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1、植物进化第1页，共42页，编辑于2022年，星期一植物和昆虫在氰防御生物合成中的趋同进化 第2页，共42页，编辑于2022年，星期一 汇报内容n一 研究背景 意义 -THE MEANING OF THE STUDYn二 研究思路-HOW TO STUDY？n三技术与方法-WHAT HAVE BEEN DONEn四 结果与讨论RESULTS&DISCUSSIONn五 总结与分享SOMETHING WANT TO SHARE第3页，共42页，编辑于2022年，星期一一 研究背景 意义n趋同进化：不同的生物，甚至在进化上相距甚远的生物，如果生活在条件相同的环境中，在同样选择压的作用下，有可能产生功能
2、相同或十分相似的形态结构，以适应相同的条件。此种现象称为趋同进化第4页，共42页，编辑于2022年，星期一一 研究背景 意义n For more than 420 million years,plants,insects and their predators have co-evolved based on a chemical arms race including deployment of refined chemical defence systems by each player.Cyanogenic glucosides are produced by numerous plan
3、ts and by some specialized insects and serve an important role as defence compounds in these intimate interactions.Burnet moth larvae are able to sequester cyanogenic glucosides from their food plant as well as to carry out de novo biosynthesis.第5页，共42页，编辑于2022年，星期一一 研究背景 意义n Here we show that three
4、 genes(CYP405A2,CYP332A3 and UGT33A1)encode the entire biosynthetic pathway of cyanogenic glucosides in the Burnet moth Zygaena filipendulae.In both plants and insects,convergent evolution has led to two multifunctional P450 enzymes each catalysing unusual reactions and a glucosyl-transferase acting
5、 in sequence to catalyse cyanogenic glucoside formation.Thus,plants and insects have independently found a way to package a cyanide time bomb to fend off herbivores and predators.第6页，共42页，编辑于2022年，星期一二 研究思路1、Cyanogenoc glucosides（生氰糖苷）在很多植物和一些特定的昆虫中都有着很重要的防御和合成作用2、Burnet moth（蛾）幼虫可以抵抗它们的所食植里面产生的生氰糖苷
6、（CG），而且这些昆虫可以自己重新合成生氰糖（CG）。3、通过研究六星灯蛾（Zygaena filipendulae）发现了以下三种基因：CYP405A2,CYP332A3 and UGT33A1编码出了CG的生物合成途径。不论是在植物中还是在昆虫中，所有的合成途径都是由两种多功能酶(P450)和UGTs共同完成的。第7页，共42页，编辑于2022年，星期一二 研究思路nThe two cyanogenic glucosides linamarin and lotaustralin present in Zygaena species as well as in their food plan
7、t Lotus corniculatusntwo cytochromes P450(P450)and a UDP-glycosyltransferase(UGT)15.Both P450s are multifunctional and catalyse unusual reactions.nThe first P450 catalyses two consecutive amino(N)-hydroxylations followed by a dehydration,decarboxylation and isomerization step to form a Z-oxime6.nThe
8、 second P450 catalyses dehydration and(C)-hydroxylation of the Z-oxime to produce a labile-hydroxynitrile(cyanohydrin)7,which as the final step of the pathway is converted into a cyanogenic glucoside by a UGT5.nPreviously,the biosynthesis of linamarin and lotaustralin in Zygaena has been found to sh
