《抗生素类药物的分析课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抗生素类药物的分析课件.ppt（85页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、抗生素抗生素类药物的分析物的分析第1页，此课件共85页哦第一第一节概述概述定定义：在低微在低微浓度下即可度下即可对某些生物的生命活某些生物的生命活动有有 特异抑制作用的化学物特异抑制作用的化学物质的的总称。称。来源来源:多数抗生素生物合成多数抗生素生物合成(发酵酵)少数化学合成或者半合成少数化学合成或者半合成2第2页，此课件共85页哦性性质复复杂：化学化学纯度低度低三多：同系物多三多：同系物多 异构体多异构体多 降解物多降解物多活性活性组份易份易变异异稳定性差定性差3第3页，此课件共85页哦1 1、抗生素、抗生素类药物一般物一般检查项目：目：鉴别试验鉴别试验:用化学法、物理化学法以及生物学法来
2、确用化学法、物理化学法以及生物学法来确用化学法、物理化学法以及生物学法来确用化学法、物理化学法以及生物学法来确认认是哪种抗生素是哪种抗生素是哪种抗生素是哪种抗生素毒性毒性毒性毒性试验试验:控制控制控制控制药药品中的毒性物品中的毒性物品中的毒性物品中的毒性物质质无菌无菌无菌无菌试验试验:检查药检查药品中有无品中有无品中有无品中有无杂杂菌菌菌菌污污染染染染热热源源源源试验试验:控制控制控制控制药药品中的致品中的致品中的致品中的致热热物物物物质质水分水分水分水分测测定定定定:控制水分含量控制水分含量控制水分含量控制水分含量溶液澄明度溶液澄明度溶液澄明度溶液澄明度检查检查:检查检查不溶性物不溶性物不溶
3、性物不溶性物质质 溶液溶液溶液溶液pHpH试验试验:测测定定定定pHpH降降降降压试验压试验:检查检查有降有降有降有降压压作用的作用的作用的作用的杂质杂质 效价效价效价效价测测定定定定:有效成分有效成分有效成分有效成分测测定定定定4第4页，此课件共85页哦2 2、效价、效价测定定抗生素活性表示方法：效价。抗生素活性表示方法：效价。效价：每毫升或每毫克含有某种抗生素的有效成效价：每毫升或每毫克含有某种抗生素的有效成分的多少。分的多少。抗生素的效价抗生素的效价测定方法有定方法有:生物学法生物学法物理化学法物理化学法目前各国目前各国药典仍以生物学典仍以生物学测定法定法为主。主。青霉素青霉素钠：167
4、0单位位/毫克毫克庆大霉素：大霉素：590单位位/毫克毫克5第5页，此课件共85页哦(1)(1)(1)(1)生物学生物学生物学生物学测测定法定法定法定法以抗生素抑制以抗生素抑制以抗生素抑制以抗生素抑制细细菌生菌生菌生菌生长长能力或能力或能力或能力或杀杀菌能力作菌能力作菌能力作菌能力作为为衡量效价衡量效价衡量效价衡量效价标标准。准。准。准。优优点：点：点：点：原理恰好与原理恰好与原理恰好与原理恰好与临临床要求一致，更能床要求一致，更能床要求一致，更能床要求一致，更能够够确定抗生素效价。确定抗生素效价。确定抗生素效价。确定抗生素效价。灵敏度高，需要灵敏度高，需要灵敏度高，需要灵敏度高，需要样样品量
