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1、发酵工程第二章工业用微生物菌种现在学习的是第1页，共48页现在学习的是第2页，共48页本章内容本章内容 一、常用的工业微生物一、常用的工业微生物二、发酵工业菌种筛选的原则与基本技术二、发酵工业菌种筛选的原则与基本技术三、发酵工业菌种改良三、发酵工业菌种改良现在学习的是第3页，共48页对产物进行菌种筛选时，有两条经验对产物进行菌种筛选时，有两条经验：n进化上向上兼容；进化上向上兼容；n次生代谢在进化上后移，芽孢菌以上才次生代谢在进化上后移，芽孢菌以上才有筛选意义。有筛选意义。现在学习的是第4页，共48页最常用的工业微生物最常用的工业微生物n细菌细菌n醋杆菌属的醋化醋杆菌、弱氧化醋杆菌醋杆菌属的醋
2、化醋杆菌、弱氧化醋杆菌n乳酸杆菌乳酸杆菌n枯草杆菌枯草杆菌n丙酮丁醇梭菌丙酮丁醇梭菌n大肠杆菌大肠杆菌n谷氨酸棒状杆菌谷氨酸棒状杆菌现在学习的是第5页，共48页最常用的工业微生物最常用的工业微生物n酵母菌酵母菌n酿酒酵母酿酒酵母n假丝酵母属假丝酵母属n产朊假丝酵母产朊假丝酵母n解脂假丝酵母解脂假丝酵母n热带假丝酵母热带假丝酵母n毕赤酵母属、汉逊酵母属毕赤酵母属、汉逊酵母属现在学习的是第6页，共48页最常用的工业微生物最常用的工业微生物n霉菌霉菌n曲霉属曲霉属n米曲霉米曲霉n黑曲霉黑曲霉n青霉属青霉属n青霉菌：点青霉、产黄青霉青霉菌：点青霉、产黄青霉n桔青霉桔青霉n根霉属根霉属n德氏根霉德氏根霉
3、n米根霉、小麦曲根霉米根霉、小麦曲根霉n红曲霉属红曲霉属n紫红曲霉紫红曲霉现在学习的是第7页，共48页最常用的工业微生物最常用的工业微生物n放线菌放线菌n链霉菌属链霉菌属n小单孢菌属小单孢菌属n地中海诺卡氏菌地中海诺卡氏菌n米苏里游动放线菌米苏里游动放线菌 现在学习的是第8页，共48页 未培养微生物未培养微生物n定义：指迄今所采用的微生物纯培养分离及培养方定义：指迄今所采用的微生物纯培养分离及培养方法还未获得纯培养的微生物，其在自然环境微生物法还未获得纯培养的微生物，其在自然环境微生物群落中占有非常高的比例，约为群落中占有非常高的比例，约为99。n研究方法研究方法 模拟自然培养法模拟自然培养法
4、:原位培养、培养条件优化、原位培养、培养条件优化、单细胞操作单细胞操作 宏基因组分析法宏基因组分析法 现在学习的是第9页，共48页二、发酵工业菌种分离筛选原则与基本技术二、发酵工业菌种分离筛选原则与基本技术（一）发酵工业菌种筛选的总趋势与要求（一）发酵工业菌种筛选的总趋势与要求（二）分离筛选原理与技术（二）分离筛选原理与技术（三）应用举例（三）应用举例 现在学习的是第10页，共48页 1.菌种选择的总趋势菌种选择的总趋势n野生菌野生菌变异菌变异菌n自然选育自然选育代谢控制育种代谢控制育种n诱发基因突变诱发基因突变基因重组的定向育种基因重组的定向育种 现在学习的是第11页，共48页 2.菌种选择
5、的要求菌种选择的要求 n能能在在廉廉价价原原料料制制成成的的培培养养基基上上迅迅速速生生长长，且且生生成成的的目的产物产量高、易于回收；目的产物产量高、易于回收；n生长速度和反应速度较快，发酵周期较短；生长速度和反应速度较快，发酵周期较短；n培养条件易于控制；培养条件易于控制；n抗噬菌体及杂菌污染的能力强；抗噬菌体及杂菌污染的能力强；现在学习的是第12页，共48页2.菌种选择的要求（续）菌种选择的要求（续）n菌种不易变异退化；菌种不易变异退化；n对放大设备的适应性强；对放大设备的适应性强；n菌菌种种不不是是病病原原菌菌，不不产产生生任任何何有有害害的的生生物活性物质和毒素。物活性物质和毒素。现
