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1、关于维生素类药物的分析(2)第1页，讲稿共78张，创作于星期二维生素类药物的分析维生素类药物的分析基本内容基本内容维维生生素素A、维维生生素素B1、维维生生素素C、维维生生素素D和和维维生生素素E的的结结构构和和性性质质、鉴鉴别别试试验验、含含量量测定，以及游离生育酚的检查。测定，以及游离生育酚的检查。基本要求基本要求掌握：维生素类药物的结构与分析方法的掌握：维生素类药物的结构与分析方法的关系，维生素关系，维生素A的紫外分光光度法，维生素的紫外分光光度法，维生素C的碘量法。的碘量法。第2页，讲稿共78张，创作于星期二维生素类药物的分析维生素类药物的分析熟熟悉悉：维维生生素素A的的三三氯氯化化锑
2、锑反反应应及及比比色色法法，维维生生素素E的的鉴鉴别别试试验验及及气气相相色色谱谱法法，维维生生素素B1的的硫硫色色素素反反应应及及紫紫外外分分光光光光度度法法、非非水水滴滴定定法法，维维生生素素C的的2，6二二氯氯吲吲哚哚酚酚滴滴定定法，维生素法，维生素D的鉴别试验。的鉴别试验。了解：该类药物的其他分析项目与方法，了解：该类药物的其他分析项目与方法，维生素维生素D含量测定的高效液相色谱法，维生含量测定的高效液相色谱法，维生素素A三点校正法的推导过程三点校正法的推导过程。第3页，讲稿共78张，创作于星期二课时安排：课时安排：总学时：总学时：（5学时）学时）维生素维生素A、维生素维生素B1（3学
3、时）学时）重点内容：重点内容：维生素维生素A的紫外分光光度法的紫外分光光度法 维生素维生素C、D、E；复习及习题复习及习题（2学时）学时）第4页，讲稿共78张，创作于星期二概概 述述特点：特点：1.非蛋白质、非脂肪、非糖类的有机化合非蛋白质、非脂肪、非糖类的有机化合物物.具有较强的生理活性，体内不能合成。具有较强的生理活性，体内不能合成。2.多为醇、酯、胺、酸、酚和醌类；各具多为醇、酯、胺、酸、酚和醌类；各具不同的理化性质和生理作用。不同的理化性质和生理作用。维生素维生素A(retinal)第5页，讲稿共78张，创作于星期二维生素维生素D3(colecalciferol，胆骨化醇胆骨化醇)维生
4、素维生素B1(Thiamine hydrochloride,盐酸盐酸硫胺硫胺)第6页，讲稿共78张，创作于星期二第7页，讲稿共78张，创作于星期二3.分类分类:脂溶性和水溶性脂溶性和水溶性脂溶性：维生素A、D、E、K等；水溶性：维生素B组(B1、B2等)、烟酸、泛酸、叶酸及抗坏血酸。其中脂溶性维生素在体内可直接参与代谢的调节作其中脂溶性维生素在体内可直接参与代谢的调节作用，而水溶性维生素是通过转变成辅酶对代谢起调用，而水溶性维生素是通过转变成辅酶对代谢起调节作用。节作用。4.测定方法测定方法:生物、微生物、化学和物理化学的方法.第8页，讲稿共78张，创作于星期二第一节第一节 维生素维生素A的分
5、析的分析维生素维生素A A主要存于动物性食物中，但有色植物中的主要存于动物性食物中，但有色植物中的-胡萝卜素即胡萝卜素即VAVA原含量原含量丰富。丰富。第9页，讲稿共78张，创作于星期二第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析维生素A 维生素A1（视黄醇）维生素A2（去氢维生素）维生素A3（去水维生素）全反式维生素A第10页，讲稿共78张，创作于星期二一、结构与性质一、结构与性质维生素维生素A(retinal)1共轭多烯结构：共轭多烯结构：具具有有强强紫紫外外吸吸收收（在在325328nm有有最最大大吸吸收收），可可采采用用紫紫外外吸吸收收光光谱谱法法进进行行鉴鉴别别，采采用用紫紫外外分分光光
6、光光度度法法进进行行含量测定。含量测定。存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物天天然然维维生生素素A是是全全反反式式维维生生素素A。其其它它异异构构体体具具有有相相似似的化学性质，但生物效价不同。的化学性质，但生物效价不同。（表9-2）第11页，讲稿共78张，创作于星期二 相对生物效价相对生物效价维生素维生素A（全反）全反）325.5 100%新维生素新维生素Aa（2-顺）顺）328 75%新维生素新维生素Ab（4-顺）顺）320.5 24%新维生素新维生素Ac（2、4-顺）顺）310.5 15%异维生素异维生素Aa（6-顺）顺）323 21%异维生素异维生素Ab（2、6-顺）顺）324
