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1、高考生物二轮专题专题八第讲基因工程和细胞工程第1页，此课件共33页哦限制酶限制酶载体载体基因表达载体的构建基因表达载体的构建目的基因的检测和鉴定目的基因的检测和鉴定转基因动物转基因动物基因治疗基因治疗基因基因可产生自然界没有的蛋可产生自然界没有的蛋白质白质细胞的全能性细胞的全能性植物体细胞杂交植物体细胞杂交作物新品种的培育作物新品种的培育细胞增殖细胞增殖动物细胞核的全能性动物细胞核的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性给小鼠注射特定抗原给小鼠注射特定抗原产生专一抗体的杂交瘤细胞产生专一抗体的杂交瘤细胞网络构建网络构建第2页，此课件共33页哦第3页，此课件共33页哦第4页，此课件共33页哦目的基因
2、的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定类型类型 步骤步骤检测内容检测内容方法方法结果显示结果显示分子分子检测检测第一步第一步目的基因是否目的基因是否进入受体细胞进入受体细胞 DNA分子杂分子杂交交(DNA和和DNA之间之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带第二步第二步目的基因是否目的基因是否转录出转录出mRNA分子杂交技术分子杂交技术(DNA和和mRNA之间之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带第三步第三步目的基因是否目的基因是否翻译出蛋白质翻译出蛋白质抗原抗原抗体杂交抗体杂交是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带第5页，此课件共33页哦个体个体水平水平鉴定鉴定做抗虫或抗病的接种实
3、验，以确定是做抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能是否相同以确定功能是否相同第6页，此课件共33页哦第7页，此课件共33页哦第8页，此课件共33页哦动动物物细细胞培养和植物胞培养和植物组织组织培养比培养比较较项项目目动动物物细细胞培养胞培养植物植物组织组织培养培养前前处处理理培养基培养基成分成分培养基培养基状状态态无菌；用胰蛋白无菌；用胰蛋白酶酶处处理，使理，使组织组织细细胞相互分散开胞相互分散开无菌、离体无菌、离体葡萄糖、氨基酸、无机葡萄糖、氨基酸、无机盐盐
4、、促生、促生长长因子、微量元素、因子、微量元素、动动物血清等物血清等矿质矿质元素、蔗糖、元素、蔗糖、维维生素、植物激生素、植物激素等素等液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基第9页，此课件共33页哦项项目目动动物物细细胞培养胞培养植物植物组织组织培养培养过过程程能否培养能否培养成个体成个体应应用用举举例例动动物胚胎或出生不久的幼物胚胎或出生不久的幼龄龄动动物的器官或物的器官或组织组织原代原代培养培养传传代培养代培养细细胞群胞群不能不能能能大大规规模生模生产产有重要价有重要价值值的的生物制品，如病毒疫苗、生物制品，如病毒疫苗、干干扰扰素、素、单单克隆抗体等；克隆抗体等；皮肤移植；皮肤移植；检测
5、检测有毒物有毒物质质的毒性等的毒性等快速繁殖、培育无病快速繁殖、培育无病毒植株；生毒植株；生产药产药物；物；制造人工种子；培育制造人工种子；培育转转基因作物等基因作物等第10页，此课件共33页哦特特别别提提醒醒：(1)两两种种技技术术手手段段培培养养过过程程中中都都进进行行有有丝丝分分裂裂，都都是是无无性性繁繁殖殖，都可称都可称为为克隆，都不涉及减数分裂；克隆，都不涉及减数分裂；(2)均均为为无菌操作，都需要适宜的温度、无菌操作，都需要适宜的温度、pH等条件。等条件。第11页，此课件共33页哦植物体植物体细细胞胞杂杂交和交和动动物物细细胞融合胞融合项项目目植物体植物体细细胞胞杂杂交交动动物物细
