《生物技术实践——高考生物一轮复习真题模拟试题专项汇编.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物技术实践——高考生物一轮复习真题模拟试题专项汇编.doc（16页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、（12）生物技术实践2021年高考生物一轮复习真题模拟试题专项汇编【2021年山东卷，12】1.葡萄酒的制作离不开酵母菌。下列说法错误的是( )A.无氧条件下酵母菌能存活但不能大量繁殖B.自然发酵制作葡萄酒时起主要作用的菌是野生型酵母菌C.葡萄酒的颜色是葡萄皮中的色素进入发酵液形成的D.制作过程中随着发酵的进行发酵液中糖含量增加【2021年山东卷，13】2.粗提取DNA时，向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水并搅拌，过滤后所得滤液进行下列处理后再进行过滤，在得到的滤液中加入特定试剂后容易提取出DNA相对含量较高的白色丝状物的处理方式是( )A.加入适量的木瓜蛋白酶B.3740的水浴箱中保温1015
2、分钟C.加入与滤液体积相等的、体积分数为95%的冷却的酒精D.加入NaCl调节浓度至2mol/L过滤调节滤液中NaCl浓度至0.14mol/L【2021年山东卷，14】3.解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是( )A.甲菌属于解脂菌B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力【2021年广东卷，9】4.秸秆的纤维素经酶水解后可
3、作为生产生物燃料乙醇的原料，生物兴趣小组利用自制的纤维素水解液（含5%葡萄糖）培养酵母菌并探究其细胞呼吸（如图），下列叙述正确的是( )A.培养开始时向甲瓶加入重铬酸钾以便检测乙醇生成B.乙瓶的溶液由蓝色变成红色，表明酵母菌已产生CO2C.用甲基绿溶液染色后可观察到酵母菌中线粒体的分布D.实验中增加甲瓶的酵母菌数量不能提高乙醇最大产量【2021年6月浙江卷，17】5.下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是( )A.测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板B.红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数C.涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用于细菌计数D.酵母菌在液体培养基
4、中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度【2021年1月浙江卷，10】6.用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中错误的是( )A. 将白萝卜切成小块B. 向容器中通入无菌空气C. 添加已经腌制过的泡菜汁D. 用沸水短时处理白萝卜块【2021年山东卷，20】（多选题）7.含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁氨的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是( )A.乙菌的运动能力比甲菌强
5、B.为不影响菌的运动需选用液体培养基C.该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D.穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染【2021年全国乙卷，37】8.【生物选修1：生物技术实践】工业上所说的发酵是指微生物在有氧或无氧条件下通过分解与合成代谢将某些原料物质转化为特定产品的过程，利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制作酱油的流程示意图如下：回答下列问题：（1）米曲霉发酵过程中，加入大豆、小麦和麦麸可以为米曲霉的生长提供营养物质，大豆中的_可为米曲霉的生长提供氮源，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供_。（2）米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所