7、 24%第12页，讲稿共78张，创作于星期二一、结构与性质一、结构与性质 2.结构式中结构式中R的不同，可以形成维生素的不同，可以形成维生素A醇或其酯。醇或其酯。临床上多用其醋酸酯和棕榈酸酯。临床上多用其醋酸酯和棕榈酸酯。（表14-1）3.易氧化变质：有多个不饱和键，性质不稳定，易易氧化变质：有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，生成无活性物质。被空气中氧或氧化剂氧化，生成无活性物质。-H 维生素维生素A醇醇-COCH3 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第13页，讲稿共78张，创作于星期二一、结构与性质一、结构与性质4.溶解性：（
8、脂溶性）能与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚溶解性：（脂溶性）能与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。5.能与三氯化锑呈色能与三氯化锑呈色 ：在氯仿中能与三氯化锑试剂：在氯仿中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。作用，产生不稳定的蓝色。第14页，讲稿共78张，创作于星期二二、鉴别试验 （一）三氯化锑反应（一）三氯化锑反应（Carr-Price反应）反应）维生素维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中，在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中，即显蓝色，渐变成紫红色。即显蓝色，渐变成紫红色。蓝色蓝色紫红紫红SbCl5第15页，讲稿共78张，
9、创作于星期二二、鉴别试验讨论讨论：1.实实际际起起作作用用的的是是三三氯氯化化锑锑()中中存存在在的的Lewis酸氯化高锑酸氯化高锑(V)2.反反应应要要用用无无醇醇氯氯仿仿，因因为为醇醇的的存存在在要要作作为为亲亲核核反反应应物物与与正正碳碳离离子子反反应应而而使使其其正正电荷消失。电荷消失。3.反反应应要要无无水水，水水可可使使三三氯氯化化锑锑水水解解为为氧氧氯化锑。氯化锑。第16页，讲稿共78张，创作于星期二（二）紫外吸收（二）紫外吸收特征：特征：1.直接测定直接测定维生素维生素A1 在在326326nmnm处有最大吸收。处有最大吸收。2.酸消去后测定酸消去后测定维生素维生素A3（去水维
10、生素去水维生素A）在在332332nmnm附近有曲折，附近有曲折，在在348348、367367、389nm389nm附近有吸收峰。附近有吸收峰。1、为什么吸收带红移？、为什么吸收带红移？2、为什么吸收峰变多？、为什么吸收峰变多？二、鉴别试验Vit AVit A3第17页，讲稿共78张，创作于星期二维生素维生素A(醇醇)在盐酸存在下解离，随即正电荷转移至在盐酸存在下解离，随即正电荷转移至紫萝酮紫萝酮环上的碳上，然后失去一个质子而生成去水维生素环上的碳上，然后失去一个质子而生成去水维生素A：第18页，讲稿共78张，创作于星期二 1、为什么吸收带红移？、为什么吸收带红移？去水维生素去水维生素A比维
11、生素比维生素A多一个共轭双键，因而红移。多一个共轭双键，因而红移。Konjugierte吸收吸收Fieser规则、规则、Scoot规则规则 2、为什么吸收峰变多？、为什么吸收峰变多？（思考题，请查询紫外光谱原理的相关资料）（思考题，请查询紫外光谱原理的相关资料）第19页，讲稿共78张，创作于星期二（三）薄层层析（三）薄层层析条件条件1：（：（BP2000）硅胶板硅胶板溶剂：环己烷溶剂：环己烷展开剂：环己烷展开剂：环己烷乙醚（乙醚（80:20）三氯化锑试剂显色，以标准品同时进行对照三氯化锑试剂显色，以标准品同时进行对照条件条件2：硅胶板硅胶板溶剂：氯仿溶剂：氯仿展开剂：环己烷展开剂：环己烷乙醚（