6、细胞融合胞融合(单单克隆抗体的制克隆抗体的制备备)理理论论基基础础(原理原理)融合前融合前处处理理促融促融细细胞膜的流胞膜的流动动性、植物性、植物细细胞的全能性胞的全能性细细胞膜的流胞膜的流动动性、性、细细胞增殖胞增殖酶酶解法去除解法去除细细胞壁胞壁(纤维纤维素素酶酶、果胶、果胶酶酶等等)注射特定抗原的免疫小鼠，注射特定抗原的免疫小鼠，获获取取B淋巴淋巴细细胞胞物理法：离心、振物理法：离心、振动动、电电激等；激等；化学法：聚乙二醇化学法：聚乙二醇(PEG)等等物化法、化学法：与促物化法、化学法：与促进进植物植物细细胞融合的方法相胞融合的方法相同；同；生物法：生物法：灭灭活的病活的病毒毒第12页
7、，此课件共33页哦项项目目植物体植物体细细胞胞杂杂交交动动物物细细胞融合胞融合(单单克隆克隆抗体的制抗体的制备备)过过程程用途用途第一步：原生第一步：原生质质体的制体的制备备；第；第二步：原生二步：原生质质体的融合；第三体的融合；第三步：步：杂杂种种细细胞的胞的筛选筛选与培养；与培养；第四步：第四步：杂杂种植株的种植株的诱导诱导与与鉴鉴定定第一步：第一步：细细胞培养；第胞培养；第二步：二步：诱导细诱导细胞融合；胞融合；第三步：某种第三步：某种细细胞胞选择选择；第四步：第四步：杂杂种种细细胞克隆胞克隆与与纯纯化化克服克服远缘杂远缘杂交不交不亲亲和的和的障碍，大大障碍，大大扩扩展了展了杂杂交交亲亲
8、本的本的组组合范合范围围作作为诊为诊断断试剂试剂；用于用于治治疗疗疾病和运疾病和运载药载药物物,如如“生物生物导弹导弹”第13页，此课件共33页哦重点提炼细胞工程的几个流程图比较细胞工程的几个流程图比较细胞工程技术细胞工程技术技术过程图示技术过程图示植物组织培养植物组织培养第14页，此课件共33页哦动物细动物细胞培养胞培养植物体植物体细细胞杂交胞杂交第15页，此课件共33页哦动物细动物细胞胞的融合的融合第16页，此课件共33页哦核移植核移植第17页，此课件共33页哦单克隆单克隆抗体的抗体的制备制备第18页，此课件共33页哦动物细胞培养的特殊条件归纳(1)胰胰蛋蛋白白酶酶的的使使用用：首首先先用
9、用胰胰蛋蛋白白酶酶处处理理动动物物的的器器官官或或组组织织，以以制制备备单单细细胞胞悬悬液液；培培养养过过程程中中发发生生接接触触抑抑制制时时，同同样样需需要要用用胰胰蛋蛋白酶使细胞分散开。白酶使细胞分散开。(2)避免杂菌污染的措施：培养液及培养用具灭菌处理；加入一定量的抗生避免杂菌污染的措施：培养液及培养用具灭菌处理；加入一定量的抗生素；定期更换培养液。素；定期更换培养液。(3)特殊的营养条件特殊的营养条件液体培养基。液体培养基。加入动物血清、血浆等。加入动物血清、血浆等。通入氧气以满足代谢的需要。通入氧气以满足代谢的需要。通入二氧化碳以维持培养液的通入二氧化碳以维持培养液的pH。第19页，
10、此课件共33页哦动物细胞融合与单克隆抗体制备的归纳(1)制制备备单单克克隆隆抗抗体体时时选选用用一一种种抗抗原原处处理理的的B淋淋巴巴细细胞胞与与骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞进进行行细细胞胞融融合合，产产生生杂杂交交瘤瘤细细胞胞，杂杂交交瘤瘤细细胞胞兼兼有有两两个个亲亲本本细细胞胞的的特特性性在在体体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。(2)进行动物细胞的诱导融合，形成的杂种细胞有三种：进行动物细胞的诱导融合，形成的杂种细胞有三种：AA型、型、BB型、型、AB型。只有型。只有AB型才是我们所需要的杂种细胞，所以需要用选择性培养基型
11、才是我们所需要的杂种细胞，所以需要用选择性培养基进行筛选。进行筛选。(3)相相比比植植物物体体细细胞胞杂杂交交，动动物物细细胞胞融融合合特特有有的的诱诱导导方方法法是是用用灭灭活活的的病病毒毒处处理理，其其他他物物理理、化化学学诱诱导导融融合合的的手手段段与与植植物物体体细细胞胞杂杂交交过过程程中中原原生质体诱导融合的方法相同。生质体诱导融合的方法相同。第20页，此课件共33页哦1.携携带带链链霉霉素素抗抗性性基基因因受受体体菌菌的的筛筛选选必必须须通通过过分分子子检检测测(2014天津，天津，4A)()2.转转基基因因抗抗虫虫棉棉植植株株抗抗虫虫效效果果的的鉴鉴定定必必须须通通过过分分子子检