6、在学习的是第13页，共48页（二）分离筛选原理与技术（二）分离筛选原理与技术1.筛选的指导思想筛选的指导思想2.分离筛选工作在实际中应用的几个方面分离筛选工作在实际中应用的几个方面3.新种分离筛选原理与技术新种分离筛选原理与技术 现在学习的是第14页，共48页1.筛选的两种指导思想筛选的两种指导思想 n先分离纯化，再结合工艺要求进行筛选。先分离纯化，再结合工艺要求进行筛选。n分离纯化同时富于筛选条件，一步得出所需菌株。分离纯化同时富于筛选条件，一步得出所需菌株。结果有两种可能：结果有两种可能：n获得适于工业发酵菌株获得适于工业发酵菌株n只获得选育所需的出发菌株只获得选育所需的出发菌株 现在学习
7、的是第15页，共48页2.分离筛选工作在实际中应用的几个方面分离筛选工作在实际中应用的几个方面n从被污染的生产及科研用菌中分离目的菌；从被污染的生产及科研用菌中分离目的菌；n生产中长期使用的菌种的定期分离筛选生产中长期使用的菌种的定期分离筛选；n从各种育种方法处理的微生物材料中分离筛选适于工业目的的优良菌从各种育种方法处理的微生物材料中分离筛选适于工业目的的优良菌株株；n从已知菌种和大自然中分离新菌株从已知菌种和大自然中分离新菌株n寻找新的发酵产品的产生菌；寻找新的发酵产品的产生菌；n寻找老产品的新的优良菌株。寻找老产品的新的优良菌株。n从保藏机构获取菌种进行分离筛选有两个好处：从保藏机构获取
8、菌种进行分离筛选有两个好处：经济性经济性指导性指导性 现在学习的是第16页，共48页设计筛选方案时必须考虑两个要点设计筛选方案时必须考虑两个要点 选择性选择性灵敏度灵敏度 现在学习的是第17页，共48页3.新种分离与筛选的步骤新种分离与筛选的步骤 调查研究（包括资料查阅）调查研究（包括资料查阅）试验方案设计试验方案设计 含微生物样品的采集含微生物样品的采集 （如何使样品中含所需微（如何使样品中含所需微 生物的可能性大？）生物的可能性大？）样品预处理样品预处理 （如何在后续的操作中使这种可（如何在后续的操作中使这种可 能性实现）能性实现）菌种分离菌种分离 现在学习的是第18页，共48页 根据目的
9、菌株及其产物特点分根据目的菌株及其产物特点分 选择性分离方法选择性分离方法 随机分离方法随机分离方法 (定向筛选定向筛选选择压力选择压力)(用筛选方案用筛选方案-检测系统进行间接分离）检测系统进行间接分离）富集液体培养富集液体培养 固体培养基条件培养固体培养基条件培养 (初筛初筛)菌种纯化菌种纯化 复筛复筛 现在学习的是第19页，共48页 菌种纯化菌种纯化 初步工艺条件摸索初步工艺条件摸索 再复筛再复筛 生产性能测试生产性能测试较优菌株较优菌株1-3株株保藏及进一步做生产试验保藏及进一步做生产试验 某些必要试验和某些必要试验和 或作为育种的出发菌株或作为育种的出发菌株 毒性试验等毒性试验等 现
10、在学习的是第20页，共48页含微生物样品的采集含微生物样品的采集n采样时应注意的问题采样时应注意的问题:n土壤微生物的分布土壤微生物的分布n采土深度采土深度n土壤植被情况土壤植被情况n采样季节采样季节n土壤的酸碱度土壤的酸碱度n对于分离筛选新菌种，还存在另两个选择标准：对于分离筛选新菌种，还存在另两个选择标准：n土壤来源广泛土壤来源广泛n在已适应相当苛刻环境压力的微生物类群中寻找新菌种在已适应相当苛刻环境压力的微生物类群中寻找新菌种 现在学习的是第21页，共48页样品的预处理样品的预处理n目的：提高分离效率目的：提高分离效率n方法：方法：n物理方法：热处理；膜过滤法；离心法物理方法：热处理；膜