6、需的酶类，这些酶中的_、_能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为小分子的肽和_。米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气并搅拌，由此可以判断米曲霉属于_（填“自养厌氧”“异养厌氧”或“异养好氧”）微生物。（3）在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于_（填“真核生物”或“原核生物”）；添加的酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是_。在该阶段抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要因素，据图分析该阶段中可以抑制杂菌生长的物质是_（答出1点即可）。【2021年湖南卷，21】9.大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达1238 kg。大熊猫可利用竹
7、子中8%的纤维素和27%的半纤维素，研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即_。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以_为唯一碳源的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于_培养基。（2）配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是_。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是_。（3）简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路：_。（4）为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37 条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株_
8、，理由是_。菌株秸秆总重/g秸秆残重/g秸秆杆重/%纤维素降解率/%A2.001.5124.5016.14B2.001.5323.5014.92C2.001.4229.0023.32【2021年广东卷，21】10.中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。回答下列问题：（1）为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为_，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株
9、。培养过程中定期取样并用_的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有_等（答出两种方法即可）。（2）基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60 g/L，PH为10，菌株H可正常持续发酵60 d以上。该系统不需要灭菌的原因是_（答出两点即可）。（3）研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中_可能是高密度培养的限制因素。（4）菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，
10、说明其能分泌_。【2021年河北卷，23】11.葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些皮渣主要用作饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。回答下列问题：（1）皮渣中含有较多的天然食用色素花色苷，可用萃取法提取。萃取前将原料干燥、粉碎的目的分别是_，萃取效率主要取决于萃取剂的_。萃取过程需要在适宜温度下进行，温度过高会导致花色苷_。研究发现，萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理可提高花色苷的提取率，原因是_。（2）为了解皮渣中微生物的数量，取10 g皮渣加入90 mL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0.1 mL稀释液接种于培养基上。104倍稀释对应的三个平板
11、中菌落数量分别为78、91和95，则每克皮渣中微生物数量为_个。（3）皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH调至_性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是_。培养筛选得到的酯酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙醇作为_。（4）皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者菌落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌。（简要写出实验步骤和预期结果）【2021年全国甲卷，37】12.加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。某同学通过实验比较了几种洗衣粉