12、检测测(2014天津，天津，4C)()3.一一种种限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶只只能能识识别别一一种种特特定定的的脱脱氧氧核核苷苷酸酸序序列列(2007全国全国，4A)()4.用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸(2010浙江，浙江，2A)()错混诊断第21页，此课件共33页哦5.每每个个重重组组质质粒粒至至少少含含一一个个限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶识识别别位位点点(2011浙江，浙江，6B)()6.自自然然界界中中天天然然存存在在的的噬噬菌菌体体自自行行感感染染细细菌菌后后其其DNA整整合合到到细细菌菌DNA上上，属属于于基基因因工工程程
13、(2010大大纲纲全全国国，5D)()7.转转抗抗虫虫基基因因的的植植物物，不不会会导导致致昆昆虫虫群群体体抗抗性性基基因因频频率增加率增加(2010江苏，江苏，18B)()8.重重组组质质粒粒与与探探针针能能进进行行分分子子杂杂交交是是因因为为DNA分分子子脱脱氧核糖和磷酸交替连接氧核糖和磷酸交替连接(2013安徽，安徽，6C)()第22页，此课件共33页哦11.产产生生抗抗人人白白细细胞胞介介素素8抗抗体体的的杂杂交交瘤瘤细细胞胞的的筛筛选选必必须须通通过过分分子子检检测测(2014天津，天津，4B)()12.21三体综合征的诊断必须通过分子检测三体综合征的诊断必须通过分子检测(2014天
14、津，天津，4D)()13.培培育育草草莓莓脱脱毒毒苗苗所所采采用用的的主主要要技技术术是是组组织织培培养养(2012广广东东，2A)()14.去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理(2008全国全国，5B)()9.应应用用DNA探探针针技技术术，可可以以检检测测转转基基因因抗抗冻冻番番茄茄植植株株中中目目的的基基因因的的存存在在及及其其完完全表达全表达(2011四川，四川，5D)()10.动物的生长激素基因转入植物后不能表达动物的生长激素基因转入植物后不能表达(2010江苏，江苏，18C)()第23页，此课件共33页哦1
15、5.培培养养保保留留接接触触抑抑制制的的细细胞胞在在培培养养瓶瓶壁壁上上可可形形成成多多层层细细胞胞(2010浙江，浙江，4A)()16.动动物物杂杂交交瘤瘤细细胞胞产产生生单单克克隆隆抗抗体体体体现现了了细细胞胞的的全全能能性性(2012江苏，江苏，22C)()17.体体细细胞胞杂杂交交技技术术可可用用于于克克隆隆动动物物和和制制备备单单克克隆隆抗抗体体(2011江江苏，苏，14B)()18.单克隆抗体技术可以用于治疗老年痴呆症单克隆抗体技术可以用于治疗老年痴呆症(2010江苏，江苏，17C)()第24页，此课件共33页哦2008年生物年生物选修选修3现代生物科技专题现代生物科技专题（15分
16、）分）回答下列有关动物细胞培养的问题：回答下列有关动物细胞培养的问题：（1）在动物细胞培养过程中。当贴壁细胞分裂生长到细胞表面）在动物细胞培养过程中。当贴壁细胞分裂生长到细胞表面 时，细胞会停止分裂增殖，这时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的种现象称为细胞的。此时，瓶壁上形成的细胞层数是。此时，瓶壁上形成的细胞层数是。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是来，需要用酶处理，可用的酶是 。（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现现象；但极少数细胞现象；但极少数细胞可以
17、连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成细胞，该种细胞的黏着性细胞，该种细胞的黏着性，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量。（3）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是。（4）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到期的细胞用显微镜进期的细胞用显微镜进行观察。行观察。（5）在细胞培养过程中，通常在）在细胞培养过