11、过滤法；离心法n化学方法化学方法n诱饵法诱饵法 现在学习的是第22页，共48页分离方法的选择分离方法的选择 n根据目的菌有无选择性特征来选择分离方法根据目的菌有无选择性特征来选择分离方法n菌种的营养特征独特菌种的营养特征独特 n生长特征独特生长特征独特 n无无选择性特征选择性特征根据产物的特征进行根据产物的特征进行随机分离随机分离选择性分离的关键：生长培养条件的选择与控制，选择性分离的关键：生长培养条件的选择与控制，从而实现定向富集筛选。从而实现定向富集筛选。选择性分离选择性分离 现在学习的是第23页，共48页 选择性分离原理和技术选择性分离原理和技术n生长条件的选择与控制原理生长条件的选择与
12、控制原理n控制营养成分控制营养成分 n控制培养基酸碱度控制培养基酸碱度 n添加抑制剂添加抑制剂 n控制培养温度控制培养温度 n控制通气条件控制通气条件 n选择性分离技术选择性分离技术n富集液体培养技术富集液体培养技术n固体培养技术固体培养技术施加选择压力，进行定向筛选施加选择压力，进行定向筛选 现在学习的是第24页，共48页A.富集液体培养富集液体培养n增加混合菌群中所需菌株数量的一种技术增加混合菌群中所需菌株数量的一种技术n技术特点：给混合菌群提供一些有利于目的菌株生长或不利于目技术特点：给混合菌群提供一些有利于目的菌株生长或不利于目的菌以外的其他菌型生长的条件的菌以外的其他菌型生长的条件n
13、培养方式培养方式分批培养方式：以最大比生长速率分批培养方式：以最大比生长速率（max）筛选，存在选择）筛选，存在选择压力的控制、移种时间和次数等问题压力的控制、移种时间和次数等问题连续培养方式：以比生长速率（连续培养方式：以比生长速率（）筛选）筛选 现在学习的是第25页，共48页 ABS0基质浓度对基质浓度对A、B两种菌的比生长速率（两种菌的比生长速率（）的影响）的影响当当SS0时，富集什么菌株？时，富集什么菌株？现在学习的是第26页，共48页连续富集培养技术分离菌株的优点连续富集培养技术分离菌株的优点 n分离的菌株特别适合连续发酵生产过程分离的菌株特别适合连续发酵生产过程n有利于分离具有某种
14、工业生产特性的菌株有利于分离具有某种工业生产特性的菌株n可以筛选出能共生的稳定混合培养物可以筛选出能共生的稳定混合培养物 现在学习的是第27页，共48页B.固体培养技术固体培养技术n常用于分离某些酶产生菌常用于分离某些酶产生菌 n选择压力：在选择培养基中加入所需酶选择压力：在选择培养基中加入所需酶的基质的基质 现在学习的是第28页，共48页随机分离原理与技术随机分离原理与技术n从产物入手，通过设计从产物入手，通过设计高产培养基高产培养基和建立快速灵敏和建立快速灵敏专一的筛选方法，从随机分离的菌落中筛选出所需专一的筛选方法，从随机分离的菌落中筛选出所需的目的菌。的目的菌。n技术技术关键：产物合成
15、条件的选择与控制及相应筛关键：产物合成条件的选择与控制及相应筛选方法的确定。选方法的确定。n随机分离技术举例随机分离技术举例 n抗生素产生菌的筛选抗生素产生菌的筛选n药理活性化合物产生菌的筛选药理活性化合物产生菌的筛选n生长因子产生菌的筛选生长因子产生菌的筛选n多糖产生菌的筛选多糖产生菌的筛选 现在学习的是第29页，共48页高产培养基设计的几个原则高产培养基设计的几个原则 n制制备备一一系系列列的的培培养养基基，其其中中有有各各种种类类型型的的养养分分成成为为生生长长限限制制因素；因素；n使用一聚合或复合形式的生长限制养分；使用一聚合或复合形式的生长限制养分；n避避免免使使用用容容易易同同化化