5、品量品量品量较较小小小小 既适用既适用既适用既适用较纯较纯精制品精制品精制品精制品,也适用于也适用于也适用于也适用于纯纯度度度度较较差的差的差的差的产产品品品品 已知或新已知或新已知或新已知或新发现发现抗生素都能抗生素都能抗生素都能抗生素都能应应用用用用同一同一同一同一类类型的抗生素型的抗生素型的抗生素型的抗生素,不需要分离不需要分离不需要分离不需要分离,可一次可一次可一次可一次测测定它定它定它定它们们的的的的总总效价。效价。效价。效价。缺点缺点缺点缺点:操作步操作步操作步操作步骤骤多，多，多，多，测测定定定定时间较长时间较长 误误差差差差较较大大大大6第6页，此课件共85页哦(2)(2)(2
6、)(2)物理化学物理化学物理化学物理化学测测定法定法定法定法 根根根根据据据据抗抗抗抗生生生生素素素素化化化化学学学学结结构构构构利利利利用用用用其其其其特特特特有有有有的的的的化化化化学学学学或或或或物物物物理理理理化化化化学学学学性性性性质质及反及反及反及反应进应进行。行。行。行。优优点点点点:操作操作操作操作简单简单、省、省、省、省时时、方法准确、方法准确、方法准确、方法准确 具有具有具有具有较较高的高的高的高的专专属性属性属性属性 缺点缺点缺点缺点:对对于于于于结结构相似的抗生素，构相似的抗生素，构相似的抗生素，构相似的抗生素，测测定定定定结结果往往只能代表果往往只能代表果往往只能代表
7、果往往只能代表总总的含量，并不一定能代表某一抗生素的生物效价，只有当的含量，并不一定能代表某一抗生素的生物效价，只有当的含量，并不一定能代表某一抗生素的生物效价，只有当的含量，并不一定能代表某一抗生素的生物效价，只有当用物理化学法用物理化学法用物理化学法用物理化学法测测定定定定结结果与用生物学法果与用生物学法果与用生物学法果与用生物学法测测定效价相一致定效价相一致定效价相一致定效价相一致时时，才能用于效价才能用于效价才能用于效价才能用于效价测测定。定。定。定。7第7页，此课件共85页哦3 3、本章内容、本章内容 -内内酰胺胺类:青霉素青霉素类头孢菌素菌素类氨基糖苷氨基糖苷类:链霉素霉素庆大霉素
8、大霉素四四环素素类8第8页，此课件共85页哦一、化学结构与性质1、化学结构青霉素类结构母核母核:由由-内内酰胺胺环和和氢化化噻唑环组成的双成的双杂环。6-6-氨基青霉氨基青霉氨基青霉氨基青霉烷烷酸酸酸酸（6APA）母核无母核无母核无母核无UVUV吸收吸收吸收吸收不稳定不稳定*酸性酸性第二第二节-内内酰胺胺类抗生素的分析抗生素的分析9第9页，此课件共85页哦（青霉素（青霉素G、苄青霉素）青霉素）10第10页，此课件共85页哦氨氨苄西林西林（氨（氨苄青霉素）青霉素）11第11页，此课件共85页哦阿莫西林阿莫西林（羟氨氨苄青霉素）青霉素）12第12页，此课件共85页哦头孢菌素类结构母核母核:-内内酰
9、胺胺环和二和二氢噻嗪环组成的双成的双杂环。不稳定不稳定酸性酸性*7-7-氨基头孢菌烷酸氨基头孢菌烷酸氨基头孢菌烷酸氨基头孢菌烷酸（7ACA）母核有母核有母核有母核有UVUV吸收吸收吸收吸收13第13页，此课件共85页哦头孢氨氨苄14第14页，此课件共85页哦头孢拉定拉定15第15页，此课件共85页哦头孢羟氨氨苄16第16页，此课件共85页哦2 2、性、性质青霉素青霉素类和和头孢菌素菌素类结构共同特点：构共同特点：具有具有-内内酰胺胺环。酸性酸性有有羧基，具有酸性基，具有酸性pKa值在在2.52.5-2.8之之间与碱成与碱成盐如：青霉素如：青霉素G钠、青霉素、青霉素G钾等等17第17页，此课件共