12、的去渍效果（“+”越多表示去渍效果越好），实验结果见下表。加酶洗衣粉A加酶洗衣粉B加酶洗衣粉C无酶洗衣粉（对照）血渍+油渍+根据实验结果回答下列问题：（1）加酶洗衣粉A中添加的酶是_；加酶洗衣粉B中添加的酶是_；加酶洗衣粉C中添加的酶是_。（2）表中不宜用于洗涤蚕丝织物的洗衣粉有_，原因是_。（3）相对于无酶洗衣粉，加酶洗衣粉去渍效果好的原因是_。（4）关于酶的应用，除上面提到的加酶洗衣粉外，固定化酶也在生产实践中得到应用，如固定化葡萄糖异构酶已经用于高果糖浆生产。固定化酶技术是指_。固定化酶在生产实践中应用的优点是_（答出1点即可）。【2021年6月浙江卷，29（一）】13.回答下列（一）（
13、二）小题：（一）回答与甘蔗醋制作有关的问题：（1）为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株，以自然发酵的甘蔗渣为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养基：将适量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容，调节pH，再高压蒸汽灭菌，经_后加入3%体积的无水乙醇。然后将10 g自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基，震荡培养24 h。用_将少量上述培养液涂布到含CaCO3的分离培养基上，在30 培养48 h。再挑取分离培养基上具有_的单菌落若干，分别接种到与分离培养基成分相同的_培养基上培养24 h后，置于4 冰箱中保存。（2）优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基，培养一段时间后，取合适接种量的菌液在
14、30 、150 r/min条件下震荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中_含量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外，还应有_（答出2点即可）等特点。（3）制醋过程中，可将甘蔗渣制作成固定化介质，经_后用于发酵。其固定化方法为_。（二）斑马鱼是一种模式动物，体外受精发育，胚胎透明、便于观察，可用于水质监测、基因功能分析以及药物毒性与安全性评价等。（1）由于人类活动产生的生活污水日益增多，大量未经处理的污水直接排入河流、湖泊会引起水体_，导致藻类大量繁殖形成水华。取水样喂养斑马鱼，可用斑马鱼每周的体重和死亡率等指标监测水体污染程度。（2）为了研究某基因在斑马鱼血
15、管发育过程中的分子调控机制，用DNA连接酶将该基因连接到质粒载体形成_，导入大肠杆菌菌株DH5中。为了能够连接上该目的基因、并有利于获得含该目的基因的DH5阳性细胞克隆，质粒载体应含有_（答出2点即可）。提取质粒后，采用_法，将该基因导入斑马鱼受精卵细胞中，培养并观察转基因斑马鱼胚胎血管的发育情况。（3）为了获取大量斑马鱼胚胎细胞用于药物筛选，可用_分散斑马鱼囊胚的内细胞团，取分散细胞作为初始材料进行_培养。培养瓶中添加成纤维细胞作为_，以提高斑马鱼胚胎细胞克隆的形成率。【2021年1月浙江卷，29（一）】14.回答下列(一)、(二)小题：(一)某环保公司从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水
16、污染物的细菌菌株，制备了固定化菌株。(1)从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或_法，两种方法均能在固体培养基上形成_。对分离的菌株进行诱变、_和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖。(2)固定化菌株的制备流程如下；将菌株与该公司研制的特定介质结合； 用蒸馏水去除_； 检验固定化菌株的_。菌株与特定介质的结合不宜直接采用交联法和共价偶联法，可以采用的2种方法是_。(3)对外，只提供固定化菌株有利于保护该公司的知识产权，推测其原因是_。(二)三叶青为蔓生的藤本植物，以根入药。由于野生三叶青对生长环境要求非常苛刻，以及生态环境的破坏和过度的采挖，
