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1、实验十 细胞的凝集反应,【实验目的】 学习研究细胞凝集反应的方法，了解细胞发生凝集反应的原因。 【实验原理】 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。 细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。 凝集素是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。凝集素与糖分子的结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。,Lectin(凝集素)：cell synthesizes and secret
2、es the proteins which can recognize and bind the saccharides.,抗原-抗体反应也可介导细胞的凝集反应。,【实验用品】 一、仪器用具 普通显微镜，离心机，组织捣碎机，电子天平，冰箱，玻璃仪器干燥器，超声波清洗机，滴管，离心管，刻度试管，移液管，试管架，刀片，镊子，载玻片，盖玻片，吸水纸，擦镜纸，洗瓶，烧杯，容量瓶，细口瓶，广口瓶，一次性注射器，一次性采血针，棉签，牙签，记号笔。 二、材料 土豆块茎。 1%鸡红细胞悬液：自健康鸡静脉采血（加肝素抗凝），取0.5mL血液加至4.5mL生理盐水中，2 000 rmin离心10min，去掉上清液
3、，再加生理盐水反复洗涤3次，最后配成1%悬液。暂时不用时，可保存红细胞沉淀于冰箱中，用前洗涤后配制成1%悬液。 三、试剂 肝素，植物血球凝集素（PHA），生理盐水，A型标准血清，B型标准血清，75%酒精。 PBS缓冲液：称取NaCl7.2g，Na2HPO4 1.48g，KH2PO4 0.43g，加蒸馏水，定容至 1 000ml，调pH值到7.2。,【方法与步骤】 一、细胞凝集试验 （一）土豆块茎 1称取土豆去皮块茎 2g，加少许PBS缓冲液后置于捣碎机中成匀浆，最终加到 10ml PBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。 2用滴管吸取土豆凝集素和 1红细胞悬液各一滴于载玻片
4、上，充分混匀，静置 20min后于低倍显微镜下观察细胞凝集现象。 3. PBS液加 2血细胞悬液作对照实验。,血红细胞凝集,（二）植物血球凝集素（PHA） 1取试管8支试管排在试管架上，第1管加入生理盐水 0.8mL，其余各管加入生理盐水0.5mL。然后在第1管内加入PHA0.2mL，混匀后，吸出0.5mL加入到第2管中混匀，再吸出0.5mL加入到第3管中，以此类推。第8管为对照，加入0.5mL生理盐水。 2. 每管加入1%鸡红细胞悬液23滴，充分摇匀。室温下静置30 min。 3. 观察结果。轻轻取出试管观察底部，凡凝集者，在管底可看到麻点态的血细胞凝集物。根据凝集程度可用+，+，+，+，等表示。如果血细胞均匀的沉于试管底部中央则为阴性反应，以稀释倍数最小的阴性反应管的前一管的稀释倍数为凝集素的凝集效价。,二、血红细胞凝集及ABO血型鉴定 1取一载玻片檫干净，用记号笔在玻片左角写A，右角写B，中间写受检者姓名。 2在A侧加1滴A型标准血清（稍带蓝色），在B侧加1滴B型标准血清（稍带黄色）。 3用75%酒精棉球消毒一个手指尖，用已消毒的刺血针刺破手指尖皮肤，待血液流出后，用牙签两端各蘸取一点血液，然后分别加到中混匀。 4在室温下放置510 min，观察是否有凝集现象，判断结果。,【作业】 l简图表示血细胞凝集原理。 2. 观察记录植物血球凝集素的凝集结果，并进行分析。,