《动物疫病监测采样技术优秀讲稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《动物疫病监测采样技术优秀讲稿.ppt（28页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、动物疫病监测采样技术第一页，讲稿共二十八页哦动物疫病监测的采样技术动物疫病监测的采样技术邱荣斌邱荣斌西南科技大学生命科学与工程学院西南科技大学生命科学与工程学院2014年年11月月18日日第二页，讲稿共二十八页哦主要内容动物疫病物疫病监测的概念及其意的概念及其意义检测样品存在的品存在的问题样品的种品的种类高品高品质样品的特征品的特征如何得到高如何得到高质量的量的样品品第三页，讲稿共二十八页哦动物疫病物疫病监测定定义：调查动物群体中某种疫病或病原的存物群体中某种疫病或病原的存在情况。在情况。通通过监测可以了解可以了解动物疫病的流行物疫病的流行现状、危状、危害程度、害程度、风险因子和因子和发展展趋
2、势，早期，早期识别疫疫病的爆病的爆发和流行。和流行。根据信息来源分根据信息来源分为：问卷卷调查和和实验室室监测。实验室室监测的关的关键:样品和品和检测技技术。第四页，讲稿共二十八页哦实验室室检测技技术病原病原检测：病原本身：病原本身检测，病原特有蛋白，病原特有蛋白检测，病原特有核酸，病原特有核酸检测，动物物试验抗体抗体检测：琼扩，试管凝集，平板凝集，血管凝集，平板凝集，血凝和血凝抑制，中和凝和血凝抑制，中和试验，各种，各种ELISA等。等。在在检测技技术过关的情况下，关的情况下，监测结果是否具果是否具有代表性，是否能有代表性，是否能够真真实反映出疫病的真反映出疫病的真实情况都与情况都与监测样品
3、的采集有重要关系。品的采集有重要关系。第五页，讲稿共二十八页哦如何做好采样工作送检样品中的问题合格样品如何得到合格样品采样中应注意问题第六页，讲稿共二十八页哦一、一、样品存在的品存在的问题样样品的真品的真实实性性（假（假样样品，一个品，一个样样品分开）品分开）样样品的品的质质量（溶血，腐量（溶血，腐败败，反复，反复冻冻融）融）采采样单样单填写的信息不全（畜禽日填写的信息不全（畜禽日龄龄，免疫情，免疫情况等）况等）组织样品采集的太大，不品采集的太大，不专业。样品品编号不能追溯回去。号不能追溯回去。第七页，讲稿共二十八页哦二、二、样品的种品的种类血液血液样品：血清，全血抗凝血，血品：血清，全血抗凝
4、血，血浆组织样品：心肝脾肺品：心肝脾肺肾脑，淋巴，淋巴结，扁，扁桃体桃体粪便便样品：新品：新鲜，湿，湿润的的生殖道和精液生殖道和精液样品品皮肤皮肤样品：皮屑品：皮屑分泌液和渗出液分泌液和渗出液样品：舌面或蹄部的水品：舌面或蹄部的水泡液泡液第八页，讲稿共二十八页哦血液血液样品品血液：最常用的血液：最常用的样品，可以做血清学品，可以做血清学试验的的样品，也可以作品，也可以作为病原学病原学试验的的样品。品。全血（抗凝血）：抗凝全血（抗凝血）：抗凝剂有肝素，阿氏液，枸有肝素，阿氏液，枸橼酸酸钠和和4%EDTA，或者用玻璃珠，脱，或者用玻璃珠，脱纤维蛋白。蛋白。血清：不加抗凝血清：不加抗凝剂的血液，在室
5、温静置的血液，在室温静置24h（或（或371h），待血液完全凝固后，析出上清即），待血液完全凝固后，析出上清即为血清。血清。血血浆：抗凝血混匀后，静置，上清即：抗凝血混匀后，静置，上清即为血血浆。第九页，讲稿共二十八页哦检测样品的分品的分类细菌学菌学检测样品：采集品：采集发病典型或病典型或刚死亡的整体死亡的整体动物送物送实验室室为最好。无菌采集，冷藏，保存液中不加任何抗最好。无菌采集，冷藏，保存液中不加任何抗生素。生素。病毒学病毒学检测样品：病毒品：病毒检测应在在动物病初、体温升高期物病初、体温升高期间采集。以采集。以组织脏器、血液、器、血液、粪便等便等样品品为主主。冷藏或。冷藏或冷冷冻，保存
