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1、关于动植物细胞培养产酶(3)第一页，讲稿共十七页哦主要内容主要内容n植物细胞培养产酶植物细胞培养产酶n动物细胞培养产酶动物细胞培养产酶要求要求 n了解动、植物细胞及其培养的特点；了解动、植物细胞及其培养的特点；n熟悉动、植物细胞培养的工艺条件及其控制。熟悉动、植物细胞培养的工艺条件及其控制。第三章第三章 动植物细胞培养产酶动植物细胞培养产酶第二页，讲稿共十七页哦一、概述一、概述n1.1.什么是动、植物细胞培养？什么是动、植物细胞培养？动植物细胞在体外条件下的存活或生长。动植物细胞在体外条件下的存活或生长。n2.2.如何获得动、植物细胞？如何获得动、植物细胞？动物细胞动物细胞 ：离心分离、杂交瘤
2、技术、胰蛋白酶消化处理。：离心分离、杂交瘤技术、胰蛋白酶消化处理。植物细胞：机械捣碎或酶解、诱导愈伤组织、原生质体细胞植物细胞：机械捣碎或酶解、诱导愈伤组织、原生质体细胞 壁再生。壁再生。n3.3.动、植物细胞培养方式？动、植物细胞培养方式？动物细胞动物细胞 ：悬浮、贴壁和微载体：悬浮、贴壁和微载体植物细胞植物细胞 ：固体、液体浅层和液体悬浮培养。：固体、液体浅层和液体悬浮培养。n4.4.动、植物细胞培养目的？动、植物细胞培养目的？动物细胞动物细胞 ：疫苗、激素、多肽药物、单克隆抗体、酶、皮肤：疫苗、激素、多肽药物、单克隆抗体、酶、皮肤等人体组织、器官等功能性蛋白质。等人体组织、器官等功能性蛋
3、白质。植物细胞植物细胞 ：色素、药物、香精、酶等次级代谢物。：色素、药物、香精、酶等次级代谢物。第三页，讲稿共十七页哦例：动物细胞培养获得的产物例：动物细胞培养获得的产物第四页，讲稿共十七页哦例：植物细胞培养获得的产物例：植物细胞培养获得的产物第五页，讲稿共十七页哦动、植物细胞培养和微生物细胞培养比较动、植物细胞培养和微生物细胞培养比较第六页，讲稿共十七页哦二、植物细胞培养产酶二、植物细胞培养产酶1、从天然植物材料中直接提取、从天然植物材料中直接提取2、从大规模培养的植物细胞中提取、从大规模培养的植物细胞中提取第七页，讲稿共十七页哦n1、从现成植物材料中提取酶的一般步骤、从现成植物材料中提取酶
4、的一般步骤取材取材预处理预处理加提取液捣碎加提取液捣碎离心或过滤除去固体物，离心或过滤除去固体物，收集粗酶液收集粗酶液适当浓缩适当浓缩纯化纯化成品加工成品加工n2、植物细胞培养、植物细胞培养在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中，进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，培养基中，进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种技术。技术。第八页，讲稿共十七页哦2 2、植物细胞培养、植物细胞培养（1 1）植物细胞培养特点）植物细胞培养特
5、点1 1）提高产率）提高产率2 2）缩短周期）缩短周期3 3）易于管理、减轻劳动强度）易于管理、减轻劳动强度4 4）提高产品质量）提高产品质量5 5）其他）其他 对剪切力敏感、生产周期长、生长和代谢需对剪切力敏感、生产周期长、生长和代谢需要一定的要一定的光照光照。（2 2）植物细胞培养的工艺流程）植物细胞培养的工艺流程外植体的选择和处理外植体的选择和处理愈伤组织的诱导愈伤组织的诱导细胞的获取细胞的获取细胞培养细胞培养分离纯化分离纯化产物产物外植体的选择与处理：外植体的选择与处理：选择外植体、切取片段、消毒处理。选择外植体、切取片段、消毒处理。植物愈伤组织植物愈伤组织直接分离法直接分离法机械捣碎
6、发：动作轻柔机械捣碎发：动作轻柔酶分解法：纤维素酶、果胶酶等酶分解法：纤维素酶、果胶酶等过滤、离心分离过滤、离心分离愈伤组织诱导法愈伤组织诱导法能迅速增殖、无特定结构和功能的薄壁细胞团能迅速增殖、无特定结构和功能的薄壁细胞团外植体外植体半固体培养基半固体培养基灭菌、冷却灭菌、冷却生长素、分裂素生长素、分裂素插入插入培养培养2525愈伤组织愈伤组织1-31-3周周分散、接种分散、接种原生质体再生原生质体再生去除细胞壁后得到的微球体去除细胞壁后得到的微球体第九页，讲稿共十七页哦3 3、植物细胞培养产酶的工艺特点、植物细胞培养产酶的工艺特点n培养基培养基（1 1）植物细胞的生长和代谢需要大量无机盐；