12、乙醚（80:20）磷钼酸磷钼酸显色，以标准品同时进行对照显色，以标准品同时进行对照第20页，讲稿共78张，创作于星期二三、含量测定三、含量测定第21页，讲稿共78张，创作于星期二三、含量测定三、含量测定 紫外分光光度法紫外分光光度法三氯化锑比色法三氯化锑比色法 （专属性差，显色不稳定）（专属性差，显色不稳定）前者是法定方法，后者多用于食品或饲料中的维生素前者是法定方法，后者多用于食品或饲料中的维生素A的的测定（行业方法）。测定（行业方法）。HPLC法法具有强紫外吸收（在具有强紫外吸收（在325328nm有最大吸收），可采用有最大吸收），可采用紫外分光光度法进行含量测定。紫外分光光度法进行含量测
13、定。第22页，讲稿共78张，创作于星期二 紫外分光光度法目前各国药典均采用紫外分光光度法测定维生素目前各国药典均采用紫外分光光度法测定维生素A的含量。本的含量。本法法快速、准确、经济快速、准确、经济，测定结果能比较正确地反映维生素，测定结果能比较正确地反映维生素A的的效价。效价。如何测定？如何测定？1.根据紫外光谱数据根据紫外光谱数据:定量定量 维生素维生素A在不同溶剂中的紫外吸收数据在不同溶剂中的紫外吸收数据其最大吸收峰的位置随溶剂的不同而异其最大吸收峰的位置随溶剂的不同而异第23页，讲稿共78张，创作于星期二2.能否直接测定能否直接测定？能直接测定能直接测定 的条件：的条件：1.仪器仪器符
14、合符合药典药典的要求的要求 2.溶剂及样品中的基质等其他组分在测定波长处溶剂及样品中的基质等其他组分在测定波长处无无干扰干扰 （1）而维生素而维生素A原料药中常混有杂质，如维生素原料药中常混有杂质，如维生素A2、维生维生素素A3。第24页，讲稿共78张，创作于星期二（2 2）维生素）维生素A A的氧化的氧化产物：产物：（3 3）维生素）维生素A A在光照下产生的在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇：无生物活性的聚合物鲸醇：第25页，讲稿共78张，创作于星期二 （4 4）维生素）维生素A A的顺反异构体；的顺反异构体；（5 5）合成时产生的中间体）合成时产生的中间体 这些杂质在维生素这些杂质在维
15、生素A的最大吸收波长（的最大吸收波长（310340nm）波长范围内有吸收，干扰维生素波长范围内有吸收，干扰维生素A的测的测定，定，所测得的吸收度不是维生素所测得的吸收度不是维生素A所独有。所独有。所以不能直接测定维生素所以不能直接测定维生素A的的 用于定量用于定量 要消除杂质的干扰要消除杂质的干扰三点校正法三点校正法第26页，讲稿共78张，创作于星期二 三点校正法测定维生素三点校正法测定维生素A的含量的含量本法是用在本法是用在三个波长处测得吸收三个波长处测得吸收度度，根据，根据校正公式计算校正公式计算吸收度吸收度A校正值后，再计算含量。校正值后，再计算含量。原理原理：杂质的吸收在杂质的吸收在3
16、10340nm波长范围波长范围内呈一条直线，且随波长的增大，吸收内呈一条直线，且随波长的增大，吸收度变小。度变小。物质对光的物质对光的吸收度吸收度具有加和性，具有加和性，因而吸收曲线也是他们吸收曲线的因而吸收曲线也是他们吸收曲线的叠加叠加。AnmVit A samplepure VA acetateimpurities第27页，讲稿共78张，创作于星期二原则原则：最大吸收波长处一点，最大吸收波长的两最大吸收波长处一点，最大吸收波长的两侧各选一点。侧各选一点。1.中国药典测定中国药典测定维生素维生素A醋酸酯醋酸酯等波长差法等波长差法在在 1的左右各选一点为的左右各选一点为 2和和 3；使使 3
17、11 2。规定规定 1328nm，2316nm，3340nm合成 Vit A天然鱼肝油第28页，讲稿共78张，创作于星期二2.中国药典测定中国药典测定维生素维生素A醇醇等吸收比法等吸收比法在在 1的左右各选一点为的左右各选一点为 2和和 3；使使A 2A3=6/7A 1。规定规定 1325nm，2310nm，3334nm第29页，讲稿共78张，创作于星期二第一法：第一法：测定测定维生素维生素A醋酸酯醋酸酯的方法的方法等波长差等波长差法法基本思想基本思想：先判断杂质的干扰：先判断杂质的干扰是否影响测定是否影响测定及及影影响程度响程度（五点波长法），再决定用哪个吸收度进行（五点波长法），再决定用哪
