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1、江苏高考 基因工程专题赏析,请根据以上图表回答下列问题。 （1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是 _。 （2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？_。 （3）图1步骤所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？ 。 （4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤转基因所用的细菌B通常为 _。,（2008江苏)将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物
2、获得免疫力。以上是与植物疫苗制备过程相关的图和表。,（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。 采用EcoR和Pst酶切，得到_种DNA片断。 采用EcoR和Sma酶切，得到_种DNA片断。,答案：（1）耐高温 2）引物对B （3）否 （4）农杆菌 （5）2 1,（2009江苏)苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。上图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。,(1)将图中的DNA用Hind、BamH完全酶切后，反应管中有_种DNA片
3、段。 (2)图中表示 Hind与BamH酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得_种重组质粒；如果换用Bst l与BamH酶切，目的基因与质粒连接后可获得_种重组质粒。 (3)目的基因插人质粒后 ，不能影响质粒的_。 (4)图中的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的TDNA导人植物细胞，并防止植物细胞中_对TDNA的降解。,(5)已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞_。 (6)生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的_基因频率的
4、增长速率。,34(7分)(1)4 (2)2 1 (3)复制 (4)DNA水解酶 (5)表面无相应的特异性受体(6)抗性,（2010江苏)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：,(1)一个图1所示的质粒分子经Sma l切割前后，分别含有_个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的Sma l酶切位点越多，质粒的热稳定性越 _。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma l切割，原因是_。 (4)与只使用EcoR I相比较，使用BamH l和Hind Hl两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止
5、 _ 。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导人丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 _的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。,27(8分)(1)0、2(2)高 (3)Sma l会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 (4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化(5)DNA连接 (6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞 (7)蔗糖为唯一含碳营养物质,（2012江苏)图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，
6、图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp 、BamH 、Mbo 、Sma 4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。请回答下列问题：,（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由连接。 （2）若用限制酶Sma 完全切割图1中DNA片段，产生的末端是末端，其产物长度为。 （3）若图1中虚线方框内的碱基对被TA碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma 完全切割，产物中共有种不同DNA片段。 （4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限
7、制酶是。 在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加的培养基进行培养。 经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是。,答案：（1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 （2）平537bp、790bp、661bp （3）4（4）BamH I 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接,（2013江苏多选）小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因（目的基因）后再重组表达。下列相关叙述正确的是 A.设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列 B.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 C.PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶 D.一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞 （2014江苏多选）下列关于基因工程技术的叙述错误的是 A.切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6 个核苷酸序列 B.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应 C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达,