6、液中加抗生素。，保存液中加抗生素。血清学血清学检测样品：静脉采血品：静脉采血3 ml左右，注射器内留一定空左右，注射器内留一定空间，静置静置过程或已凝固的血液程或已凝固的血液应低温冷低温冷冻，以免溶血。短，以免溶血。短时间内，内，可在可在4度左右保存；如度左右保存；如时间较长应冻结保存，注意不能反复保存，注意不能反复冻融融.病理学病理学检测样品：保品：保证样品新品新鲜，应选择病病变最典型最明最典型最明显的部的部位，且位，且连同部分健康同部分健康组织一并采集。一并采集。浸泡于酒精或福浸泡于酒精或福尔马林溶林溶液中，冷藏保存和运液中，冷藏保存和运输。第十页，讲稿共二十八页哦几种重要疫病的几种重要疫
7、病的采采样时机机禽流感、新城疫：禽流感、新城疫：发病初期采全血，泄殖腔病初期采全血，泄殖腔咽喉棉咽喉棉拭子；后期采集新拭子；后期采集新鲜粪便；剖剪后的气管，肺便；剖剪后的气管，肺脏，肾脏等等口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，O/P液及口腔分泌液及口腔分泌物和咽喉棉拭子物和咽喉棉拭子猪瘟，猪猪瘟，猪伪狂犬，狂犬，蓝耳病：全血，血清，耳病：全血，血清，组织病料：病料：肺肺脏，脾，脾脏，淋巴，淋巴结，扁桃体，流，扁桃体，流产胎衣等，新胎衣等，新鲜精精液或冷液或冷冻精液精液猪流感：在猪流感：在发热期采集鼻咽棉拭子和肺期采集鼻咽棉拭子和肺组织病料。病料。第十一页，讲稿共二十八页
8、哦三、高品三、高品质样品的特征品的特征样品品标记明确明确样品新品新鲜采采样单填写填写规范范样本本样品数量适当品数量适当第十二页，讲稿共二十八页哦四、如何得到高四、如何得到高质量的量的样品品高质量样品采样前准备采样的时效性样本的数量样品的标记样品的保存和运输第十三页，讲稿共二十八页哦1、采、采样前的准前的准备-器具器具采采样工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，镊子，酒精灯，子，酒精灯，酒精棉，棉酒精棉，棉签，保定，保定动物物专用工具用工具样品存放用具：塑料离心管（品存放用具：塑料离心管（1.5，2，5ml），自封口），自封口样品品袋，袋，试管架，塑料管架，塑料样品
9、盒，胶布，封口膜，冰袋。品盒，胶布，封口膜，冰袋。防防护用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔离衣等。用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔离衣等。记录用具：不干胶用具：不干胶标签、圆珠笔、油性珠笔、油性记号笔、采号笔、采样单、记录本本等等第十四页，讲稿共二十八页哦2、采、采样前准前准备采采样技技术血液血液样品：牛、品：牛、马、羊从、羊从颈静脉或尾静脉采血；猪从静脉或尾静脉采血；猪从前腔静脉采血，用量少前腔静脉采血，用量少时也可从耳静脉抽取；家禽从也可从耳静脉抽取；家禽从翅静脉抽取。翅静脉抽取。棉拭子棉拭子样品：泄殖腔，咽喉，鼻腔品：泄殖腔，咽喉，鼻腔水泡皮及水泡液：水泡皮及水泡液：O/P液：保定，左手拉
10、出舌液：保定，左手拉出舌头或从嘴的一或从嘴的一侧按住舌按住舌头，右手右手缓慢放入探杯。慢放入探杯。组织样品：解剖，品：解剖，洁净取取样。第十五页，讲稿共二十八页哦血液血液样品的分离方法品的分离方法抗凝血：采血前在抗凝血：采血前在试管或注射器内按比例加管或注射器内按比例加抗凝抗凝剂，运，运输时必必须减少震减少震荡以免溶血。以免溶血。非抗凝血：分离血清非抗凝血：分离血清血清析出好的因素：容器：玻璃血清析出好的因素：容器：玻璃试管管优于塑于塑料离心管；料离心管；斜面斜面：与空气接触面要大。：与空气接触面要大。温度温度：最佳温度是体温；最佳温度是体温；时间：室温静置最短：室温静置最短2小小时；离心离心
11、：转速要低，速要低，2000转。胶胶冻状血清的成因：采血前状血清的成因：采血前刚刚喂食（没有喂食（没有空腹）；凝血空腹）；凝血时间不不够；脂肪血（；脂肪血（营养养过剩）剩）第十六页，讲稿共二十八页哦粪便、棉拭子和便、棉拭子和O/P液液样品品的采集的采集泄殖腔拭子的采集：将棉拭子插入泄殖腔泄殖腔拭子的采集：将棉拭子插入泄殖腔约1.52cm,旋旋转后沾上后沾上粪便。便。咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：将咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：将灭菌的干棉拭子插入口菌的干棉拭子插入口腔至咽的后部或鼻腔，腔至咽的后部或鼻腔，轻轻擦拭并慢慢旋擦拭并慢慢旋转将拭子拔出，将拭子拔出，将棉拭子放入将棉拭子放入缓冲液内。冲液内。O