18、个吸收度进行含量计算。含量计算。1.取维生素取维生素A醋酸酯，精密称定，加环己烷制成每醋酸酯，精密称定，加环己烷制成每1m1中含中含915单位的溶液。然后在单位的溶液。然后在300、316、328、340、360nm五个波长处分别测定吸收值。五个波长处分别测定吸收值。合成 Vit A天然鱼肝油测定方法测定方法中国药典中国药典第30页，讲稿共78张，创作于星期二2.A值的选择法值的选择法:按中国药典附录按中国药典附录 J维生素维生素A测定法的规定。测定法的规定。计算各波长下的吸收度与计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸收度的波长下的吸收度的比值。并确定最大吸收波长比值。并确定最大吸收波长(
19、应为应为328nm)。五个吸收度比值分别与规定的五个吸收度比值分别与规定的吸收度比值相减，即得到五个差吸收度比值相减，即得到五个差值。判断每个差值是否超过规定值。判断每个差值是否超过规定的的0.02。第31页，讲稿共78张，创作于星期二1.理想状况理想状况:杂质几乎没有形成干扰。杂质几乎没有形成干扰。判断标准：最大吸收波长在判断标准：最大吸收波长在326329nm之间，计算之间，计算吸收度比值吸收度比值Ai/A328，并与规定值相减，差值不超过并与规定值相减，差值不超过0.02 A值选择：选择值选择：选择A328计算含量计算含量2.非理想状况非理想状况:杂质有干扰。杂质有干扰。判断标准判断标准
20、（符合以下两点之一）符合以下两点之一）(1)最大吸收波长在最大吸收波长在326329nm之间，之间，5个波长下个波长下的的Ai/A328与规定值之差有一个或几个超过与规定值之差有一个或几个超过0.02；(2)最大吸收波长不在最大吸收波长不在326329nm之间之间。第32页，讲稿共78张，创作于星期二A值选择：值选择：先计算出：先计算出：再计算出再计算出 再根据以下再根据以下三种三种不同情况选择不同情况选择（1）若所得的数值在）若所得的数值在3%，表明杂质干扰很小，表明杂质干扰很小，则仍用则仍用A328计算含量；计算含量；（2）若若所所得得的的数数值值在在-15%-3%之之间间，表表明明杂杂质
21、质有一定的干扰，则需用有一定的干扰，则需用A328（校正）计算含量；校正）计算含量；第33页，讲稿共78张，创作于星期二如何计算如何计算标示量的百分含量标示量的百分含量？第二步：第二步：求求第三步：第三步：求效价（求效价（IU/g）：）：效价系指每克供试品中效价系指每克供试品中所含维生素所含维生素A的国际单位数。的国际单位数。如何换算成效价（如何换算成效价（IU/g）？）？换算因子：定义为每换算因子：定义为每1个个 数值所相当的效数值所相当的效价。价。（C单位为单位为g/100ml）VitA的标示量的标示量为为效价！效价！第34页，讲稿共78张，创作于星期二1g维生素维生素A醋酸酯相当的国际单
22、位数为：醋酸酯相当的国际单位数为：效价效价IU/g=E 1cm1%1900(溶剂溶剂:环己烷环己烷)第35页，讲稿共78张，创作于星期二1g维生素维生素A醇相当的国际单位数为：醇相当的国际单位数为：效价效价IU/g=E 1cm1%1830(溶剂溶剂:环己烷环己烷)第36页，讲稿共78张，创作于星期二第四步：求标示量第四步：求标示量标示量标示量样品标签上注明的每胶丸含有的维生样品标签上注明的每胶丸含有的维生素素A醋酸酯的国际单位数醋酸酯的国际单位数(效价，非含量！效价，非含量！)1.求维生素求维生素A醋酸酯胶丸为标示量的百分含量醋酸酯胶丸为标示量的百分含量:IU/丸丸 标示量标示量%=-100%
23、标示量标示量IU/丸丸=IU/g g/丸丸=IU/g W IU/g W 标示量标示量%=-100%标示量标示量第37页，讲稿共78张，创作于星期二第38页，讲稿共78张，创作于星期二或者：或者：A A直接测得的直接测得的A A328328或校正后的或校正后的A A328328 (校正校正)；D D供试品的稀释倍数；供试品的稀释倍数；19001900换算因数；换算因数；W W胶丸的平均内容物重量，胶丸的平均内容物重量，g g；W W称取供试品取量，称取供试品取量，g g；l比色池厚度，比色池厚度，cmcm；标示量标示量样品标签上注明的每胶九含有的维生素样品标签上注明的每胶九含有的维生素A A醋酸