10、85页哦 旋光性旋光性有手性碳原子，具有旋光性有手性碳原子，具有旋光性3 3个手性碳原子个手性碳原子（C3、C5、C6）2 2个手性碳原子个手性碳原子（C6、C7）18第18页，此课件共85页哦紫外吸收紫外吸收 青霉素青霉素类母核没有共母核没有共轭系系统，没有紫外吸收，没有紫外吸收 但但青青霉霉素素类药物物在在弱弱酸酸性性下下水水解解，可可以以产生生具具有共有共轭双双键的青霉的青霉烯酸，在紫外光区有吸收。酸，在紫外光区有吸收。侧链中中有有苯苯环等等取取代代基基的的药物物，在在紫紫外外光光区区也也有吸收。像有吸收。像苄青霉素。青霉素。头孢菌素菌素类分子中有共分子中有共轭体系（体系（OCNCC），
11、），在在260260nm处有最大吸收。有最大吸收。19第19页，此课件共85页哦20第20页，此课件共85页哦-内内酰胺胺环的不的不稳定性定性干燥、干燥、纯净青霉素青霉素类抗生素抗生素稳定，其水溶液定，其水溶液很不很不稳定，不定，不稳定的部分是定的部分是-内内酰胺胺环。-内内酰胺胺环在酸、碱、青霉素在酸、碱、青霉素酶、某些金、某些金属离子的作用下，可使属离子的作用下，可使-内内酰胺胺环开开环或或发生生分子重排，而失去抗菌作用。分子重排，而失去抗菌作用。21第21页，此课件共85页哦22第22页，此课件共85页哦二、二、鉴别试验1 1、羟肟酸酸铁反反应(-内内酰胺胺类)23第23页，此课件共85
12、页哦2、茚三三酮反反应24第24页，此课件共85页哦3、双双缩脲反反应（-内内酰胺胺类）似肽键似肽键（开环分解）（开环分解）25第25页，此课件共85页哦4、与与变色酸色酸-硫酸反硫酸反应（活（活泼“-CH2-”）青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨氨苄西林西林26第26页，此课件共85页哦5、与重氮苯磺酸反与重氮苯磺酸反应（酚（酚羟基）基）（偶合）（偶合）举例：例：头孢哌酮27第27页，此课件共85页哦6、UV法法头孢氨氨苄max=262nm青霉素青霉素V钠A280nm/A264nm=1.301.50Cu2+28第28页，此课件共85页哦7、IR法（法（chp2010版）版）该类该类抗生素共有的特
13、征峰：抗生素共有的特征峰：抗生素共有的特征峰：抗生素共有的特征峰：内内酰胺胺环羰基（基（17501800cm-1）；）；仲仲酰胺的氨基、胺的氨基、羰基（基（3300cm-1，1525cm-1，1680cm-1）；）；羧酸离子（酸离子（1600cm-1、1410cm-1）；）；取代苯（取代苯（760850cm-1）29第29页，此课件共85页哦30第30页，此课件共85页哦8、色、色谱法法（1）TLC法法（2）HPLC法（法（chp2010版）版）31第31页，此课件共85页哦1 1、碘量法、碘量法原理：青霉素或原理：青霉素或头孢菌素分子不消耗碘，其在碱菌素分子不消耗碘，其在碱性条件下水解生成的
14、降解性条件下水解生成的降解产物物青霉青霉噻唑酸可与碘酸可与碘作用，根据消耗的碘量可以作用，根据消耗的碘量可以计算青霉素的含量。算青霉素的含量。三、含量三、含量测定定32第32页，此课件共85页哦方法：方法：以以“青霉素青霉素钠”为例例（1）主）主试验：33第33页，此课件共85页哦（2）空白）空白试验：空白空白试验：做法与一般空白不同（加：做法与一般空白不同（加样品品,不加不加碱水解碱水解,其他操作同其他操作同样品）品）目的：消除目的：消除样品中品中预先存在的降解先存在的降解产物（青物（青霉霉噻唑酸）及其他耗碘酸）及其他耗碘杂质的影响的影响34第34页，此课件共85页哦2、HPLC法（法（ch