12、/P液液是是从从动物物食食道道/咽咽喉喉刮刮取取的的黏黏膜膜样品品，用用特特制制的的食食道道探探环刮取黏膜，放入刮取黏膜，放入样品保存液中。品保存液中。第十七页，讲稿共二十八页哦水泡液及水泡皮的采集水泡液及水泡皮的采集用用75%酒精消毒水泡表皮，用酒精消毒水泡表皮，用灭菌生理菌生理盐水水擦去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于擦去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于含抗生素的含抗生素的PBS缓冲液中；然后用剪刀将水冲液中；然后用剪刀将水泡皮剪下，放入含抗生素的泡皮剪下，放入含抗生素的PBS缓冲液中。冲液中。第十八页，讲稿共二十八页哦3、采、采样的准确性和的准确性和时效性效性代表性：代表性：应该考考
13、虑到整个到整个监测区域的地理分布，区域的地理分布，选取有取有代表性的点。如代表性的点。如动物品种分布、日物品种分布、日龄、饲养密度、地养密度、地势特点、交通特点、特点、交通特点、动物迁徙物迁徙习性等因素。如禽流感采性等因素。如禽流感采样时，疫区交接，疫区交接处，野，野鸟迁徙途径，水禽家禽混合迁徙途径，水禽家禽混合饲养养处等。等。时效性：如抗体效性：如抗体监测，免疫后，免疫后14天左右才可以采集；天左右才可以采集；监测病原病原时，注意，注意排毒排毒时间和病原的和病原的易嗜易嗜细胞胞和和组织，在，在监测时要根据不同要根据不同时期，采集不同部位的期，采集不同部位的组织进行行检测。如口。如口蹄疫病毒首
14、先是在咽喉部和肺上皮蹄疫病毒首先是在咽喉部和肺上皮细胞胞扩增，然后增，然后进入血液，入血液，通通过分泌物、水泡排毒。分泌物、水泡排毒。第十九页，讲稿共二十八页哦样本本样品的数量品的数量样本：本：总体中的一部分代表；体中的一部分代表；样品：品：检测的原始材的原始材料。料。概率抽概率抽样（随机抽（随机抽样）：）：是按照随机原是按照随机原则进行抽行抽样，不加主，不加主观因因素，素，组成成总体的每个体的每个单位都有被抽中的概率（非零概率）位都有被抽中的概率（非零概率）比例抽比例抽样：按养殖：按养殖规模成比例抽模成比例抽样。多多阶段抽段抽样：全市分区，每个区随机：全市分区，每个区随机选县，每个，每个县选
15、乡镇，每个，每个乡镇选养殖养殖场。样本量，符合本量，符合统计学要求，决定因素：疫病在群体学要求，决定因素：疫病在群体中的中的发生率，可信水平，生率，可信水平，检测方法方法 的敏感性和特异的敏感性和特异性。性。样品的量要足品的量要足够检测使用。使用。第二十页，讲稿共二十八页哦4.1样品的包装和品的包装和编号号单个个样品的包装品的包装动物血清、全血、棉拭子、水泡液，加有物血清、全血、棉拭子、水泡液，加有PBS的的粪便等液体便等液体样品用用品用用1.5ml，2ml，5ml带盖的塑料离心管；盖的塑料离心管；组织病料等固体病料等固体样品用自封口品用自封口样品袋，或放入品袋，或放入1.5ml及及2ml塑料
16、塑料离心管；离心管；每次送每次送样的同一种的同一种样品品进行行编号，每个号，每个样品都要有唯一品都要有唯一编号，号，标识清楚，不易清楚，不易丢失。失。每每组样品的包装品的包装以以镇或每个采或每个采样点点为单位分位分组，每，每组一个大包装，用自封口一个大包装，用自封口样品袋品袋包装，并包装，并贴有有标签，注明，注明样品名、品名、样品品编号、采号、采样日期等。日期等。第二十一页，讲稿共二十八页哦4.2样品的品的记录单个个样品的小塑料离心管外用油性品的小塑料离心管外用油性记号笔号笔标记每每组样品自封袋外用品自封袋外用钢笔填写笔填写样品品标签和封条和封条编号与采号与采样单一致，具有唯一性和可追溯性。一