16、的的碳碳源源或或氮氮源源，防防止止分分解解代代谢谢物物阻阻遏；遏；n确定含有所需的辅因子（确定含有所需的辅因子（Co2+,Mg2+,Mn2+,Fe2+）；）；n使使用用pH缓冲剂以减少缓冲剂以减少pH变化；变化；n前体、促进剂及抑制剂的采用。前体、促进剂及抑制剂的采用。现在学习的是第30页，共48页抗生素产生菌的筛选抗生素产生菌的筛选n筛选模型：试验菌筛选模型：试验菌n筛选方法：筛选方法：铺菌法铺菌法复印平板法复印平板法n液体培养筛选液体培养筛选 n抗药性抗药性筛选筛选筛选模型：筛选模型：氨苄青霉素氨苄青霉素和和-内酰胺酶内酰胺酶产生菌（克雷白氏菌）协同产生菌（克雷白氏菌）协同 I I II
17、II无试样时（不含棒酸时），无试样时（不含棒酸时），I I对对IIII菌作用不大菌作用不大有试样时（含棒酸时），有试样时（含棒酸时），I I对对IIII菌恢复药效，棒酸抑制水解酶活性菌恢复药效，棒酸抑制水解酶活性n固体培养筛选固体培养筛选 现在学习的是第31页，共48页试验菌试验菌 代表微生物类型代表微生物类型金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌209p革兰氏阳性球菌革兰氏阳性球菌枯草杆菌枯草杆菌6633革兰氏阳性杆菌革兰氏阳性杆菌大肠杆菌大肠杆菌革兰氏阴性肠道细菌革兰氏阴性肠道细菌耻垢分枝杆菌耻垢分枝杆菌607 结核杆菌结核杆菌白色念珠菌白色念珠菌 酵母状真菌酵母状真菌 青霉菌青霉菌 丝状真菌丝状真
18、菌 现在学习的是第32页，共48页药理活性化合物产生菌的筛选药理活性化合物产生菌的筛选 n 药药理理活活性性化化合合物物是是指指能能抑抑制制人人类类代代谢谢中中某某一一个个关关键键酶酶的微生物产物即酶抑制剂，从而达到治疗的目的。的微生物产物即酶抑制剂，从而达到治疗的目的。n 筛选模型：目标酶筛选模型：目标酶 现在学习的是第33页，共48页生长因子产生菌的筛选生长因子产生菌的筛选n 筛选模型：营养缺陷型试验菌筛选模型：营养缺陷型试验菌 n筛筛选选方方法法：利利用用被被分分离离的的微微生生物物产产物物能能否否促促进进营营养养缺缺陷型试验菌生长陷型试验菌生长 现在学习的是第34页，共48页氨基酸产生
19、菌的筛选氨基酸产生菌的筛选 样品样品 预处理预处理 初筛（除真菌）初筛（除真菌）在分离平板上生长获得多个单菌落在分离平板上生长获得多个单菌落 复印平板（复印平板（copy法）法）平板培养，其中有产生氨基酸平板培养，其中有产生氨基酸的菌落分泌氨基酸的菌落分泌氨基酸 对应到对应到copy前相应前相应u.v线杀死长好的菌落线杀死长好的菌落位置，找到目的菌落位置，找到目的菌落再铺上一层含营养缺陷型试验菌的琼脂再铺上一层含营养缺陷型试验菌的琼脂 培养后培养后 产氨基酸菌落周围有生长圈产氨基酸菌落周围有生长圈 目的菌落进行液体培养，目的菌落进行液体培养，对产物进行定量测定对产物进行定量测定筛选产物含量高的
20、菌株筛选产物含量高的菌株现在学习的是第35页，共48页多糖产生菌的筛选多糖产生菌的筛选n取样特点：碳水化合物工业的废弃物取样特点：碳水化合物工业的废弃物n筛选方案：从菌落外观判断，选择外观呈粘液状筛选方案：从菌落外观判断，选择外观呈粘液状的菌落，然后根据液体培养测定多糖含量来筛选的菌落，然后根据液体培养测定多糖含量来筛选高产菌。高产菌。现在学习的是第36页，共48页细菌分离：以乳酸菌为例细菌分离：以乳酸菌为例 取未成熟的酱醪样品取未成熟的酱醪样品1g至无菌磨口瓶中至无菌磨口瓶中加麦芽汁至瓶口处，封塞，加麦芽汁至瓶口处，封塞，25培养培养24-48h培养基中长出绢丝状波动物，镜检培养基中长出绢丝
