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1、高效液相色谱本讲稿第一页，共二十一页2022/9/222022/9/22第三章第三章高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法一、一、高效液相色谱高效液相色谱仪仪HPLC二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点feature of HPLC三、流程及主要部件三、流程及主要部件general process and main assembly of HPLC第一节第一节第一节第一节高效液相色谱的特高效液相色谱的特高效液相色谱的特高效液相色谱的特点与仪器点与仪器点与仪器点与仪器high performance liquid high performance liquid chromatograp
2、hchromatographfeature and instrument of feature and instrument of HPLCHPLC本讲稿第二页，共二十一页2022/9/222022/9/22一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph本讲稿第三页，共二十一页2022/9/222022/9/22液相色谱仪（液相色谱仪（2）本讲稿第四页，共二十一页2022/9/222022/9/22液相色谱仪（液相色谱仪（3）本讲稿第五页，共二十一页2022/9/222022/9/22液相色谱仪（液相色谱仪（4）本讲稿第六页，共二十
3、一页2022/9/222022/9/22二、二、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。本讲稿第七页，共二十一页2022/9/222022/9/22三、流程及主要部件三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC1.1.流程流程本讲稿第
4、八页，共二十一页2022/9/222022/9/222.主要部件主要部件(1)(1)高压输液泵高压输液泵高压输液泵高压输液泵 主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：15015035010350105 5 PaPa。为为了了获获得得高高柱柱效效而而使使用用粒粒度度很很小小的的固固定定相相（1010mm），液液体体的的流流动动相相高高速速通通过过时时，将将产产生生很很高高的的压压力力，因因此此高高压压、高高速速是是高高效液相色谱的特点之一。效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性本讲稿第九页，共二十一页2022/9
5、/222022/9/22(2)梯度淋洗装置梯度淋洗装置外梯度外梯度外梯度外梯度:利用两台高压输液泵，利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。混合后进入色谱柱。内梯度内梯度内梯度内梯度:一台高压泵一台高压泵,通过比例通过比例调节阀调节阀,将两种或多种不同将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。抽入高压泵中混合。本讲稿第十页，共二十一页2022/9/222022/9/22(3)进样装置进样装置 流路中为高压力工作状态，流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样
6、装置，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：其结构如图所示：本讲稿第十一页，共二十一页2022/9/222022/9/22(4)高效分离柱高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径1 16 6 mmmm，柱长柱长柱长柱长5 540 40 cmcm。发展趋发展趋发展趋发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。本讲稿第十二页，共二十一页2022/9/222022/9/22(5)液相色谱检测器液相色谱检测器 a.a.紫外检测器
7、紫外检测器紫外检测器紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：特点：特点：特点：灵敏度高；灵敏度高；线形范围高；线形范围高；流通池可做的很小（流通池可做的很小（1 1mm 10mm mm 10mm，容积容积 8 8LL）；）；对流动相的流速和温度变化不敏感；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。可用于梯度洗脱。本讲稿第十三页，共二十一页2022/9/222022/9/22b.b.光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 紫外检
8、测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；光光光光电电电电二二二二极极极极管管管管阵阵阵阵列列列列检检检检测测测测器器器器：10241024个个二二极极管管阵阵列列，各各检检测测特特定定波波长长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。本讲稿第十四页，共二十一页2022/9/222022/9/22本讲稿第十五页，共二十一页2022/9/222022/9/22光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器本讲稿第十六页，共二十一页2022/9/222022/9/22c.示差折光检测器示差折光检测器（differential
9、 refractive index detector）除紫外检测器之外应用最多的检测器；除紫外检测器之外应用最多的检测器；可可连连续续检检测测参参比比池池和和样样品品池池中中流流动动相相之之间间的的折折光光指指数数差差值值。差值与浓度呈正比；差值与浓度呈正比；通通用用型型检检测测器器（每每种种物物质质具具有有不不同同的的折折光光指指数数）；灵灵敏敏度度低低、对对温温度度敏敏感、不能用于梯度洗脱；感、不能用于梯度洗脱；偏偏转转式式、反反射射式式和和干涉型三种；干涉型三种；本讲稿第十七页，共二十一页2022/9/222022/9/22示差折光检测器示差折光检测器本讲稿第十八页，共二十一页2022/
10、9/222022/9/22d.荧光检测器荧光检测器（fluorescence detector）高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；对对多多环环芳芳烃烃，维维生生素素B B、黄黄曲曲霉霉素素、卟卟啉啉类类化化合合物物、农农药药、药药物物、氨氨基基酸酸、甾甾类类化化合合物物等等有响应；有响应；本讲稿第十九页，共二十一页2022/9/222022/9/22电导检测器结构结构本讲稿第二十页，共二十一页2022/9/222022/9/22响应特性选择性检测器，对离子型化合物有响应选择性检测器，对离子型化合物有响应灵敏度高灵敏度高受温度的影响大受温度的影响大不能梯度洗提不能梯度洗提本讲稿第二十一页，共二十一页2022/9/222022/9/22