9、are the same intermediates as those established in plants.Accordingly,the enzyme systems biosynthesizing cyanogenic glucosides in insects may have similar characteristics as those from plants14,but the molecular characteristics of such enzyme systems have remained unknown.1 1、这两种、这两种CG:CG:在六星灯蛾和它们的所
10、食在六星灯蛾和它们的所食植物中均发现植物中均发现亚麻苦苷（亚麻苦苷（linamarinlinamarin）和）和 百脉百脉根苷（根苷（lotaustralin lotaustralin）。）。2 2、三个有关于物质合成的结构基因包括、三个有关于物质合成的结构基因包括两个两个细胞色素基因细胞色素基因p450sp450s和一个和一个(UGTs)(UGTs)。3 3、第一个、第一个p450p450催化了两种连续的反应，催化了两种连续的反应，并在并在肟肟 z-oxime z-oxime的条件下伴随着脱水脱的条件下伴随着脱水脱羧反应和异构化作用。羧反应和异构化作用。4 4、第二个、第二个p450p450
11、在在肟肟 z-oxime z-oxime的作用下生成了一的作用下生成了一种不稳定的种不稳定的氰醇氰醇。正是这一步反应最后决定了。正是这一步反应最后决定了UCTUCT能够作用生成生氰糖苷能够作用生成生氰糖苷(CG)(CG)。第8页，共42页，编辑于2022年，星期一二 研究思路nTo investigate whether the ability of Zygaena to de novo biosynthesize linamarin and lotaustralin represents a case of convergent or divergent evolution or is th
12、e result of horizontal gene transfer from its food plant,possible gene candidates encoding steps in the putative pathway in Zygaena have formerly been selected.n Transcriptome pyrosequencing afforded 120 P450s and 41 UGT conreads,but none of these could,from phylogenetic analyses,be assigned a funct
13、ion in the pathway14.nHence,enzymes responsible for biosynthesis of linamarin and lotaustralin would be expected to be among the highly expressed proteins in integument relative to other tissues.1 1、这些、这些CGCG主要储存在主要储存在幼虫的表皮幼虫的表皮腔里面腔里面，它们可以刺激植物分泌一，它们可以刺激植物分泌一些水滴状的粘液，从而阻止一些捕些水滴状的粘液，从而阻止一些捕食蛋白质为生的捕食者。食
14、蛋白质为生的捕食者。2 2、在六星灯蛾里发现的亚麻苦苷和百、在六星灯蛾里发现的亚麻苦苷和百脉根苷和在它们所食的植物中发现的以脉根苷和在它们所食的植物中发现的以上两种物质有相似的地方。上两种物质有相似的地方。3 3、综上所述，在昆虫和植物中的、综上所述，在昆虫和植物中的CGCG酶系统有可能是相同的酶系统有可能是相同的，但是其具，但是其具体分子的特性还有待考究。体分子的特性还有待考究。第9页，共42页，编辑于2022年，星期一二 研究思路nHere we successfully expressed and characterized a number of putative candidate
15、genes and established that three genes are necessary and sufficient to encode the enzymes catalysing the biosynthesis of linamarin and lotaustralin in Zygaena filipendulae.n The genes CYP405A2,CYP332A3 and UGT33A1 have clearly evolved convergently compared with the corresponding plant genes.nNeverth
16、eless,plants and insects have resolved the complex task of accomplishing the multistep pathway of cyanogenic glucoside synthesis in unprecedented similar ways involving the same intermediates and multifunctional P450s.1 1、可行的方法之一就是使用转录焦磷酸测、可行的方法之一就是使用转录焦磷酸测序。这种方法需提供序。这种方法需提供120P450120P450和和41UGT41UG
