(OTC)oxytetracycline氧四环素氧四环素第77页，此课件共98页哦多西环素多西环素(DOTC)doxy
23、cycline脱氧土霉素脱氧土霉素第78页，此课件共98页哦美他环素美他环素（METC）metacycline第79页，此课件共98页哦第80页，此课件共98页哦一、一、结构与性质结构与性质两性两性（一）（一）1.与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性第81页，此课件共98页哦吸湿性吸湿性（二）（二）多含结晶水多含结晶水与金属离子生成有色配位化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+UV（三）（三）与金属离子络合与金属离子络合（四）（四）pH3 7.5 荧
24、光荧光 第82页，此课件共98页哦第83页，此课件共98页哦不稳定性不稳定性（四）（四）1.差向异构化差向异构化淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光第84页，此课件共98页哦差向四环素差向四环素第85页，此课件共98页哦（土霉素、多西环素不易差向异构化）（土霉素、多西环素不易差向异构化）第86页，此课件共98页哦2.降解反应降解反应（1）酸性下降解酸性下降解max=445nmmax=435nm橙黄色橙黄色第87页，此课件共98页哦脱水四环素脱水四环素第88页，此课件共98页哦TCETCATCEATC第89页，此课件共98页哦（2）碱性下降解碱性下降解（荧光）（荧光）第90页，此课件共98页哦二、二、鉴
25、别试验鉴别试验H2SO4反应反应（一）（一）第91页，此课件共98页哦FeCl3反应反应（二）（二）第92页，此课件共98页哦Cl-反应反应（三）（三）1mol/L盐酸盐酸-甲醇（甲醇（1100）0.01mg/mlUV法法（四）（四）第93页，此课件共98页哦荧光法荧光法（五）（五）UV绿色荧光绿色荧光H+UVTLC法法（六）（六）IR法法（七）（七）第94页，此课件共98页哦三、三、检查检查 4-差向四环素（差向四环素（ETC）脱水四环素（脱水四环素（ATC）差向脱水四环素（差向脱水四环素（EATC）盐酸金霉素（盐酸金霉素（CTC）有关物质有关物质（一）（一）标准品对照法标准品对照法盐酸四环
26、素盐酸四环素四、四、含量测定含量测定ChP、USPHPLC法（外标法）法（外标法）第95页，此课件共98页哦99：89下列哪个药物会发生羟肟酸铁反应（下列哪个药物会发生羟肟酸铁反应（）A.青霉素青霉素 B.庆大霉素庆大霉素 C.红霉素红霉素 D.链霉素链霉素 95：139属于属于-内酰胺类的抗生素药物有（内酰胺类的抗生素药物有（）A.青霉素青霉素 B.红霉素红霉素 C.头孢菌素头孢菌素 D.庆大霉素庆大霉素 E.四环素四环素45能和茚三酮发生呈色反应的物质有（能和茚三酮发生呈色反应的物质有（）A链霉素链霉素 B庆大霉素庆大霉素 C土霉素土霉素 D氨基酸氨基酸 E苯巴比妥苯巴比妥第96页，此课件共98页哦96：135.青霉素类药物可用下面哪些方法测定（青霉素类药物可用下面哪些方法测定（）A.三氯化铁比色法三氯化铁比色法 B.汞量法汞量法 C.碘量法碘量法 D.硫醇汞盐法硫醇汞盐法 E.酸性染料比色法酸性染料比色法110能发生重氮化一偶合反应的抗生素类药物是（能发生重氮化一偶合反应的抗生素类药物是（）A.青霉素青霉素 B.庆大霉素庆大霉素 C.苄星青霉素苄星青霉素 D.盐酸四环素盐酸四环素 E.普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素第97页，此课件共98页哦感谢大家观看第98页，此课件共98页哦