18、程中，通常在条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中的活性降低，细胞的活性降低，细胞的速率降低。的速率降低。给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作作进行攻击。进行攻击。相互接触相互接触 接触抑制单层（或一层）胰蛋白酶接触抑制单层（或一层）胰蛋白酶衰老甚至死亡衰老甚至死亡 不死性不死性 降低降低 减少减少由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失由于活细胞的膜具有选择透过性
19、，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色）了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色）中中 冷冻（或超低温、液氮）冷冻（或超低温、液氮）酶酶 新陈代谢新陈代谢 抗原抗原第25页，此课件共33页哦2010年年生物生物选修模块选修模块3：现代生物科技专题：现代生物科技专题(15分分)请回答：请回答：（1）植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技术可以保持品种的）植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技术可以保持品种的 ，繁殖种苗的速度，繁殖种苗的速度 。离体的叶肉细胞在适宜的条件下培养，最终能够形成完整的植株，说
20、明该叶肉细胞具有该植物的全部。离体的叶肉细胞在适宜的条件下培养，最终能够形成完整的植株，说明该叶肉细胞具有该植物的全部 。(2)把试管苗转接到新的培养基上时，需要在超净工作台上进行，其原因是避免把试管苗转接到新的培养基上时，需要在超净工作台上进行，其原因是避免 的污染。的污染。（3）微型繁殖过程中，适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗）微型繁殖过程中，适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗 ，而与，而与 配比适宜时可促进芽的配比适宜时可促进芽的增殖。若要抑制试管苗的生长，促使愈伤组织产生和生长，需要使用的生长调节剂是增殖。若要抑制试管苗的生长，促使愈伤组织产生和生长，需要使用的生长调节剂是 (脱
21、落酸、脱落酸、2，4-D)。（4）将某植物试管苗培养在含不同浓度蔗糖的培养基上）将某植物试管苗培养在含不同浓度蔗糖的培养基上一段时间后，单株鲜重和光合作用强度的变化如图。据图一段时间后，单株鲜重和光合作用强度的变化如图。据图分析，随着培养基中蔗糖浓度的增加，光合作用强度的变分析，随着培养基中蔗糖浓度的增加，光合作用强度的变化趋势是化趋势是 ，单株鲜重的变化趋势是，单株鲜重的变化趋势是 。据图判断。据图判断，培养基中不含蔗糖时，试管苗光合作用产生的有机物的，培养基中不含蔗糖时，试管苗光合作用产生的有机物的量量 (能、不能能、不能)满足自身最佳生长的需要。满足自身最佳生长的需要。(5)据图推测，若
22、要在诱导试管苗生根的过程中提高其光合据图推测，若要在诱导试管苗生根的过程中提高其光合作用能力，应作用能力，应 (降低，增加降低，增加)培养基中蔗糖浓度，以便培养基中蔗糖浓度，以便提高试管苗的自养能力。提高试管苗的自养能力。【答案答案】遗传性、快、遗传信息遗传性、快、遗传信息；（；（2）微生物；（）微生物；（3）下生根、细胞分裂素、）下生根、细胞分裂素、2,4-D；（；（4）逐）逐渐减小渐减小 先增加后下降、不能；（先增加后下降、不能；（5）降低）降低第26页，此课件共33页哦2012年年40.生物生物选修选修3现代生物科技专题现代生物科技专题（15分）分）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
23、根据基因工程的有关知识，回答下列问题：（1）限制性内切酶切割）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有分子后产生的片段，其末端类型有 和和 。（2）质粒运载体用）质粒运载体用EcoR切割后产生的片段如下：切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用除可用EcoR切割外，还可用另一种限制性内切切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是酶切割，该酶必须具有的特点是 。（3）按其来源不同，基因工程所使用的）按其来源不同，基因工程所使用的DNA连接酶有两类，即连接酶有两类，即 DNA连接酶和连接酶和 DN