24、酯醋酸酯的国际单位数。的国际单位数。第39页，讲稿共78张，创作于星期二（3 3）若）若所得的数值所得的数值小于小于-15%-15%或大于或大于+3%+3%，或最大，或最大吸收波长不在吸收波长不在326326329329nmnm之间，表明杂质干扰很大，之间，表明杂质干扰很大，已经不适宜再用本法测定。则应采用已经不适宜再用本法测定。则应采用第二法（皂化法）第二法（皂化法）测定。测定。图示：图示：用第二法测定 用A328（校正）计算 用A328计算 用第二法测定-15%-3%0+3%第40页，讲稿共78张，创作于星期二第二法：中国药典第二法：中国药典适用于维生素适用于维生素A醇（含杂质较多醇（含杂
25、质较多的维生素的维生素A）的方法）的方法等吸收比法、等吸收比法、6/7A法法 第一法无法消除杂质干扰时用此法第一法无法消除杂质干扰时用此法第41页，讲稿共78张，创作于星期二2.A值的选择法值的选择法:按中国药典附录按中国药典附录 J维生素维生素A测定法测定法的规定。的规定。判断判断 max是否在是否在323327nm之间之间 计算计算是是否否取未皂化样品采用取未皂化样品采用色谱色谱法纯化法纯化后再测定后再测定第42页，讲稿共78张，创作于星期二 判断判断 A300/A325 是否大于是否大于0.73是是否否取未皂化样品采取未皂化样品采用用色谱法纯化色谱法纯化后后再测定再测定 计算计算A325
26、(校正校正)第43页，讲稿共78张，创作于星期二03%3%第44页，讲稿共78张，创作于星期二如何计算含量如何计算含量？1.求求E 1cm1%E 1cm1%=A/CL（C单位为单位为g/100ml）2.求效价（求效价（IU/g）：）：IU/g=E 1cm1%18303.求维生素求维生素A醇为标示量的百分含量醇为标示量的百分含量:IU/丸丸 标示量标示量%=-100%标示量标示量IU/丸丸=IU/g g/丸丸=IU/g W IU/g W 标示量标示量%=-100%标示量标示量第45页，讲稿共78张，创作于星期二A A直接测得的直接测得的A A328328或校正后的或校正后的A A328328 (
27、校正校正)；18301830换算因子；换算因子；D D供试品的稀释倍数；供试品的稀释倍数；W W胶丸的平均内容物重量，胶丸的平均内容物重量，g g；W W称取供试品取量，称取供试品取量，g g；l比色池厚度，比色池厚度，cmcm；标示量标示量样品标签上注明的每胶九含有的维生素样品标签上注明的每胶九含有的维生素A A醋酸酯醋酸酯的国际单位数。的国际单位数。第46页，讲稿共78张，创作于星期二 关于三点校正法测定维生素关于三点校正法测定维生素A 含含量方法的讨论量方法的讨论1）维生素）维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来：法（即代数
28、法）推导而来：维生素维生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或（几何法或6/7定位法）推导而来。（了解）定位法）推导而来。（了解）第47页，讲稿共78张，创作于星期二 关于三点校正法测定维生素关于三点校正法测定维生素A 含含量方法的讨论量方法的讨论 2）在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定）在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大外，其余两点均在最大吸收峰的两侧吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此：精度不准确时，会产生较大误差。因此：在测定前务必要在测定
29、前务必要校正波长校正波长，（ChP，Appendix IV A）可用全反式维生素可用全反式维生素A进行测定，进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对仪器波长是相符合，以进一步核对仪器波长是否准确。否准确。测定的样品应不得少于测定的样品应不得少于两份两份。第48页，讲稿共78张，创作于星期二 关于三点校正法测定维生素关于三点校正法测定维生素A 含含量方法的讨论量方法的讨论3）皂化后提取应避免强烈振动以免引起乳化。皂化的全部过）皂化后提取应避免强烈振动以免引起乳化。皂化的全部过程应连氮并应在最短时间内完成。标准品及样品的处理，程应连氮并应在最短时间