17、T，但是其中，但是其中没有一种可以通过系统发育而得来的。没有一种可以通过系统发育而得来的。2 2、可行的方法是通过、可行的方法是通过蛋白质组学，分子生物蛋白质组学，分子生物学和生物化学学和生物化学的协同作用来达到实验目的。的协同作用来达到实验目的。不同种类灯蛾（不同种类灯蛾（ZygaenaZygaena）组织细胞中的微粒体不组织细胞中的微粒体不同，催化新陈代谢的能力从幼虫时期就开始分化。同，催化新陈代谢的能力从幼虫时期就开始分化。3 3、以下的研究报告中我们通过对六星灯蛾的实验，、以下的研究报告中我们通过对六星灯蛾的实验，成功找到了指定的基因成功找到了指定的基因（CYP405A2CYP405A
18、2,CYP332A3 CYP332A3 and and UGT33A1UGT33A1 ）去表达和编码酶形成亚麻苦苷和去表达和编码酶形成亚麻苦苷和百脉根苷。这些基因在相应的植物中也有百脉根苷。这些基因在相应的植物中也有体现。体现。第10页，共42页，编辑于2022年，星期一三 技术与方法实验方法蛋白质组学方法分子生物学方法生物化学方法仪器Q-TOF电喷射质谱仪SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳高效液相层析 进化学第11页，共42页，编辑于2022年，星期一三技术与方法1.1.实验目的实验目的 证明六星灯蛾幼虫体被的微粒体中存在P450s 和 UGTs。2.2.实验原理实验原理（1）P450s的检测 利用
19、液相色谱和质谱仪确认P450s 的存在，利用基因重组技术培养出能够表达ZfCPR基因的酵母（ZfCPR基因表达产生P450酶）。P450s能够将2-甲基乙醛肟转化为2-甲基丁醛肟，因此，通过质谱图，将实验所得质谱图与对照的两种肟图谱进行比较即可验证是否存在p450s。（2）CGTs的检测 UGTs能将氰醇糖基化生成亚麻苦苷和百脉根苷，用 标记底物，用薄层层析检测分离，检测 ，则可证明UGTs能将氰醇糖基化生成亚麻苦苷和百脉根苷。第12页，共42页，编辑于2022年，星期一（一）蛋白质组学方法（一）蛋白质组学方法A.A.目标蛋白的分离提纯目标蛋白的分离提纯1.SDS-1.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电
20、泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(初略分离）初略分离）采用12%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离六星灯蛾幼虫的微粒体蛋白，并用考马斯蓝染色，在每一个分离道40-70Kda的区域分离出2处胶带，然后用参考文献中的方法进行还原和烷基化处理之后将分离出的胶带用胰蛋白酶消化处理，最后用三氟乙酸洗脱。第13页，共42页，编辑于2022年，星期一2.2.反向纳米高效液相层析（反向纳米高效液相层析（HPLC)HPLC)层析分离层析分离 （1）装置简介 HPLC系统有一个2cm高的前置柱（100 m I.D.)和7cm高的色谱柱（ReproSil-Pur 120 AQ-C18），3m装在75m带钾水玻璃塞的熔融石英玻璃色
21、谱柱中，与钠升电喷雾针相连。（2）层析液 溶液A是浓度为0.1%的甲酸溶液，溶液B是95%的氰化甲烷和0.1%甲酸和5%的水组成）（3）方法 0-35%的B溶液中90min，35%-100%的B溶液中低速250nl/min旋转分离5分钟。第14页，共42页，编辑于2022年，星期一3.Q-TOF3.Q-TOF电喷射质谱仪电喷射质谱仪（1）Q-TOF简介 Q-TOF有三种扫描方式：1.MS全扫描；2.MS/MS；3.Survey Scan（DDA）MS/MS扫瞄是针对质谱扫瞄（MS Scan）时所看到有兴趣的离子（称为母离子）将母离子在碰撞气和碰撞能量的作用下得到其碎片离子（子离子）图谱，其目的
22、是由碰撞由碰撞该离子所产生的特征碎片离子，进一步的确认分析样品该离子所产生的特征碎片离子，进一步的确认分析样品，因此，当质谱扫瞄发现母离子后才会进行子离子扫瞄。data-dependent acquisition（DDA自动化数据收集）：在MS模式中分析样品找到目标母离子，再切换至MS/MS模式中去重新分析样品以收集每一母离子的MS/MS数据。第15页，共42页，编辑于2022年，星期一（2）实验操作方法 质谱仪中用阳离子V模式下生成电喷射离子源进行洗脱并自动数据收集，进行MS扫描，高强度肽（母离子）在MS质谱扫描之后还会有4次MS/MS质谱扫描。母离子被碰撞之后生成大小不一的碎片，用m/z的
23、值来筛选碎片，筛选m/z值保持在60s的碎片。用MassLynxs v.4.1软件处理质谱仪收集到的数据，生成质谱图。（3）参数设置 MS模式扫描时间为0.48s，MS/MS质朴扫描的时间为0.98s,内部扫描时间为0.02s，毛细管处电压为2kv，色谱柱处电压为40v，源温度为80，MS光谱范围m/s值350-1500，MS/MS光谱范围m/s值50-1500。第16页，共42页，编辑于2022年，星期一(4)序列检测 用MASCOT v.2.2.06软件检测表达为P450蛋白的DNA序列和翻译序列的。参数设置：特异性胰蛋白酶：Arg 和 Lys，有两个胰蛋白酶切割位点，可变修饰：Met的氧