21、状波动物，镜检 杆状，阳性染色杆状，阳性染色 初步断定乳酸菌初步断定乳酸菌 用选择性培养基分批富集培养用选择性培养基分批富集培养2-3代代稀释分离法分离单菌落，培养基为含麦芽汁、稀释分离法分离单菌落，培养基为含麦芽汁、CaCO3的琼脂培养基的琼脂培养基 根据透明圈挑选菌落根据透明圈挑选菌落 性能测定（镜检杆状，染色阳性；乳酸纸层析鉴定）性能测定（镜检杆状，染色阳性；乳酸纸层析鉴定）Rf值定性值定性 （有机酸呈黄斑点）（有机酸呈黄斑点）乳酸生成量测定（滴定法）乳酸生成量测定（滴定法）现在学习的是第37页，共48页放线菌的分离：放线菌的分离：以产链霉素菌种的分离为例以产链霉素菌种的分离为例（从退化
22、菌种中筛选）（从退化菌种中筛选）取工业发酵液（含孢子）样品取工业发酵液（含孢子）样品1 1环环放入带玻璃珠的装有放入带玻璃珠的装有10ml无菌水的小三角瓶中，摇匀无菌水的小三角瓶中，摇匀采用稀释法制平板，获取单菌落采用稀释法制平板，获取单菌落 斜面保藏斜面保藏 高产菌恢复高产菌恢复根据高产菌的特点，选择目的菌落根据高产菌的特点，选择目的菌落 放大培养，发酵液性能测试放大培养，发酵液性能测试 筛选模型：形态依据筛选模型：形态依据现在学习的是第38页，共48页真菌的分离筛选：以啤酒酵母的分离为例真菌的分离筛选：以啤酒酵母的分离为例 取发酵液少许以取发酵液少许以10倍稀释成倍稀释成10-1-10-7
23、 稀释分离法稀释分离法取取0.1ml加入固体培养基铺平皿（加入固体培养基铺平皿（2）在麦芽汁固体培养基上，在麦芽汁固体培养基上，25培养培养48-72h 形态筛选形态筛选 根据正常株特点进行挑选，接种斜面备用根据正常株特点进行挑选，接种斜面备用 纯化，采用平板分离法进一步纯化，至少反复三次纯化，采用平板分离法进一步纯化，至少反复三次 生生成成子子囊囊孢孢子子速速度度测测定定 发酵力测定发酵力测定 性能测定性能测定 热死温度测定热死温度测定 凝集力测定凝集力测定 双乙酰含量测定双乙酰含量测定 现在学习的是第39页，共48页菌种选育改良的具体目标菌种选育改良的具体目标n提高目标产物的产量提高目标产
24、物的产量 n提高目标产物的纯度，减少副产物提高目标产物的纯度，减少副产物 n改良菌种性状，改善发酵过程改良菌种性状，改善发酵过程 n改变生物合成途径，以获得高产的新产品改变生物合成途径，以获得高产的新产品 现在学习的是第40页，共48页 发酵工业菌种改良方法发酵工业菌种改良方法n常规育种常规育种(诱变育种诱变育种)n细胞工程育种细胞工程育种 n基于代谢调节的育种技术基于代谢调节的育种技术 n基因工程育种基因工程育种 n蛋白质工程育种蛋白质工程育种 n代谢工程育种代谢工程育种 现在学习的是第41页，共48页赖氨酸生产菌种的选育改良思路赖氨酸生产菌种的选育改良思路n出发菌株出发菌株：黄色短杆菌、谷
25、氨酸棒杆菌、乳糖发酵短杆菌：黄色短杆菌、谷氨酸棒杆菌、乳糖发酵短杆菌n育种思路育种思路1.优先合成的转换优先合成的转换渗漏缺陷型的选育渗漏缺陷型的选育2.切断支路代谢切断支路代谢营养缺陷型的选育：高丝氨酸缺陷型营养缺陷型的选育：高丝氨酸缺陷型3.抗结构类似物突变株的选育：抗结构类似物突变株的选育：AEC4.解除代谢互锁：解除代谢互锁：Leu-、抗抗Leu结构类似物、结构类似物、喹啉喹啉s、苯醌苯醌s5.增加前体物的合成和阻塞副产物的生成：增加前体物的合成和阻塞副产物的生成：Ala-、抗、抗Asp结构类似物结构类似物选育适宜的选育适宜的CO2固定酶固定酶/TCA循环酶活性比突变株循环酶活性比突变