17、目前我国野生三叶青已十分珍稀。(1)为保护三叶青的_多样性和保证药材的品质，科技工作者依据生态工程原理，利用_技术，实现了三叶青的林下种植。(2)依据基因工程原理，利用发根农杆菌侵染三叶青带伤口的叶片，叶片产生酚类化合物，诱导发根农杆菌质粒上vir系列基因表达形成_和限制性核酸内切酶等，进而从质粒上复制并切割出一段可转移的DNA片段(T-DNA)。T-DNA进入叶片细胞并整合到染色体上，T-DNA上rol系列基因表达，产生相应的植物激素，促使叶片细胞持续不断地分裂形成_，再分化形成毛状根。(3)剪取毛状根，转入含头孢类抗生素的固体培养基上进行多次_培养，培养基中添加抗生素的主要目的是_。最后取
18、毛状根转入液体培养基、置于摇床上进行悬浮培养，通过控制摇床的_和温度，调节培养基成分中的_，获得大量毛状根，用于提取药用成分。【2021年西藏拉萨模拟，11】15.下面是果酒、果醋制作的实验流程以及某同学设计的果酒、果醋的发酵装置。根据图示回答下列问题。（1）完成图1的实验流程。_。（2）果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是_（填代谢类型）微生物。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，酒精发酵时一般将温度控制在_。（3）图2装置中的充气口在果酒发酵时关闭，在果醋发酵时连接充气泵，并连续不断地向内_。（4）果酒制作完成后，可以用_来检测酒精的生成，酒精与之在酸性条件下反应呈现_色。（5）果醋制作时，醋酸
19、菌将乙醇变为醋酸的环境条件是糖源_(填充足或缺少)。为鉴定果醋是否酿制成功，除可以通过观察菌膜、尝、嗅之外，还可以通过检测和比较_作进一步的鉴定。答案以及解析1.答案：D2.答案：A3.答案：B4.答案：D解析：本题考查探究酵母菌细胞呼吸方式的实验以及观察线粒体的实验。选项正误原因A加入重铭酸钾和浓硫酸的混合溶液才可以检测乙醇的生成。浓硫酸的作用是提供酸性环境，酸性重铭酸钾与乙醇混合，才能观察到灰绿色BCO2通入溴麝香草酚蓝水溶液中，颜色变化为蓝绿黄C观察线粒体时需要用健那绿染液进行染色D乙醇的最大产量与容器中的葡萄糖量有关，与酵母菌数量无关5.答案：C解析：本题考查原生质体和细胞计数的相关知
20、识。原生质体是指植物细胞去掉细胞壁的部分，可用血细胞计数板进行计数，A项正确；由于细胞膜的选择透过性，红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞是否存活，由于红墨水具有颜色，位于细胞壁和原生质层之间，因此可用于细胞计数，B项正确；划线分离法接种时，一些菌落往往由两个或多个活菌繁殖而成，还有一些不能形成菌落，而在计数时一个菌落对应着一个活菌，这样在划线所得的平板中，菌落数目低于活菌的实际数值，所以不能用划线分离法测定活菌的数量，C项错误。6.答案：B解析：A、将白萝卜切成小块可以扩大白萝卜与腌料的接触面积，缩短腌制时间，A正确；B、泡菜制作所需菌种为乳酸菌，制作过程中应保持无氧环境，向容器中通入无菌空
21、气不利于腌制，B错误；C、泡菜汁中含有一定量的发酵菌种，所以在腌制过程中，加入一些已经腌制过泡菜汁可缩短腌制时间，C正确；D、用沸水短时处理，可抑制某些微生物的繁殖，提高泡菜品质，也可缩短腌制时间，D正确。故选B。7.答案：BC8.答案：（1）蛋白质；碳源（2）蛋白酶；脂肪酶；氨基酸；异养好氧（3）原核生物；酒精和CO2；食盐（或乳酸或酒精）解析：本题考查发酵工程的相关知识。（1）氮源是指含氮的化合物，大豆中含氮的物质主要是蛋白质，淀粉的组成元素是C、H、O，淀粉可为米曲霉的生长提供碳源。（2）催化蛋白质分解的酶是蛋白酶，催化脂肪分解的酶是脂肪酶。蛋白质分解后的产物是小分子的肽和氨基酸。由于米
22、曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气并搅拌，可推测米曲霉属于异养好氧微生物。（3）乳酸菌属于原核生物，在无氧条件下乳酸菌将葡萄糖分解为酒精和CO2。在发酵池发酵过程中，需添加乳酸菌酵母菌和食盐，说明抑制杂菌生长的物质有食盐、乳酸或酒精。9.答案：（1）C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶；纤维素；选择（2）为了杀死培养基中的所有微生物（微生物和芽孢、孢子）；不接种培养（或空白培养）（3）将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0.1 mL涂布到若干个平板（每个稀释度至少涂布三个平板），对菌落数在30300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数（4）C；接种菌株C后秸秆失重最多