24、化和Asn、Gln氨基酸的脱酰基作用。固定修饰：生成脲甲基-Cys。MS/MS模式多肽耐受度分别设置为20ppm，0.1Da。第17页，共42页，编辑于2022年，星期一B B.目标蛋白的量化目标蛋白的量化1.目的 确定六星灯蛾4种不同组织的微粒体中P450s and UGTs的数量。2.仪器 HPLC和Q-TOF电喷射质谱仪串联使用，由EASY-nLC 软件控制层析分离。仪器设置有一个10cm高的色谱柱，3m置于100m带钾水玻璃塞的熔融石英玻璃色谱柱中，色谱柱连接有电喷雾针。3.多肽分离 这个多肽也是用浓度梯度分离法分离（溶液A、溶液B。0-30%的B溶液50min，30%-100%的B溶
25、液中低速300nl/min分离5分钟）。第18页，共42页，编辑于2022年，星期一4.质谱的获得 (1)仪器 带有钠升电喷雾离子源的LTQ-Orbitrap XL的在阳离子模式获得。（2）设置 电喷雾的电压保持在2.3kv，离子转移温度为200没有气流，DDA在MS模式和MS/MS模式自动切换之间获得数据。离子在注射入轨道离子阱之前，电量必须累积到1000000。在轨道离子阱中，母离子扫描的m/z值范围为300-1800。MS全扫描的强度改变来源于开始时30ms的信号记录。（3）目标 m/z=400时，寻找60000.MS高分辨率光谱。第19页，共42页，编辑于2022年，星期一（4）结果
26、5种数量最多的离子（电荷大于1，强度大于15000）被挑选出进行LTQ的MS/MS模式碰撞解离质谱分析。离析宽度为2.5m/z个单元。选择电荷为3000的离子，碰撞能量设置为35%，激活电量q=0.25，激活时间为30ms，m/z值为母离子值+10ppm，符合条件的用于MS/MS，动态排除45s外的离子。第20页，共42页，编辑于2022年，星期一二）、分子生物学二）、分子生物学 1.基因获取基因获取 利用 PfuX7聚合酶用灯蛾幼虫的cDNA扩增得到以下基因：CYP405A2,CYP332A3,CYP4L17,CYP9A37,CYP405A3,CYP4G47,CYP9A36,CYP6CT1,
27、CYP304F2,CYP6AE27,UGT38A1,UGT35E1,UGT33B1,UGT33A1 and ZfCPR。随后，运用USER技术把这些基因克隆到了USER盒子2.2.基因重组基因重组 （1）目的 培养一个能够表达ZfCPR的酵母株系和能够产生p450的质粒。我们将ZfCPR的表达组件整合到BY4741酵母株的基因组上。第21页，共42页，编辑于2022年，星期一（2）方法 pLIFE158中ZfCPR的表达盒子在AvrII 和 FseI 位点被限制，不能进入pUC19-MGA质粒，但是，通过使用NB248 和 NB249的PCR技术使ZfCPR的表达盒子不受限制。通过使用来源于
28、pLIFE0160的5bp 的SbfI 片段转变BY4741将ZfCPR的表达盒子插入了酵母的基因组。这个线型的片段包含了ZfCPR表达盒子，KANMX 选择基因的两侧是酵母重组序列，使得同源重组成为可能。良性的转化株被用于G418平板培养，并用表S3列举的NB252,NB253,NB257,NB258寡核苷酸为原料，用PCR技术，转录基因组中正确插入的线性片段。解除位点限制解除位点限制插入目的基因插入目的基因筛选优良筛选优良第22页，共42页，编辑于2022年，星期一（三）、生物化学方法（三）、生物化学方法1.1.操作步骤操作步骤（1）从200ml的细胞培养液中分离得到酵母微粒体膜。然后根据
29、参考文献38中的方法对其进行诱变。CO差光谱学可以检测表达的p450s的折叠，ZfCPR功能性表达可以通过参考文献39中的细胞色素C还原实验进行检测。（2）单独测定所有10个异源表达的p450s将2-甲基乙醛肟转化为2-甲基丁醛肟的能力。仪器操作 将纤维（毛细管柱，85m碳分子筛，聚二甲基硅氧烷萃取头PDMS StableFlex，57334-U，淡蓝色）置于含水的样品溶液顶部，100l的样品溶液放置在HPLC的1.5ml小瓶底部。第23页，共42页，编辑于2022年，星期一 在80时搅拌12min后，取出纤维，放入GC/MS系统。毛细管柱是SGE BPX（25QC2/BPX5 0.25)，大
30、气压为50kpa，烘箱温度程序设置如下：50恒温2min，5/min逐渐升到90，90恒温1min。注样温度250，注样时间为0.5min.每分钟通入15ml氦气。在GC运转期间，那个纤维被留在注样口，这样流动的样品挥发后会被纤维捕获。70ev的电子碰撞质谱仪会记录m/z范围在35-200的离子。(3)分别测试所有的10个p450s把肟转化成羟腈、丙酮氰酸、2-丁酮氰酸的能力。羟腈的结构是不稳定的，分解成氰化氢和丙酮或2-丁酮，这些挥发性的酮类被捕获后生成2,4-二硝基苯肼，可以参考文献17中描述的用LG-MS进行分析。第24页，共42页，编辑于2022年，星期一 这两种检测P450功能的实验
31、可用0.2mg微粒体蛋白在20mMPH=7.9的缓冲液中，1mMNADPH，10mM氨基酸，0.1mM肟作为基质。(4)测量这四种异源表达的UGTs将氰醇糖基化产生亚麻苦苷和百脉根苷的能力。实验用0.2mg微粒体蛋白，在PH=7.9的缓冲液中，10mM糖苷配基，0.02Ci 14C-UDP-glucose.使用乙烷基：醋酸盐：丙酮：2-氯甲烷：甲醇：水=40:30:12:10:8作为溶剂。(5)用薄层层析(silica gel type 60 F254）检测被标记的亚麻苦苷和百脉根苷的14C信号。第25页，共42页，编辑于2022年，星期一(四）系统发生四）系统发生 用CLUSTALW4的默认
