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1、关于高中生物第三章第二节月季的花药培养1新人教版选修1第一页，讲稿共二十六页哦1 1、被子植物定义：、被子植物定义：凡是种子有果皮包被着，胚珠凡是种子有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物。有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物。一、被子植物和裸子植物一、被子植物和裸子植物2 2、裸子植物定义：、裸子植物定义：凡是胚珠裸露，外面没有子房凡是胚珠裸露，外面没有子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物称为裸子植壁包被，种子外面没有果皮包被的植物称为裸子植物。物。实例：玉米、大豆、梨、杏实例：玉米、大豆、梨、杏实例：松、杉、柏实例：松、杉、柏第二页，讲稿共二十六页哦第三页，讲稿共二十六页
2、哦花的结构：花的结构：花梗、花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊蕊3 3、花的结构、花的结构第四页，讲稿共二十六页哦二、二、被子植物花粉粒的形成被子植物花粉粒的形成花丝花丝花药：花药：囊状结构，内有很多花粉粒囊状结构，内有很多花粉粒1 1、雄蕊的结构、雄蕊的结构雄蕊雄蕊：第五页，讲稿共二十六页哦花粉花粉是是花粉母细胞花粉母细胞经过经过减数分裂减数分裂而形成的，因此，而形成的，因此，花粉是花粉是单倍体单倍体的的生殖细胞。生殖细胞。2 2、被子植物花粉的发育、被子植物花粉的发育花粉粒的形成花粉粒的形成花粉母细胞花粉母细胞（小孢子母细胞）（小孢子母细胞）减数分裂减数分裂经历时
3、期：经历时期：四分体时期、单核期、双核期四分体时期、单核期、双核期第六页，讲稿共二十六页哦四分体时期四分体时期（进入单核期）（进入单核期）有丝有丝分裂分裂单核靠边期单核靠边期(小孢子小孢子)单核居中期单核居中期(小孢子小孢子)小孢子小孢子（单核花粉粒）（单核花粉粒）第七页，讲稿共二十六页哦精子精子精子精子有丝有丝分裂分裂花粉管细胞核花粉管细胞核生殖细胞核生殖细胞核生殖细胞生殖细胞营养细胞营养细胞双核期双核期两个精子和一个营养核的基因型相同两个精子和一个营养核的基因型相同第八页，讲稿共二十六页哦1 1个个花花粉母粉母细胞细胞4 4个个小孢小孢子子减数减数分裂分裂有丝有丝分裂分裂4 4个花粉管细胞
4、核个花粉管细胞核4 4个生殖细胞核个生殖细胞核有丝有丝分裂分裂8 8个精子个精子2nnnnn第九页，讲稿共二十六页哦四、产生花粉植株的两条途径四、产生花粉植株的两条途径五、影响花药培养的因素五、影响花药培养的因素1 1、材料的选择、材料的选择没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。其浓度配比。第十页，讲稿共二十六页哦不同植物的诱导成功率很不相同，就同一种植不同植物的诱导成功率很不相同，就同一种植物来说亲本的生理状况对诱导成功率也有直接物来说亲本的生理状况对诱导成功率也有直接影响。影响。选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重选择
5、合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素。要因素。因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，花粉发育的过程中，只有某一个伤组织或胚状体，花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。时期对离体刺激敏感。选材是否成功是花药培养成功的关键。选材是否成功是花药培养成功的关键。选材选材第十一页，讲稿共二十六页哦一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养的成功率最高。即：最适合花药培养时期，花药培养的成功率最高。即：最适合花药培养的小孢子发育时期为的小孢子发育时期为单核靠边
6、期单核靠边期。选择单核期以前的花药接种，选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎质地幼嫩，极易破碎；选择单核期之后的花药接种，花瓣已有些松动，又给选择单核期之后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药。花药培养时期的选择花药培养时期的选择其它其它时期选择的缺点时期选择的缺点第十二页，讲稿共二十六页哦为了挑选到单核期的花药，为了挑选到单核期的花药，通常通常选择完全未开放的花蕾。选择完全未开放的花蕾。盛开的盛开的或略微开放的花，都不宜选作实或略微开放的花，都不宜选作实验材料。验材料。选择完全未开放花蕾的原选择完全未
7、开放花蕾的原因因 完全未开放的花蕾，可挑选完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易到单核期的花药，菌少、易消毒消毒单核期花药的挑选单核期花药的挑选第十三页，讲稿共二十六页哦为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。给材料的消毒带来困难。花药培养时间花药培养时间一般月季的花药培养时间选在一般月季的花药培养时间选在5 5月初到月初到5 5月的中旬，月的中旬，即即月季的初花期月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及生理状。初花期的花蕾营养状态及生理状态会比较好，可提高花
8、粉的诱导成功率。态会比较好，可提高花粉的诱导成功率。第十四页，讲稿共二十六页哦月季花药培养时的花粉粒最好是（月季花药培养时的花粉粒最好是（）A A、四分体时期、四分体时期 B B、单核居中期、单核居中期 C C、单核靠边期、单核靠边期 D D、二核或三核花粉粒、二核或三核花粉粒C C2 2、培养基：、培养基：花药培养基所采用的培养基可能因植物的不同而有花药培养基所采用的培养基可能因植物的不同而有所变化所变化小麦为小麦为N6N6培养基培养基，马铃薯、月季为，马铃薯、月季为MSMS培养培养基基，油菜为，油菜为B5B5培养基。培养基。第十五页，讲稿共二十六页哦3 3、其他因素、其他因素亲本植株的生长