15、p2010）特点：快速、高效、灵敏特点：快速、高效、灵敏专属性属性强、重、重现性好性好一法多用（一法多用（鉴别、检查、含、含测）35第35页，此课件共85页哦头孢呋辛辛酯例例36第36页，此课件共85页哦第三第三节氨基糖苷氨基糖苷类抗生素的分析抗生素的分析一、化学一、化学结构及性构及性质（一）（一）链霉素霉素1、结构构37第37页，此课件共85页哦链霉素霉素38第38页，此课件共85页哦2、性性质：（1）三个碱性中心：）三个碱性中心：2个个强碱性胍基（碱性胍基（PKa=11.5）1个甲胺基（个甲胺基（PKa=7.7）可与可与矿酸或有机酸成酸或有机酸成盐（硫酸（硫酸盐）（2）链霉素在酸性或碱性条
16、件下可霉素在酸性或碱性条件下可变为链霉胍和霉胍和链霉双糖胺霉双糖胺39第39页，此课件共85页哦（二）（二）庆大霉素大霉素11、结构构40第40页，此课件共85页哦2、性性质：（1）五个碱性中心）五个碱性中心可与可与矿酸或有机酸成酸或有机酸成盐（2）无）无UV吸收，（因吸收，（因为无共无共轭系系统）41第41页，此课件共85页哦二、二、鉴别试验（一）（一）共同反共同反应 1、茚三三酮反反应氨基糖苷氨基糖苷结构，具构，具羟基胺基胺类和和-氨基酸氨基酸的性的性质，可与，可与茚三三酮缩合成合成蓝紫色紫色缩合物。合物。42第42页，此课件共85页哦2 2、N-甲基葡萄糖胺反甲基葡萄糖胺反应（Elson
17、-Morgan反反应）水解水解产物物N-甲基葡萄糖胺特有反甲基葡萄糖胺特有反应。43第43页，此课件共85页哦3、Molisch试验该类药物酸水解后，在物酸水解后，在盐酸（硫酸）作用酸（硫酸）作用下脱水成糠下脱水成糠醛或或羟甲基糠甲基糠醛，遇，遇-萘酚或蒽酚或蒽酮显色。色。44第44页，此课件共85页哦4、SO42-反反应H+5、TLC法法6、IR法法7、UV法法8、HPLC法法45第45页，此课件共85页哦（二）（二）链霉素的特征反霉素的特征反应1、麦芽酚反、麦芽酚反应：链霉素在碱性溶液中，霉素在碱性溶液中，链酶糖糖经分子重排，分子重排，消除消除N甲基葡萄糖胺及甲基葡萄糖胺及链酶胍，生成麦牙
18、胍，生成麦牙酚，麦牙酚可与酚，麦牙酚可与铁离子在微酸性溶液中形离子在微酸性溶液中形成紫成紫红色配位化合物。色配位化合物。46第46页，此课件共85页哦47第47页，此课件共85页哦2、坂口反、坂口反应（链霉胍特有反霉胍特有反应）48第48页，此课件共85页哦1.1.微生物微生物检定法：本法系利用抗生素在定法：本法系利用抗生素在琼脂培养基内脂培养基内的的扩散作用量反散作用量反应平行平行线原理的原理的设计，比，比较标准品与准品与供供试品两者品两者对接种的接种的试验菌菌产生抑菌圈的大小，以生抑菌圈的大小，以测定供定供试品效价的一种方法。品效价的一种方法。三、含量三、含量测定（定（链霉素、霉素、庆大霉
19、素）大霉素）2.2.衍生化衍生化HPLC法：法：选用用OPA为荧光衍生化光衍生化试剂。（2005版）版）3.3.直接直接HPLCHPLC法：蒸发光散射检测器（法：蒸发光散射检测器（20102010版）版）49第49页，此课件共85页哦第四第四节四四环素素类抗生素的分析抗生素的分析50第50页，此课件共85页哦四四环素（素（TC）tetracycline51第51页，此课件共85页哦金霉素金霉素(CTC)chlortetracycline52第52页，此课件共85页哦一、化学一、化学结构构53第53页，此课件共85页哦A A环环B B环环C C环环DD环环二甲氨基二甲氨基二甲氨基二甲氨基N(CH