30、内完成。标准品及样品的处理，应应避免接触金属器皿避免接触金属器皿。4）不适宜用第一法测定的维生素）不适宜用第一法测定的维生素A醋酸酯。醋酸酯。改用第二法（皂改用第二法（皂化法）测定后化法）测定后。其换算因子也相应改为维生素。其换算因子也相应改为维生素A醇的换算因子醇的换算因子1830，计算时必需注意！计算时必需注意！5）中国中国药药典收典收载载的的维维生素生素A胶丸、胶丸、维维生素生素AD滴滴剂剂、维维生生素素AD胶丸胶丸等均采用三点校正法等均采用三点校正法测测定。定。第49页，讲稿共78张，创作于星期二应用示例一VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品精密称取本品(规格规格10,000
31、VitAIU/10,000VitAIU/丸丸)装量差异项下（平均装量装量差异项下（平均装量0.07985g/0.07985g/丸）的内容物丸）的内容物 0.1287g 0.1287g 至至50ml50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取摇匀；精密量取2.0ml2.0ml，置另一，置另一50 ml50 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm328nm，并在下列波长处测，并在下列波长处测得吸收度如下，计算得吸收度如下，计算Vit AVit A的标示量
32、百分含量。的标示量百分含量。第50页，讲稿共78张，创作于星期二A=A328校正第51页，讲稿共78张，创作于星期二第52页，讲稿共78张，创作于星期二维生素维生素A的的HPLC法（请自学）法（请自学）色谱条件色谱条件正相色谱法！正相色谱法！色谱柱：硅胶柱色谱柱：硅胶柱流动相：正己烷流动相：正己烷-异丙醇（异丙醇（997:3)997:3)检测波长检测波长 325 nm325 nm外标法：外标法：Vit A Vit A 酯酯第53页，讲稿共78张，创作于星期二维生素维生素A的三氯化锑比色法的三氯化锑比色法原理原理：维生素：维生素A与三氯化锑的无水氯仿溶液作与三氯化锑的无水氯仿溶液作用，产生不稳定
33、的蓝色，用，产生不稳定的蓝色，max 618nm620nm，符合，符合Beer定律。定律。方法方法：标准曲线法。：标准曲线法。特点特点：1.需在需在510秒钟内测定。呈色不稳定秒钟内测定。呈色不稳定 2.受温度影响很大受温度影响很大3.需要无水条件需要无水条件4、三氯化锑有腐蚀性、三氯化锑有腐蚀性第54页，讲稿共78张，创作于星期二5.5.非专属反应；非专属反应；如新维生素如新维生素A A 、去水维生素、去水维生素A A及胡萝及胡萝卜素等物质，均与三氯化锑均显蓝色，故在测定卜素等物质，均与三氯化锑均显蓝色，故在测定天然维生素天然维生素A A时，测定值往往偏高时，测定值往往偏高.6.6.简易，操
34、作迅速。目前仍为食品或饲料中维生素简易，操作迅速。目前仍为食品或饲料中维生素A A测定常用的方法。测定常用的方法。第55页，讲稿共78张，创作于星期二第二节第二节 水溶性维生素水溶性维生素维生素维生素B1的分析的分析VB1又称盐酸硫胺素，是是由一个噻唑环和氨基嘧啶环通过亚甲基连接而成的季铵化合物。在生物体内主要以焦磷酸硫胺素（TPP）形式存在。VB1和糖代谢关系密切，当缺乏时造成丙酮酸积累易引起神经炎和脚气病。第56页，讲稿共78张，创作于星期二第57页，讲稿共78张，创作于星期二一、结构及性质 结构特点：结构特点：1氨氨基基嘧嘧啶啶环环和和噻噻唑唑环环：具具有有硫硫色色素素反反应应，此此反反
35、应应专专属属性性强强，用用于于鉴别和含量测定。鉴别和含量测定。2.母核具母核具N杂环，有弱碱性，杂环，有弱碱性，1）可可以以与与生生物物碱碱沉沉淀淀剂剂反反应应，产产生生沉沉淀淀，用用于于鉴鉴别别与与含含量量测测定。定。2）可以在冰醋酸中与高氯酸定量反应，用于含量测定。）可以在冰醋酸中与高氯酸定量反应，用于含量测定。3共轭体系共轭体系：具紫外吸收，用于含量测定。：具紫外吸收，用于含量测定。4盐酸根：盐酸根：呈氯化物的反应，用于鉴别。呈氯化物的反应，用于鉴别。第58页，讲稿共78张，创作于星期二一、结构及性质一、结构及性质 理化性质理化性质(1)溶解性溶解性 本品在水中易溶，水溶液显本品在水中易
