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1、实验六培养基的配置及灭菌实验六培养基的配置及灭菌第1页,共12页,编辑于2022年,星期五一、实验目的一、实验目的v了了解解配配制制培培养养基基的的原原理理,并并掌掌握握配配制制培培养养基基的的一一般般方方法法和步骤;和步骤;v了解高压蒸汽灭菌的原理,并掌握其具体操作方法了解高压蒸汽灭菌的原理,并掌握其具体操作方法第2页,共12页,编辑于2022年,星期五二、实验原理二、实验原理l培养基 由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。基质。l培养基用途1、菌种分离、培养和分类鉴定;、菌种分离、培养和分类鉴定;2、菌种保藏;
2、、菌种保藏;3、生理生化性质的研究;、生理生化性质的研究;4、发酵生产、发酵生产第3页,共12页,编辑于2022年,星期五二、实验原理二、实验原理l培养基配置需满足的条件:物质条件:六大营养要素-C源、N源、能源、无机盐、生长因子、水;理化条件:pH、aw、Eh等第4页,共12页,编辑于2022年,星期五高 压 蒸 汽 灭 菌 锅注意事项:排净冷空气;灭菌终了,缓慢降压;压力降为0,取出物品。l灭菌锅的原理第5页,共12页,编辑于2022年,星期五三、实验器材三、实验器材l材料 牛肉膏蛋白胨培养基药品;马丁孟加拉红-链霉素培养基药品l仪器 电子天平;高压蒸汽灭菌锅l其他 三角瓶,试管,培养皿,
3、移液管第6页,共12页,编辑于2022年,星期五四、实验步骤四、实验步骤(一)培养基的配制从培养基的物理状态可分为:1.液体培养基:不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基:在液体培养基中加入1.52%左右的凝固剂3.半固体培养基:在液体培养基中加入0.20.7%凝固剂而成的半固体状培养基。第7页,共12页,编辑于2022年,星期五培养基的配制方法和步骤l称 量:按照配方正确称取各种原料(除了琼脂)放于搪瓷杯中。l溶 化:在搪瓷杯中加入所需水量,玻棒搅匀,溶解。l调pH值:用2N NaOH或2N HCl调pH,用pH试纸对照。l分 装:注意不要污染棉塞。l包扎成捆,做好标记,注明班级,组别,
4、何种培养基等。第8页,共12页,编辑于2022年,星期五两种培养基的配方1、牛肉膏蛋白胨培养基100mll牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 琼脂 2g 水 100mL pH 7.27.4 灭菌 121126,20min第9页,共12页,编辑于2022年,星期五2、马丁-孟加拉红培养基100mlKH2PO4 0.1gMgSO47H2O 0.05g蛋白胨 0.5g葡萄糖 1.0g琼脂 2g水 100mlpH 自然孟加拉红溶液 0.75ml灭菌(含葡萄糖)112115 30min第10页,共12页,编辑于2022年,星期五其他器材的准备(一)制备无菌水 试 管:14支,毎支试管装9ml自来水 三角瓶:一只,装99ml自来水并加玻璃珠。(二)包吸管及平皿 吸 管:13支 平 皿:14个(三)制作三角瓶塞3个第11页,共12页,编辑于2022年,星期五灭菌锅的使用方法l加水煮沸;l把待灭菌的物品放入灭菌锅;l加盖l密封l排气l灭菌2030minl降压l开盖取物第12页,共12页,编辑于2022年,星期五