23、，纤维素降解率最大解析：本题考查微生物实验室培养的有关知识和实验设计能力。（1）纤维素酶至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶等3种酶；筛选纤维素分解菌应使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基。（2）对培养基进行灭菌的目的是杀死培养基中的所有微生物（微生物和芽孢、孢子），从而防止外来杂菌的入侵；检测固体培养基灭菌效果的常用方法是将不接种的空白培养基放在恒温培养箱中培养，看是否有菌落产生。（3）可利用稀释涂布平板法将菌液涂布在平板上，经过一段时间培养后，对平板上的菌落进行计数，并依据公式推测出菌液中的活菌数量。（4）对比几种菌株接种后秸秆的失重量和纤维素降解率可以看出，菌株C的这两项指标是最高的，因此它
24、产生的纤维素酶的活力最强。10.答案：（1）唯一碳源；稀释涂布平板；诱变育种和转基因育种（或杂交育种）（2）培养基中高盐浓度和高pH会抑制杂菌的生长（3）氧气浓度（4）蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶解析：本题考查微生物的培养的相关知识。（1）蔗糖可作为微生物培养的唯一碳源，活细胞计数的方法主要采取稀释涂布平板法，通过统计平板中的菌落来计算样品中的菌落数。常见育种方法有杂交育种、透变育种、单倍体育种、多倍体育种、转基因食种，对于优良菌株的选育还能采取诱变育种、杂交育种和转基因育种的方法。（2）由题意可知，该发酵系统的环境为高浓度盐和高pH，在盐浓度为60 g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为
25、10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制，因此不需要灭菌。（3）根据题干中“产生少量乙醇”可知，发酵过程中氧气不充足，细胞进行了无氧呼吸产生乙醇。（4）菌株H可分解含有蛋白质、淀粉、油脂等餐厨的垃圾，因此可推测菌株H能分泌水解其相应的酶，即蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶。11.答案：（1）降低含水量、使原料与萃取剂充分接触，提高溶解度；性质和使用量；分解；纤维素酶和果胶酶可破坏细胞壁，有利于提高花色苷的提取率（2）8.8106（3）中性或微碱；使醋酸菌菌落周围出现透明圈，根据透明圈来筛选优良菌株；碳源（4）实验步骤：将平板置于无氧环境下继续培养，观察菌落形态和透明圈大小。预期结果：若菌落继续
26、生长，且透明圈增大，则为兼性厌氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能继续生长，透明圈不再扩大，则为醋酸菌菌落。解析：本题考查发酵工程的相关知识。（1）萃取前将原料干燥的目的是降低含水量，粉碎的目的是使原料与萃取剂充分接触，提高溶解度，萃取效率主要取决于萃取剂的性质和使用量。萃取过程需要在适宜温度下进行，温度过高会导致花色苷分解。纤维素酶和果胶酶会催化纤维素和果胶水解，破坏细胞壁，有利于提高花色苷的提取率。（2）平板上菌落数平均为（78+91+95）/3=88，每克皮渣中微生物数量为88/0.1104=8.8106。（3）醋酸菌属于细菌，故制备醋酸菌初筛平板时，需将培养基的pH调至中性或微碱性。碳酸钙能够
27、与醋酸反应，使醋酸菌菌落周围出现透明圈，在平板上可根据碳酸钙透明圈来筛选优良菌株，碳酸钙透明圈越大，说明菌株产生醋酸的能力越强。培养筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中，乙醇可作为碳源。（4）乳酸菌属于兼性厌氧型，醋酸菌属于需氧型，故可将平板置于无氧环境中继续培养，观察平板上形成的菌落。12.答案：（1）蛋白酶；脂肪酶；蛋白酶和脂肪酶（2）加酶洗衣粉A和C；洗衣粉中的蛋白酶可能会分解蚕丝织物中的蛋白质而损伤衣物（3）酶可以将污渍中的大分子物质分解为小分子物质，使污渍易从衣物上脱落（4）利用物理或化学方法将酶固定在一定空间内的技术；固定化酶能够反复利用，从而降低生产成本解析：本题考查酶及
28、酶的应用的相关知识。（1）加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶。其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。碱性蛋白酶能将血渍、奶渍（含有大分子蛋白质）等水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽。使污迹容易从衣物上脱落。根据题表介绍的四类洗衣粉的去渍效果可知，洗衣粉A、B、C分别含有蛋白酶、脂肪酶、蛋白酶和脂肪酶。（2）蚕丝织物中含有蛋白质，不宜用含有蛋白酶的洗衣粉洗涤，避免蚕丝织物中的蛋白质被蛋白酶水解为可溶性的氨基酸和小分子的肽，对蚕丝织物造成损害，因此不宜用于洗涤蚕丝织物的洗衣粉有加酶洗衣粉A和C。（3）相对于无酶洗衣粉，加酶洗衣