36、溶，水溶液显酸性酸性反应。反应。在乙醇中微溶，在乙醚中不溶在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。(2)具有紫外吸收具有紫外吸收 本品约本品约12.5 gm1盐酸溶液盐酸溶液(91000)，max=246nm，百分吸收系数为，百分吸收系数为406436。(3)在碱性中遇氧化剂，如铁氰化钾，可被氧化为在碱性中遇氧化剂，如铁氰化钾，可被氧化为具有荧光的具有荧光的硫色素硫色素，后者溶于正丁醇中呈，后者溶于正丁醇中呈蓝色荧光蓝色荧光。第59页，讲稿共78张，创作于星期二(4)分子中含有两个杂环分子中含有两个杂环(嘧啶环和噻唑环嘧啶环和噻唑环)，故可与某，故可与某些生物碱沉淀试剂些生物碱沉淀试剂(如碘化汞钾、三硝基
37、酚、碘溶液、如碘化汞钾、三硝基酚、碘溶液、硅钨酸等硅钨酸等)反应生成组成恒定的沉淀。反应生成组成恒定的沉淀。(5)水溶液呈氯化物的反应，用于鉴别。水溶液呈氯化物的反应，用于鉴别。(6)干燥品很稳定，酸性水溶液稳定，在碱性溶液干燥品很稳定，酸性水溶液稳定，在碱性溶液中，噻唑环开环，迅速分解。中，噻唑环开环，迅速分解。第60页，讲稿共78张，创作于星期二二、鉴别试验 (一一)硫色素反应硫色素反应硫色素反应为维生素硫色素反应为维生素B1B1所特有所特有，中国药典以此进行，中国药典以此进行鉴别。鉴别。(1)原理原理(2)方法方法 取本品约取本品约5mg，加氢氧化钠试液加氢氧化钠试液2.5m1溶解后，溶
38、解后，加加铁氰化钾铁氰化钾试液试液0.5m1与与正丁醇正丁醇5m1，强力振摇强力振摇2min，放放置分层，上面的醇层显强烈的置分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光蓝色荧光。加酸使成酸性，荧。加酸使成酸性，荧光即消失。再加碱使成碱性，荧光又显出。光即消失。再加碱使成碱性，荧光又显出。第61页，讲稿共78张，创作于星期二第62页，讲稿共78张，创作于星期二(二二)沉淀反应沉淀反应(1)(2)(3)(4)与苦酮酸作用形成不溶于水的扇形两头弯成螺与苦酮酸作用形成不溶于水的扇形两头弯成螺旋状的白色结晶。旋状的白色结晶。其他维生素与苦酮酸不发生反应！其他维生素与苦酮酸不发生反应！嘧啶环嘧啶环 伯氨伯氨噻唑环噻
39、唑环 季铵季铵H+H+第63页，讲稿共78张，创作于星期二（三）加碱分解后与醋酸铅反应（三）加碱分解后与醋酸铅反应 水溶液加醋醋铅试液和氢氧化钠试液并加水溶液加醋醋铅试液和氢氧化钠试液并加热，溶液由黄色热，溶液由黄色棕色棕色最后生成黑色沉最后生成黑色沉淀。淀。苛性碱分解维生素苛性碱分解维生素B1，产生的产生的硫化钠与醋硫化钠与醋酸铅作用生成黑色硫化铅沉淀。酸铅作用生成黑色硫化铅沉淀。S元素反应元素反应第64页，讲稿共78张，创作于星期二（四）水溶液显氯化物的特殊反应四）水溶液显氯化物的特殊反应Cl-反应反应第65页，讲稿共78张，创作于星期二三、含量测定 方法种类方法种类：硅钨酸重量法、硅钨酸
40、重量法、BP（1998）硫色素荧光法、硫色素荧光法、USP（24）非水溶液滴定法、非水溶液滴定法、（Chp 测定维生素测定维生素B1原料药）原料药）紫外分光光度法紫外分光光度法。（Chp 测定维生素测定维生素B1制剂）制剂）第66页，讲稿共78张，创作于星期二 1硅钨酸重量法简介硅钨酸重量法简介BP（2000）、）、Chp（1990）方法方法维生素维生素B1在酸性溶液中与硅钨酸作用产生沉淀，根在酸性溶液中与硅钨酸作用产生沉淀，根据沉淀的重量即可计算其含量。据沉淀的重量即可计算其含量。特点特点：原理简单，但操作繁琐费时，原理简单，但操作繁琐费时，试剂易得，试剂易得，结果较为准确。结果较为准确。M
41、W：3479.22第67页，讲稿共78张，创作于星期二2.硫色素荧光法硫色素荧光法 p222USP（24）方法方法原理原理:盐酸硫胺在碱性溶液中，被氧化剂（如铁盐酸硫胺在碱性溶液中，被氧化剂（如铁氰化钾）氧化生成硫色素，用异丁醇提取，氰化钾）氧化生成硫色素，用异丁醇提取，在紫外光照射下呈现蓝色荧光，与已知浓在紫外光照射下呈现蓝色荧光，与已知浓度的标准品溶液所得荧光进行比较或测定度的标准品溶液所得荧光进行比较或测定荧光强度，可求得供试品中荧光强度，可求得供试品中B1B1的含量。的含量。第68页，讲稿共78张，创作于星期二方法方法：教材：教材P2601.铁氰化钾溶液要新配铁氰化钾溶液要新配2.2.