20、N(CH3 3)2 2酚酚酚酚羟羟基基基基酰酰胺基胺基胺基胺基CONHCONH2 2酮酮基与基与基与基与烯烯醇共醇共醇共醇共共共共共轭轭酮酮基与基与基与基与烯烯醇基共醇基共醇基共醇基共轭轭双双双双键键系系系系统统双双双双键键系系系系统统54第54页，此课件共85页哦二、性二、性质 1、呈两性：、呈两性：弱酸性弱酸性酚酚羟基、基、烯醇型醇型羟基基弱碱性弱碱性二甲胺基二甲胺基所以遇酸或碱均可成所以遇酸或碱均可成盐55第55页，此课件共85页哦2、含、含结晶水晶水四四环素：素：6个个结晶水占晶水占19.6%土霉素：土霉素：2个个结晶水占晶水占7.5%加加热时可失去可失去结晶水晶水,当含水量当含水量低
21、于低于19.6%的四的四环素和低于素和低于7.5%的土的土霉素霉素,置于空气中要吸收水分。置于空气中要吸收水分。56第56页，此课件共85页哦3 3、溶解度：、溶解度：游游离离体体在在水水中中溶溶解解度度很很小小，溶溶解解度度与与pH有有关关。pH4.5-7.2难溶溶于于水水,pH低低于于4 4或或高于高于8 8时,可以得到高可以得到高浓度的水溶液度的水溶液.57第57页，此课件共85页哦4 4稳定性：定性：对各各种种氧氧化化剂都都不不稳定定，且且碱碱性性水水溶溶液液特特别易易氧氧化化，颜色色很很快快变深深形形成成色色素素，干干燥燥品品较稳定定，但但贮存存时遇遇光光可可使使颜色色变深深（因空气
22、氧化）。（因空气氧化）。58第58页，此课件共85页哦三化学反三化学反应：1.1.差向异构化反差向异构化反应：（差向四：（差向四环素）素）弱弱酸酸性性（pH2.0-6.0）溶溶液液中中，A环上上手手性性C4构构型型的的改改变，发生生差差向向异异构构化化，形形成成差差向向四四环素。素。差差向向化化速速度度的的影影响响因因素素：pH9时，差差向向化化速速度度很很小小。高高价价的的无无机机酸酸或或有有机机酸酸根根存在或阴离子存在或阴离子浓度增加，差向化速度增大。度增加，差向化速度增大。59第59页，此课件共85页哦60第60页，此课件共85页哦2.2.酸性下降解反酸性下降解反应:（脱水四（脱水四环素
23、素类）在在酸酸性性（pH2）时，C环上上C6上上羟基基易易脱脱落落与与C5a上上的的氢生生成成水水，在在C6-C5a间形形成成双双键。经重重排排使使C环芳芳构构化化，生生成成脱脱水水四四环素素类。四四环素素、土土霉霉素素和和金金霉霉素素可可发生生脱脱水水；强力力霉素不霉素不发生（生（C6无无OH）。）。61第61页，此课件共85页哦62第62页，此课件共85页哦3.3.碱性下降解反碱性下降解反应：（异四：（异四环素素类）在在碱碱性性下下，C环打打开开，生生成成无无活活性性的的具具有有内内酯结构构的的异异四四环素素；若若强碱碱性性下下加加热，可可定定量量地地转化化为异异四四环素素，后后者者具具有
24、有强烈烈荧光，可光，可荧光法光法测定。定。强力霉素不力霉素不发生反生反应，因，因C6无无OH。63第63页，此课件共85页哦4.4.与金属离子与金属离子络合：合：能能与与许多多金金属属离离子子（锆Zr4+,铀U6+,锌Zn2+,铜Cu2+,铝Al3+,镁Mg2+，铈Ce4+,钴Co2+）形成有色形成有色络合物。合物。64第64页，此课件共85页哦四四鉴别试验1.1.与与浓硫酸反硫酸反应：65第65页，此课件共85页哦2.2.FeCl3反反应：66第66页，此课件共85页哦3 3荧光反光反应：四四环素素类在在紫紫外外灯灯下下产生生荧光光，其其降降解解产物也具有物也具有荧光，可供光，可供鉴别。67