17、致，具有唯一性和可追溯性。填写采填写采样单：被采：被采样畜主的畜主的联系方式和采系方式和采样人的人的联系方式；被采系方式；被采样动物的健康状况和免疫状况；被采物的健康状况和免疫状况；被采样动物的物的联系方式（畜种，日系方式（畜种，日龄，标识号等）；号等）；样品运品运输方式；日期，方式；日期，签名（采名（采样人，畜主）人，畜主）每每类样品要求填写一份采品要求填写一份采样单。第二十二页，讲稿共二十八页哦5、样品追溯品追溯样品品编号和填写采号和填写采样单目的就是目的就是对检测结果的追溯。果的追溯。动物防疫法物防疫法规定定动物免疫抗体物免疫抗体监测、动物疫病病物疫病病原原监测、动物疫病物疫病应急流行病
18、学急流行病学调查等均等均实行可追行可追溯制度。溯制度。追溯内容：家禽来源、追溯内容：家禽来源、饲养周期、防疫情况、免疫养周期、防疫情况、免疫程序、疫苗及程序、疫苗及兽药的使用情况。的使用情况。抗体抗体监测要求追溯到每要求追溯到每栋，每舍。，每舍。病原学病原学监测必必须追溯到每只，每追溯到每只，每头。第二十三页，讲稿共二十八页哦6.1样品的保存品的保存血清：血清：4-8冷藏，不超冷藏，不超过2周；抗凝血：周；抗凝血：4-8冷藏，不超冷藏，不超过1周；周；病毒病毒检验材料：短材料：短时间可冷藏，否可冷藏，否则须-20 或或-70 以下保存，无条件的可置以下保存，无条件的可置灭菌菌50%甘甘油油-P
19、BS液中冷藏，不宜反复液中冷藏，不宜反复冻融。融。细菌菌检验病料：冷藏，不宜冷病料：冷藏，不宜冷冻，可置，可置灭菌菌的的30%甘油甘油-PBS液液/盐水中冷藏。水中冷藏。所有所有冻存存样品忌反复品忌反复冻融融第二十四页，讲稿共二十八页哦6.2样品的运品的运输关关键是：容器（密是：容器（密闭）温度（低温）温度（低温）时间（越快越好）（越快越好）容器：密封容器，防止渗漏，造成容器：密封容器，防止渗漏，造成环境境污染或疫情染或疫情扩散。散。温度：温度：样品品应在低温下保存和运在低温下保存和运输（放置冰（放置冰块）。）。拭子拭子样品和品和组织样品品应作作暂时的冷藏或冷的冷藏或冷冻处理，然理，然后运送。
20、血清后运送。血清样品，若品，若 24h内运达内运达实验室，冷藏运室，冷藏运输；若超；若超过 24h，要先冷，要先冷冻后，再冷藏运后，再冷藏运输，途中，途中不能超不能超过 48h。时间：若能在：若能在4h内送到内送到实验室，可用冰袋冷藏运室，可用冰袋冷藏运输。如果超。如果超过4h，应置于置于-30 作冷作冷冻处理，再在保温箱内加冰袋运理，再在保温箱内加冰袋运输，在，在24h内送到。若内送到。若 24h不能送到不能送到实验室，室，则运运输过程中程中环境温度境温度应保持在保持在-20 以下（干冰）。以下（干冰）。第二十五页，讲稿共二十八页哦样品运品运输保存液保存液2550甘油生理甘油生理盐水水含双抗
21、及含双抗及20%甘油的甘油的PBS缓冲液（病毒冲液（病毒检测采采样液）液）氯化化钠：8g；磷酸二；磷酸二氢钾0.2g；磷酸；磷酸氢二二钠2.9g；氯化化钾0.2g，将将上上述述试剂按按次次序序加加入入定定量量容容器器中中，用用适适量量蒸蒸馏水水溶溶解解后后加加入入200ml甘甘油油，定定容容至至1000ml,PH调至至7.4，112Kpa20min,冷冷却却后后4保保存存，使使用用前前加加入入双双抗抗（青霉素（青霉素2000IU/ml,链霉素霉素2mg/ml。第二十六页，讲稿共二十八页哦五、采五、采样时注意事注意事项注意人畜共患病：做好自身防注意人畜共患病：做好自身防护，不直接接触，不直接接触动物物样品。品。注意人注意人为的的传播疫病：采播疫病：采样工具和防工具和防护用品，随用品，随身身带走，走，统一消毒。一消毒。采采样动物的健康状况（物的健康状况（饮食，免疫，用食，免疫，用药等）等）采集的病料采集的病料应该包装好，防止包装好，防止污染染环境，防止无境，防止无意的意的传播疾病，做好播疾病，做好环境消毒和病害肉的境消毒和病害肉的处理。理。对于突于突发事件中急性死亡的事件中急性死亡的动物，如物，如怀疑是炭疽，疑是炭疽，不能随意解剖，可以采血，或局部解剖做病理切不能随意解剖，可以采血，或局部解剖做病理切片。片。第二十七页，讲稿共二十八页哦谢谢大家！谢谢大家！第二十八页，讲稿共二十八页哦