7、）植物细胞的生长和代谢需要大量无机盐；（2 2）植物细胞需要多种维生素和植物生长激素；）植物细胞需要多种维生素和植物生长激素；（3 3）植物细胞需求的氮源一般为无机氮源；）植物细胞需求的氮源一般为无机氮源；（4 4）植物细胞一般以蔗糖为碳源、浓度为）植物细胞一般以蔗糖为碳源、浓度为2-5%2-5%。n培养温度和培养温度和pH适宜温度在适宜温度在20-25，酶合成温度因植物种类而异；，酶合成温度因植物种类而异；植物细胞培养要求稳定的植物细胞培养要求稳定的pH，一般控制在，一般控制在pH5.8-6.1最好。最好。n通气和搅拌通气和搅拌耗氧速率较慢，细胞比较大，较脆弱，耗氧速率较慢，细胞比较大，较脆
8、弱，对剪切力敏感对剪切力敏感，所以，通气和搅拌不，所以，通气和搅拌不能太强烈。能太强烈。n其他其他光照光照：对一些植物酶有诱导作用或抑制作用。：对一些植物酶有诱导作用或抑制作用。刺激物：在酶合成时期，适当添加。刺激物：在酶合成时期，适当添加。第十页，讲稿共十七页哦三、动物细胞培养产酶三、动物细胞培养产酶1、从动物材料中直接提取、从动物材料中直接提取2、从大规模培养的动物细胞中提取、从大规模培养的动物细胞中提取第十一页，讲稿共十七页哦第十二页，讲稿共十七页哦1 1、动物细胞培养的特点、动物细胞培养的特点n（1）主要用于功能蛋白质和多肽的生产）主要用于功能蛋白质和多肽的生产n（2）生长较慢，）生长
9、较慢，15-100hn（3）需要添）需要添加抗生素以防染菌加抗生素以防染菌n（4）无细胞壁，体积较大，）无细胞壁，体积较大，对剪切力敏感对剪切力敏感，要求严格控制培养条件，要求严格控制培养条件如通风、搅拌、如通风、搅拌、pH、渗透压等渗透压等n（5）大部分动物细胞有）大部分动物细胞有锚地依赖性，需要贴壁培养锚地依赖性，需要贴壁培养n（6）培养基成分复杂，）培养基成分复杂，分离纯化复杂，成本较高分离纯化复杂，成本较高，多用于高价值药，多用于高价值药物的生产物的生产n（7）原代细胞）原代细胞培养培养50代之后即会退化死亡代之后即会退化死亡，需要重新分离细胞，需要重新分离细胞第十三页，讲稿共十七页哦
10、2、动物细胞培养方式动物细胞培养方式悬浮培养悬浮培养 血液、淋巴组织的细胞血液、淋巴组织的细胞贴壁培养贴壁培养 成纤维细胞型（成纤维细胞型（fibroblast）上皮细胞型上皮细胞型(epithilium cell type)游走细胞型游走细胞型(wondering cell type)多形性细胞型多形性细胞型(polymorphic cell type)固定化细胞培养固定化细胞培养第十四页，讲稿共十七页哦3 3、动物细胞培养的工艺条件及其控制、动物细胞培养的工艺条件及其控制n（1）动物细胞获取过程：）动物细胞获取过程：体细胞体细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞融合融合淋巴细胞淋巴细胞肿瘤细胞肿瘤细胞杂
11、交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞动物细胞培养过程培养过程细胞细胞蛋白酶消化蛋白酶消化分散分散培养培养分离分离纯化纯化n（2）动物细胞培养基的组成成分：）动物细胞培养基的组成成分：氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖、激素、生长因子。氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖、激素、生长因子。n（3）动物细胞培养基条件：）动物细胞培养基条件：（1）温度：一般控制在）温度：一般控制在36.5，允许温度波动范围在，允许温度波动范围在0.25之内。之内。（2）pH值：一般控制在值：一般控制在pH7.0-7.6微碱性范围内，通常在微碱性范围内，通常在pH7.4的条件下生长最好。的条件下生长最好。（3）渗透压渗透压：培养液中渗透压应当与细胞内的渗透压处于等渗状态，：培养液中渗透压应当与细胞内的渗透压处于等渗状态，一般控制在一般控制在700-850kPa范围内。范围内。（4）溶解氧：至关重要，供氧不足时，细胞生长受到抑制，）溶解氧：至关重要，供氧不足时，细胞生长受到抑制，供氧过量时，也会对细胞产生毒害。供氧过量时，也会对细胞产生毒害。第十五页，讲稿共十七页哦3 3、动物细胞培养的工艺条件及其控制、动物细胞培养的工艺条件及其控制n（2）动物细胞培养基的组成成分：）动物细胞培养基的组成成分：n（1）动物细胞获取过程：）动物细胞获取过程：第十六页，讲稿共十七页哦感谢大家观看27.09.2022第十七页，讲稿共十七页哦