26、株6.改善细胞膜的透过机能改善细胞膜的透过机能7.选育温度敏感突变株选育温度敏感突变株8.应用细胞工程和基因工程育种应用细胞工程和基因工程育种 现在学习的是第42页，共48页现在学习的是第43页，共48页选育适宜的选育适宜的CO2固定酶固定酶/TCA循环酶活性比突变株循环酶活性比突变株赖氨酸合成中间代谢有以下两条途径：赖氨酸合成中间代谢有以下两条途径：通过通过TCA循环循环 葡萄糖葡萄糖 丙酮酸丙酮酸 草酰乙酸草酰乙酸 天冬氨酸天冬氨酸 赖氨酸赖氨酸 通过磷酸烯醇丙酮酸羧化反应通过磷酸烯醇丙酮酸羧化反应 葡萄糖葡萄糖 磷酸烯醇磷酸烯醇 草酰乙酸草酰乙酸 天冬氨酸天冬氨酸 式丙酮酸式丙酮酸 丙酮
27、酸丙酮酸 赖氨酸赖氨酸 现在学习的是第44页，共48页 代谢工程的定义代谢工程的定义n利用多基因重组技术有目的地对细胞代谢途径进行利用多基因重组技术有目的地对细胞代谢途径进行修饰、改造，改变细胞特性，并与细胞基因调控、修饰、改造，改变细胞特性，并与细胞基因调控、代谢调控及生化工程相结合，为实现构建新的代谢代谢调控及生化工程相结合，为实现构建新的代谢途径，生产特定目的产物而发展起来的一个新的学途径，生产特定目的产物而发展起来的一个新的学科领域。科领域。n又称作途径工程，是多基因的基因工程。又称作途径工程，是多基因的基因工程。现在学习的是第45页，共48页 代谢工程代谢工程发展基础发展基础 代代谢
28、谢网网络络理理论论：是是把把细细胞胞的的生生化化反反应应以以网网络络整整体体，而而不不是是孤立地来考虑。孤立地来考虑。代代谢谢网网络络分分流流处处的的代代谢谢产产物物称称为为节节点点，其其中中对对终终产产物物合合成起决定作用的少数节点称为主节点。成起决定作用的少数节点称为主节点。根据节点下游分支的可变程度，节点分为：根据节点下游分支的可变程度，节点分为：柔柔性性节节点点：解解除除一一个个分分支支的的反反馈馈抑抑制制可可提提高高该该分分支支下下游游产产物物的产量。的产量。半半柔柔性性节节点点：须须降降低低主主分分支支的的酶酶活活并并同同时时提提高高次次分分支支的的酶酶活活或或解除其反馈抑制，才可
29、提高次分支下游产物的产量。解除其反馈抑制，才可提高次分支下游产物的产量。刚性节点刚性节点：其下游各分支的比例不易改变。：其下游各分支的比例不易改变。现在学习的是第46页，共48页 代谢工程代谢工程发展基础发展基础相相依依网网络络：代代谢谢网网络络中中各各主主节节点点集集中中于于产产物物，为为了了避避免免中中间间物物的的过过量量积积累累，各各分分支支的的代代谢谢流流都都必必须须保保持持平平衡衡，各各分分支支的的分分流流相相等，各节点的重要性相同。等，各节点的重要性相同。独独立立网网络络：代代谢谢网网络络的的主主节节点点不不集集中中，可可以以通通过过对对代代谢谢的的修修饰饰来来影影响响产产物物的的
30、产产量量,其其对对代代谢谢修修饰饰的的应应答答能能力力，取取决决于于各节点的刚柔性及其位置。各节点的刚柔性及其位置。S I P S P B B1 B2相依网路相依网路独立网路独立网路 现在学习的是第47页，共48页（三）代谢工程育种思路（三）代谢工程育种思路1.1.改变代谢流改变代谢流：改变分支代谢途径的流向，阻断有害改变分支代谢途径的流向，阻断有害代谢产物的合成。代谢产物的合成。（1）加速限速反应）加速限速反应（2）改变分支代谢途径流向：）改变分支代谢途径流向：提高代谢分支点的提高代谢分支点的某一分支代谢途径酶系的活力，在与另外的分支某一分支代谢途径酶系的活力，在与另外的分支代谢途径的竞争中占有优势，可以提高目的代谢代谢途径的竞争中占有优势，可以提高目的代谢末端产物的产量。末端产物的产量。（3）构建代谢旁路）构建代谢旁路（4）改变能量代谢途径）改变能量代谢途径 现在学习的是第48页，共48页