9、条件、材料的低温预处理以及接种亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响的密度等对诱导成功都有一定的影响六、实验操作六、实验操作（一）材料的选取（一）材料的选取某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花焙花青青-铬矾法，铬矾法，这种方法能将这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。花粉细胞核染成蓝黑色。最常用的方法有最常用的方法有醋酸洋红法醋酸洋红法1 1、方法、方法第十六页，讲稿共二十六页哦醋酸洋红法染色机理醋酸洋红法染色机理醋酸洋红为醋酸洋红为碱性染色剂碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是染色体
10、主要成分是DNADNA和蛋白质和蛋白质,易被碱性染料着色易被碱性染料着色染成红色染成红色 。将体积分数将体积分数4545的醋酸的醋酸100ml100ml煮沸，缓缓加入煮沸，缓缓加入1g1g洋红，再加热回流洋红，再加热回流8h8h，冷却至，冷却至5050，过滤即可。，过滤即可。醋酸洋红的配置醋酸洋红的配置2 2、醋酸洋红法、醋酸洋红法第十七页，讲稿共二十六页哦将花药放在载玻片上，加一滴质量分数将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1 1的醋酸的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。下检查。染色操作染色操作3 3、焙花青、焙花青铬钒法铬钒法将无
11、水酒精与冰醋酸按体积比为将无水酒精与冰醋酸按体积比为3 3：1 1的比例混的比例混匀匀卡诺氏固定液的配制方法卡诺氏固定液的配制方法第十八页，讲稿共二十六页哦花药应该在花药应该在卡诺氏固定液中卡诺氏固定液中固定固定20min20min，然后取出，然后取出放在载玻片上，放在载玻片上，加焙花青加焙花青铬钒溶液染色，铬钒溶液染色，盖上盖盖上盖玻片后在显微镜下检查。这种方法能将花粉细胞核染玻片后在显微镜下检查。这种方法能将花粉细胞核染成成蓝黑色蓝黑色。将将5g5g铬明矾铬明矾KK2 2SOSO4 4CrCr2 2(SO(SO4 4)24H)24H2 2OO加入加入90ml90ml蒸蒸馏水中，溶解后加入馏
12、水中，溶解后加入0.1g0.1g焙花青，混匀并加热至沸焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸腾，煮沸5 5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至至100ml100ml。焙花青焙花青铬钒溶液的配制方法铬钒溶液的配制方法染色操作染色操作第十九页，讲稿共二十六页哦（二）材料的消毒（二）材料的消毒1 1、酒精处理、酒精处理花蕾用体积分数花蕾用体积分数为为70%70%的酒精的酒精浸泡浸泡3030秒，立秒，立即取出。即取出。无菌水清洗无菌水清洗无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分第二十页，讲稿共二十六页哦2 2、消毒液处理、消毒液处理 放入放入质量分数为质量
13、分数为0.1%0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中2-42-4分钟分钟（也可质量分数（也可质量分数为为1%1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液溶液）。）。无菌水冲洗无菌水冲洗3-53-5次次用于培养的花药，实际上多数未熟，由于它的外面用于培养的花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。第二十一页，讲稿共二十六页哦在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药要彻底去除花丝，要彻底去除花丝，因为与
14、花丝相连的花药不利于因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。愈伤组织或胚状体的形成。立即将花药接种于培养基上，通常每瓶立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药接种花药7-107-10个个。1 1、剥取花药、剥取花药勿损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产生愈勿损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织。伤组织。2 2、接种、接种注意：注意：（三）接种和培养（三）接种和培养第二十二页，讲稿共二十六页哦培养条件：温度控制在培养条件：温度控制在2525左右，不需要光照。左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。幼小植株形成后才需要光照。3 3、培养、培养培养：一般经过培养：一般经过2
15、0-3020-30天培养后，会发现花药开天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。基上，以便进一步分化出再生植株。注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。株将很难分开。第二十三页，讲稿共二十六页
16、哦在花药培养中，特别是通过愈伤组在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是色体倍性的变化（主要原因是营养营养细胞核和生殖细胞核融合细胞核和生殖细胞核融合造成的）。造成的）。4 4、鉴定和筛选、鉴定和筛选第二十四页，讲稿共二十六页哦5 5、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：植物组织培养技术与花药培养技术的植物组织培养技术与花药培养技术的相同之处相同之处是是：培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基：培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。本相同。两者的不同之处在于两者的不同之处在于：花药培养的选材非常重：花药培养的选材非常重要，需事先摸索时期适宜的花蕾；花药裂开后释要，需事先摸索时期适宜的花蕾；花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花药培养对培养基配方的要求更为严格。这些都花药培养对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药培养的难度大为增加。使花药培养的难度大为增加。第二十五页，讲稿共二十六页哦感感谢谢大大家家观观看看第二十六页，讲稿共二十六页哦