29、粉去渍效果好的原因是加酶洗衣粉可将蛋白质和脂肪等大分子水解为小分子物质，使其更容易脱落。（4）固定化酶技术是指利用物理或化学方法将酶固定在一定空间内的技术。固定化酶在生产实践中应用的优点是易于回收，可重复利用，从而降低生产成本。13.答案：（一）（1）冷却；玻璃刮刀；较大透明圈；斜面（2）乙醇；耐酒精度高、耐酸高（3）灭菌；吸附法（二）（1）富营养化（2）重组DNA分子；限制性核酸内切酶的识别序列、抗生素抗性基因；显微注射（3）胰蛋白酶；原代；饲养层细胞解析：本题考查微生物的培养和筛选、基因工程的相关知识。（一）（1）高压蒸汽灭菌后需经过冷却再加入无水乙醇，以免温度过高使乙醇挥发；稀释涂布平板
30、法的步骤：首先将培养的菌液稀释，然后取一定量的稀释液放在无菌的固体培养基上，用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上；醋酸菌产生的醋酸会与培养基中的CaCO3反应形成透明圈，因此需挑取分离培养基上具有较大透明圈的单菌落若干；菌种的临时保藏一般是将菌种接种到固体斜面培养基上，在合适的温度下长成菌落后在4 冰箱中保存。（2）醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，因此当培养液中乙醇含量达到最低时，发酵结束；优良菌种应具有产酸量高、耐酒精度高、耐酸髙等优点。（3）将甘蔗渣制作成固定化介质需经灭菌后才能用于发酵，以免杂菌的污染影响实验结果；因为甘蔗渣具有很好的吸附性，因此常采用吸附法来进行固定
31、化。（二）（1）被人类排放到水体中的污染物包括家庭污水、微生物病原体、化学肥料、杀虫剂、其他矿物质和化学品、放射性物质等，常常造成水体富营养化，从而导致藻类大量繁殖，河流、湖泊生物多样性锐减。（2）将目的基因（外源DNA分子）用DNA连接酶在体外连接到适当的载体上，即DNA分子的体外重组，这种重新组合的DNA称为重组DNA；质粒载体应含有限制性核酸内切酶的识别序列，以便目的基因能成功插入质粒载体，质粒载体还应含有抗生素抗性基因，以便检验目的基因是否表达；将目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法。（3）胰蛋白酶可以消化细胞间产生的粘连蛋白，从而使细胞分散；原代培养是指直接从机体取下细胞、组织
32、和器官后立即进行培养，因此取分散细胞作为初始材料进行培养属于原代培养；干细胞培养时，饲养层细胞可作为提供干细胞分裂、增殖的营养细胞，因此培养瓶中添加的成纤维细胞是作为饲养层细胞，以提高斑马鱼胚胎细胞克隆的形成率。14.答案： (1). 涂布分离 单菌落 筛选 (2). 未固定的细菌 降解富营养化污水污染物的能力 包埋法和吸附法 (3). 特定介质能为菌株繁殖提供X (1). 遗传 间种 (2). DNA聚合酶 愈伤组织 (3). 继代 杀灭发根农杆菌 转速 营养元素以及生长调节剂的种类和浓度解析：(一)分析题意可知，本实验目的是从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备固定化
33、菌株。(1)分离纯化细菌最常用的方法是划线分离法或涂布分离法，两种方法均能在固体培养基上形成单菌落。为了获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株，还需对分离的菌株进行诱变处理，再经筛选和鉴定。(2)固定化的方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。由于菌株与特定介质的结合不宜直接采用交联法和共价偶联法，故可以采用的2种方法是包埋法和吸附法。(3)由于该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖，可推测特定介质能为菌株繁殖提供X，故该公司对外只提供固定化菌株，有利于保护该公司的知识产权。(二)(1)生物多样性包括遗传多样性、物种多样性和生态系统多样性，为保护三叶青的遗传多样性和保证药材的品质；三叶
34、青的林下种植，是利用间种技术。(2)分析题意可知，从质粒上复制并切割出一段可转移的DNA片段(T-DNA)，DNA复制需要DNA聚合酶，故可知，酚类化合物诱导发根农杆菌质粒上vir系列基因表达，形成DNA聚合酶和限制性核酸内切酶等。根据植物组织培养技术过程可知，相应植物激素可以促使叶片细胞脱分化形成愈伤组织，再分化形成毛状根。(3)剪取毛状根，转入含头孢类抗生素的固体培养基上进行多次继代培养，培养基中添加抗生素的主要目的是杀灭发根农杆菌。最后取毛状根转入液体培养基、置于摇床上进行悬浮培养，通过控制摇床的转速和温度，调节培养基成分中的营养元素以及生长调节剂的种类和浓度，获得大量毛状根，用于提取药用成分。15.答案：（1）醋酸发酵（2）兼性厌氧；1825（3）泵入空(氧)气（4）重铬酸钾；灰绿（5）缺少；(醋酸)发酵前后pH的变化