32、设置和准确的操作测定P450序列，其结果在MEGA4(ref.40)中是均匀的，自动生成了一个进化树。第26页，共42页，编辑于2022年，星期一To be continue第27页，共42页，编辑于2022年，星期一实验进展汇报n1 学习HPLC原理 应用 n跟芦师姐实际走完一遍HPLC流程 样品的处理n2实验材料预处理n3学习简化基因组测序第28页，共42页，编辑于2022年，星期一五 结果与讨论Expression of candidate genes第29页，共42页，编辑于2022年，星期一results 120种 P450s 41种UGTs 11种 P450s 5种UGTs 10种
33、 P450s 4种UGTs第30页，共42页，编辑于2022年，星期一第31页，共42页，编辑于2022年，星期一Expression of candidate genes.To identify the genes involved in the cyanogenic glucoside pathway,the selected genes were heterologously expressed in yeast.To ensure sufficient supply of reducing equivalents from nicotinamide adenine dinucleoti
34、de phosphate(NADPH)to the heterologously expressed P450s,the Z.filipendulae NADPH cytochrome P450 oxidoreductase gene(ZfCPR)was cloned and engineered into the genome of the expression yeast strain.All ten selected P450 s afforded the characteristic Fe 2+.CO Soret peak at450 nm when analysed by CO-di
35、fference spectroscopy.Hence,all the selected P450s were expressed in a properly folded and active conformation(Fig.3a).候选基因的表达候选基因的表达 为了鉴定生氰糖苷途径中的基因，将选择的10个细胞色素基因在酵母中进行异源表达，从而对候选基因进行筛选。选择的10个细胞色素P450用CO-差光谱在450nm分析得到波峰的特征。可以看到选择的所有细胞色素P450的曲线图和活性构象Fig.3a。第32页，共42页，编辑于2022年，星期一ResultsA:CYP405A2B:CYP3
36、04F2C:CYP405A3D:CYP332A3E:CYP9A36F:CYP9A37G:CYP6CT1H:CYPAE27I:CYP4G47J:CYP417450nm第33页，共42页，编辑于2022年，星期一ResultsAnalyses of expressed proteins.Microsomes prepared from yeast expressing ZfCPR and each of the ten P450s were incubated with NADPH and either Val or Ile as precursors.Of the ten P450s teste
37、d,CYP405A2 catalysed conversion of Val and Ile to their corresponding oximes,2-methylpropanal oxime and 2-methylbutanal oxime as analysed by solid phasemicroextraction gas chromatography-mass spectrometry(Fig.3b).Similar to cyanogenic plants,both E and Z isomer formation was observed .To analyse for
38、 the conversion of oximes to cyanohydrins,the yeast microsome preparations were incubated with NADPH and 2-methylpropanal oxime or 2-methylbutanal oxime.The corresponding cyanohydrins,acetone-cyanohydrin and 2-butanone-cyanohydrin are highly labile and spontane-ously decompose to cyanide and acetone
39、 or 2-butanone.To enable detection,the ketones were reacted with 2,4-dinitrophenylhydra-zine(DNPH),and analysed as the corresponding hydrazones by LC-MS 17.A background level of acetone-DNPH and 2-butanone-DNPH originating from plastic ware and the omnipresence（无处不在）of ace-tone and 2-butanone in lab