25、第67页，此课件共85页哦4、HPLC法法5、TLC法法6、IR法法7、UV法法68第68页，此课件共85页哦五五杂质检查：(一一)有关物有关物质降解降解产物及异构物及异构杂质,会造成会造成药品品质量量下降。可引起下降。可引起恶心、呕吐、糖尿、蛋白尿心、呕吐、糖尿、蛋白尿及酸中毒，称及酸中毒，称为Fanconi症侯群。症侯群。69第69页，此课件共85页哦p引引起起毒毒性性反反应的的主主要要物物质为差差向向异异构构体体、脱水物、差向脱水物脱水物、差向脱水物质，统称称为有关物有关物质。pChP2010采用采用HPLC法法检查。p脱脱水水物物和和差差向向脱脱水水物物含含量量越越高高，其其吸吸收收度
26、度越越大大，因因此此，ChP还规定定杂质的的吸吸收收度度的的限量。限量。4-差向四差向四环素（素（ETC）脱水四脱水四环素（素（ATC）差向脱水四差向脱水四环素（素（EATC）盐酸金霉素（酸金霉素（CTC）70第70页，此课件共85页哦（二）（二）杂质吸收度吸收度盐酸四酸四环素素max=268nmmax=355nm71第71页，此课件共85页哦72第72页，此课件共85页哦系系统适用性适用性试验1.防防护柱柱2.预试溶液溶液4-差向脱水四差向脱水四环素素四四环素素3.RSD2.0%六、含量六、含量测定定-HPLC法（外法（外标法）法）73第73页，此课件共85页哦第五第五节 抗生素抗生素药物中
27、高分子物中高分子杂质的的检查1 1、为为何要何要进进行抗生素中高分子行抗生素中高分子杂质杂质的的检查检查？抗生素是抗生素是临临床用量最大和床用量最大和较较易易发发生不良反生不良反应应的的药药物。其中最常物。其中最常见见的一的一类类不良反不良反应应就是就是过过敏反敏反应应。多。多年来的研究已年来的研究已证证明，在明，在 内内酰酰胺胺类类抗生素所致的抗生素所致的速速发发型型过过敏反敏反应应中，中，药药物分子本身只是半抗原，物分子本身只是半抗原，药药物中存在的高分子物中存在的高分子物中存在的高分子物中存在的高分子杂质杂质才是引才是引才是引才是引发发速速速速发发型型型型过过敏反敏反敏反敏反应应的真的真
28、的真的真正正正正过过敏原敏原敏原敏原，因此因此严严格控制抗生素中高分子格控制抗生素中高分子杂质杂质的含量有的含量有着重要的意着重要的意义义。74第74页，此课件共85页哦2、高分子聚合物的分、高分子聚合物的分类抗生素中的高分子抗生素中的高分子杂质系指系指药品中分子量大于品中分子量大于药物本身的物本身的杂质总称，其分称，其分子量一般在子量一般在10005000Da，个，个别可达可达10000Da左右。左右。内内酰胺胺类抗生素中的高分子抗生素中的高分子杂质按其来源通常被分按其来源通常被分为两两类：外源性外源性杂质和和内源性内源性杂质。外源性外源性杂质包括蛋白、多包括蛋白、多肽、多糖等、多糖等类杂质