42、标准品、供试品逐步定量稀释标准品、供试品逐步定量稀释3.3.标准品、供试品各测定两份以上标准品、供试品各测定两份以上,取均取均值定量。并与空白试验校正。值定量。并与空白试验校正。讨论讨论1.1.硫色素反应为维生素硫色素反应为维生素B1B1所特有，为高专属性反应。适用于维所特有，为高专属性反应。适用于维生素生素B1B1制剂的含量测定制剂的含量测定.2.2.反应非定量完成，但在一定条件下，形成的硫色素与维生素反应非定量完成，但在一定条件下，形成的硫色素与维生素B1B1浓度成正比浓度成正比.3.3.操作繁琐费时操作繁琐费时,且干扰荧光测定的因素较多且干扰荧光测定的因素较多.第69页，讲稿共78张，创
43、作于星期二 3.非水溶液滴定法：非水溶液滴定法：（Chp2000 测定维生素测定维生素B1原料药的方法）原料药的方法）原理原理:维生素维生素B1分子中有两碱性分子中有两碱性基团，在非水溶液中均可与基团，在非水溶液中均可与高氯酸作用。高氯酸作用。根据消耗高氯酸的量可计算维生素根据消耗高氯酸的量可计算维生素B1的量的量第70页，讲稿共78张，创作于星期二方法方法：教材：教材P220221摩尔比为摩尔比为1 2，滴定度为，滴定度为16.86mg/ml喹那啶红亚甲蓝喹那啶红亚甲蓝 （紫红紫红天蓝天蓝）第71页，讲稿共78张，创作于星期二讨论讨论：教材：教材P221 1.加入醋酸汞的作用加入醋酸汞的作用
44、:2.反应摩尔比为反应摩尔比为1 2，分，分子量为子量为337.27，滴定度为，滴定度为16.86mg/ml。3.也可以用电位法指示终也可以用电位法指示终点点.(更精确更精确)第72页，讲稿共78张，创作于星期二 4紫外分光光度法：紫外分光光度法：（Chp2000 测定维生素测定维生素B1片剂及注射剂）片剂及注射剂）原理原理 维生素维生素B1分子中具有共轭双键结构，故具紫外分子中具有共轭双键结构，故具紫外吸收，在一定波长下测定吸收度即可定量。吸收，在一定波长下测定吸收度即可定量。1、0.1M盐酸盐酸2、水、水3、PH=7磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液4、乙醇、乙醇第73页，讲稿共78张，创作于星期二
45、方法方法:（维生素（维生素B1片剂）片剂）取本品取本品20片，片，精密称定精密称定，研细，研细，精密称取精密称取适量适量(约相约相当于维生素当于维生素B125mg)，置置100ml量瓶中，加量瓶中，加盐酸溶液盐酸溶液(91000)约约70ml，振摇振摇15min，使维生素使维生素B1溶解，溶解，加加盐酸溶液盐酸溶液(9 1000)稀释至刻度，摇匀，稀释至刻度，摇匀，定量滤定量滤过过后，再用后，再用盐酸溶液盐酸溶液(9 1000)稀释稀释20倍。在倍。在246nm波长处测定吸收度，按波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OSHCl的的吸收系数吸收系数(E 1cm1%)为为421计算，即得。计算，即得。第74页，讲稿共78张，创作于星期二片剂、注射剂片剂、注射剂=421（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=A=ECL规格规格g/片片gChP第75页，讲稿共78张，创作于星期二（每（每ml）相当于标示量的相当于标示量的%=规格规格g/mlml第76页，讲稿共78张，创作于星期二%式中，式中，A吸收度；吸收度；D供试品稀释倍数；供试品稀释倍数；W平均片重；平均片重；W称取的片粉重。称取的片粉重。维生素维生素B1注射液（自学）注射液（自学）第77页，讲稿共78张，创作于星期二2022/9/16感感谢谢大大家家观观看看第78页，讲稿共78张，创作于星期二