40、oratory air was detected in all samples(Fig.3c).表达蛋白的分析表达蛋白的分析 酵母微粒表达ZfCPR，在10个细胞色素P450培养中的，每一个都加入NADPH和缬氨酸或异亮氨酸作为前体物质。对这10个细胞色素P450进行了实验，CYP405A2CYP405A2催化缬氨催化缬氨酸和异亮氨转换成它们相应的肟酸和异亮氨转换成它们相应的肟，用固相微萃取GC-MS分析了2-2-甲基丙醛肟甲基丙醛肟以及2-2-甲基丁醛肟甲基丁醛肟（图图3b3b）.跟含氰植物相似，观察到了E和Z的异构体形式。为了分析肟转化成氰醇，在酵母微粒中就加了NADPH和2-甲基丙醛肟或
41、2-甲基丁醛肟。（相对应的氰醇，丙酮氰醇和2-丁酮氰醇是高度的不稳定和可以自发分解成为氰化物和丙酮或2-丁酮。)为了方便检测，将酮类和2,4-二硝基苯肼（DNPH）进行反应，通过液液质联用质联用来分析相应的腙腙。丙酮-DNPH和丁酮-DNPH的原始含量源于塑料制品，实验的所有的细胞色素在空气中都发现了丙酮和2-丁酮（图图3c3c）。第34页，共42页，编辑于2022年，星期一Results Of the ten P450 s screened,only assays with microsomes containing CYP332A3 resulted in formation of ace
42、tone-DNPH and 2-butanone-DNPH in amounts significantly above background levels.This identified CYP332A3 as the insect P450,which catalyses oxime to cyanohydrin conversion.Microsomal membrane fractions（微粒体膜组分）from yeast expressing the four UGTs were each incubated with C-labelled UDP-glucose in combi
43、nation with either acetone-cyanohydrin or 2-butanone cyanohydrin,and formation of radiolabelled products was analysed by thin-layer chromatography.Only microsomes harbouring UGT33A1 were found to catalyse glucosylation of the cyanohydrins into linamarin and lotaustralin(Fig.3d).Accordingly,CYP405A2,
44、CYP332A3 and UGT33A1 comprise the entire biosynthetic pathway of cyanogenic glucosides（生氰糖苷）in Z.filipendulae(Fig.2).这10个细胞色素P450筛选中，发现只有加了CYP332A3CYP332A3的酵母微粒，导致丙酮和2-丁酮在原始水平上的含量明显增加。这表明了这表明了CYP332A3CYP332A3作为昆作为昆虫虫P450P450，它催化肟转换成氰醇，它催化肟转换成氰醇图图3c3c。转移酶的筛选转移酶的筛选 从酵母中来的微粒体膜组分表达的四个转移酶，每一个都加了C-标记的UDP-
45、葡萄糖并结合丙酮氰醇或2-丁酮氰醇培养，用薄层色谱法薄层色谱法分析放射性标记产品的组成。只有含只有含UGT33A1UGT33A1的微粒被发现催化氰醇的的微粒被发现催化氰醇的糖基转换成亚麻苦苷和百脉根苷糖基转换成亚麻苦苷和百脉根苷（图图3d3d）。所所以，在六星灯蛾中，以，在六星灯蛾中，CYP405A2,CYP332A3 CYP405A2,CYP332A3 和和UGT33A1 UGT33A1 组成了组成了生氰糖苷全部的生物合成途径生氰糖苷全部的生物合成途径（图图2 2）。第35页，共42页，编辑于2022年，星期一Results E.vectorUGT35E1UGT33A1UGT38A1UGT3
46、3B1亚麻苦苷亚麻苦苷百脉根苷百脉根苷第36页，共42页，编辑于2022年，星期一ResultsCYP405A22-2-甲基丙醛肟（甲基丙醛肟（Val）2-2-甲基丁醛肟（甲基丁醛肟（Ile）CYP332A3丙酮丙酮-DNPH-DNPH丁酮丁酮-DNPH-DNPH提取离子色谱图中对应的质谱最丰富的离子对这两提取离子色谱图中对应的质谱最丰富的离子对这两种肟，双峰表示肟的同分异构体种肟，双峰表示肟的同分异构体E E和和Z Z。第37页，共42页，编辑于2022年，星期一第38页，共42页，编辑于2022年，星期一五 总结与分享第39页，共42页，编辑于2022年，星期一谢谢大家！谢谢大家！第40页，共42页，编辑于2022年，星期一谢谢观赏WPS OfficeMake Presentation much more funWPS官方微博kingsoftwps第41页，共42页，编辑于2022年，星期一第42页，共42页，编辑于2022年，星期一