29、或抗生素和蛋白、多或抗生素和蛋白、多肽、多糖、多糖等的等的结合物，来源于合物，来源于发酵工酵工艺，如青霉素中的青霉，如青霉素中的青霉噻唑多多肽等。等。内源性内源性杂质是指抗菌是指抗菌药物的自身聚合物的自身聚合产物，聚合物既可来自生物，聚合物既可来自生产过程，又程，又可在可在储存中形成，甚至在用存中形成，甚至在用药时也可也可产生。生。对于于现在的生在的生产工工艺，外源性的，外源性的高分子高分子杂质已已经较少少产生，生，对内源性聚合物的控制是当前抗生素高分子内源性聚合物的控制是当前抗生素高分子杂质质量控制的重点。量控制的重点。75第75页，此课件共85页哦3.高分子高分子杂质的控制方法的控制方法
30、凝胶色凝胶色凝胶色凝胶色谱谱法（分子排阻色法（分子排阻色法（分子排阻色法（分子排阻色谱谱法）法）法）法）是根据是根据是根据是根据分子大小分子大小分子大小分子大小进进行分离的一种液行分离的一种液行分离的一种液行分离的一种液相色相色相色相色谱谱技技技技术术。药药物分子物分子物分子物分子进进入凝胶孔径内部，保留入凝胶孔径内部，保留入凝胶孔径内部，保留入凝胶孔径内部，保留时间较长时间较长。而高分子。而高分子。而高分子。而高分子杂质杂质则则被排阻在外，在色被排阻在外，在色被排阻在外，在色被排阻在外，在色谱过谱过程中不被保留，最早被洗脱出来，保留程中不被保留，最早被洗脱出来，保留程中不被保留，最早被洗脱出
31、来，保留程中不被保留，最早被洗脱出来，保留时间较时间较短。短。短。短。根据根据根据根据-内内内内酰酰胺胺胺胺类类抗生素和其高分子抗生素和其高分子抗生素和其高分子抗生素和其高分子杂质杂质的分子量，的分子量，的分子量，的分子量，选选用用用用SephadexG-10SephadexG-10 作作作作为为-内内内内酰酰胺胺胺胺类类抗生素高分子抗生素高分子抗生素高分子抗生素高分子杂质杂质分离色分离色分离色分离色谱谱系系系系统统的凝胶介的凝胶介的凝胶介的凝胶介质质。SephadexG-10SephadexG-10排阻分子量在排阻分子量在排阻分子量在排阻分子量在10001000道道道道尔顿尔顿左右。左右。左
32、右。左右。根据根据-内内酰胺胺类抗生素在不同离子抗生素在不同离子强度的介度的介质中具有不同表中具有不同表现状状态的性的性质，建立了，建立了凝胶凝胶色色谱自身自身对照外照外标法定量法定量测定定-内内酰胺胺类抗生素中的聚合物。抗生素中的聚合物。此方此方法已法已经载入入中国中国药典典2000-2010年版，用于国年版，用于国产-内内酰胺胺类抗生素抗生素的的质量控制。量控制。76第76页，此课件共85页哦采用两种流动相：流动相采用两种流动相：流动相采用两种流动相：流动相采用两种流动相：流动相A-pH=7.0A-pH=7.0A-pH=7.0A-pH=7.0的磷酸盐缓冲液，流动相的磷酸盐缓冲液，流动相的磷
33、酸盐缓冲液，流动相的磷酸盐缓冲液，流动相B-B-B-B-纯化水或纯化水或纯化水或纯化水或0.10.10.10.1十二烷基硫酸钠；十二烷基硫酸钠；十二烷基硫酸钠；十二烷基硫酸钠；凝胶介质：凝胶介质：凝胶介质：凝胶介质：Sephadex G-10Sephadex G-10Sephadex G-10Sephadex G-10；检测波长；检测波长；检测波长；检测波长254nm254nm254nm254nm；采用流动相采用流动相采用流动相采用流动相A A A A ：除部分寡聚物外，：除部分寡聚物外，：除部分寡聚物外，：除部分寡聚物外，内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱
34、过内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留；即程中均不保留；即程中均不保留；即程中均不保留；即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰，其，其，其，其KavKavKavKav0 0 0 0。采用流动相采用流动相采用流动相采用流动相B B B B：内酰胺类抗生素可以形成缔合物，导致其表观分子量增内酰胺类抗生素可以形成缔合物，导致其表观分子量增内酰胺类抗生素可以形成缔合物，导致其表观分子量增内酰胺类抗生素可以形成缔合物，导致其表观分子量增大；此时在大；此时在大
35、；此时在大；此时在Sephadex G-10Sephadex G-10Sephadex G-10Sephadex G-10凝胶色谱系统中凝胶色谱系统中凝胶色谱系统中凝胶色谱系统中药物和高分子杂质具有相似的色谱行药物和高分子杂质具有相似的色谱行药物和高分子杂质具有相似的色谱行药物和高分子杂质具有相似的色谱行为，即在为，即在为，即在为，即在KavKavKavKav0 0 0 0处表现为单一的色谱峰。处表现为单一的色谱峰。处表现为单一的色谱峰。处表现为单一的色谱峰。利用此原理，在利用此原理，在利用此原理，在利用此原理，在Sephadex G-10Sephadex G-10Sephadex G-10S
36、ephadex G-10凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标；再改变色谱条件，测定样品中的高分子杂质和药物特定条件下缔合时的峰响应指标；再改变色谱条件，测定样品中的高分子杂质和药物特定条件下缔合时的峰响应指标；再改变色谱条件，测定样品中的高分子杂质和药物特定条件下缔合时的峰响应指标；再改变色谱条件，测定样品中的高分子杂质和药物分离后在分离后在分离后在分离后在KavKavKavKav0 0 0 0处的峰响应指标；进行计算，即得药品
37、中的高分子杂质相当于药品本处的峰响应指标；进行计算，即得药品中的高分子杂质相当于药品本处的峰响应指标；进行计算，即得药品中的高分子杂质相当于药品本处的峰响应指标；进行计算，即得药品中的高分子杂质相当于药品本身的相对含量。身的相对含量。身的相对含量。身的相对含量。77第77页，此课件共85页哦属于属于-内内酰胺胺类的抗生素的抗生素药物有物有 A.青霉素青霉素B.红霉素霉素 C.头孢菌素菌素 D.庆大霉素大霉素E.四四环素素练习题78第78页，此课件共85页哦以下反以下反应可适用的可适用的药物物A.青霉素青霉素B.链霉素霉素 C.两者均能两者均能D.两者均不能两者均不能11Kober反反应2.羟肟
38、酸酸铁反反应3.坂口反坂口反应4.N甲基葡萄糖胺反甲基葡萄糖胺反应5.在酸性溶液中水解在酸性溶液中水解DABBC79第79页，此课件共85页哦可以可以鉴别的的药物是物是 A.链霉素霉素B.庆大霉素大霉素 C.两者均可两者均可D.两者均不可两者均不可1.用用Kober反反应2.用坂口反用坂口反应3.用麦芽酚反用麦芽酚反应4.用三用三氯化化铁反反应 DAAD80第80页，此课件共85页哦四四环素在酸性条件下的降解素在酸性条件下的降解产物是物是A.差向四差向四环素素B.脱水四脱水四环素素C.异四异四环素素D.去甲四去甲四环素素E.去甲氧四去甲氧四环素素81第81页，此课件共85页哦82第82页，此课件共85页哦83第83页，此课件共85页哦BDCE84第84页，此课件共85页哦85第85页，此课件共85页哦