24、A连接酶。连接酶。（4）反转录作用的模板是）反转录作用的模板是 ，产物是，产物是 。若要在体外获得大量反转录产物，常采用。若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术。技术。（5）基因工程中除质粒外，）基因工程中除质粒外，和和 也可作为运载体。也可作为运载体。（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 。40.（1）黏性末端；平末端（）黏性末端；平末端（2）切割产生的）切割产生的DNA片段末端与片段末端与EcoR切割产生的相同。切割产生的相同。（3）大肠杆菌；）大
25、肠杆菌；T4 （4）mRNA（或（或RNA）；）；cDNA（或（或DNA）；）；PCR（5）噬菌体；动植物）噬菌体；动植物病毒（病毒（6）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的功能极弱。）的功能极弱。第27页，此课件共33页哦第28页，此课件共33页哦第29页，此课件共33页哦资料乙：资料乙：T4溶菌酶在翁度较高时易失去活性，科学家对编码溶菌酶在翁度较高时易失去活性，科学家对编码T4溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T4溶溶菌酶的第菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第9
26、7位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了高了T4溶菌酶的耐热性。溶菌酶的耐热性。第30页，此课件共33页哦40(2013课标全国课标全国，40)生物生物选修选修3：现代生物科技专题：现代生物科技专题(15分分)甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含。某研究小组拟培育同时含有有A和和B的新型药用植物。的新型药用植物。回答下列问题：回答下列问题：(1)为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的
27、叶片，先用_酶和酶和_酶去除细胞壁，酶去除细胞壁，获得具有活力的获得具有活力的_，再用化学诱导剂诱导二者融合，形成的融合细胞进一步培养形成，再用化学诱导剂诱导二者融合，形成的融合细胞进一步培养形成_组织，然后经过组织，然后经过_形成完整的杂种植株。这种培育技术称为形成完整的杂种植株。这种培育技术称为_。(2)上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指_假设甲与乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是假设甲与乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是_(3)这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组
28、织培养得到的这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的_等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。(1)纤维素纤维素(1分分)果胶果胶(1分分)原生质体原生质体(2分分)愈伤愈伤(2分分)再分化再分化(或分化或分化)(2分分)植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术(1分分)(2)体细胞中含有三个或三个以上染色体组的个体体细胞中含有三个或三个以上染色体组的个体(2分，其他合理答案也给分分，其他合理答案也给分)在减数分裂过程中，在减数分裂过程中，前者染色体联会异常，而后者染色体联会正常前者染色体联会异常，而后者染色体联会正常(3分，其他合理
29、答案也给分分，其他合理答案也给分)(3)胚状体、不定芽、顶芽、腋芽胚状体、不定芽、顶芽、腋芽(1分，答对其中一个即给分分，答对其中一个即给分)第31页，此课件共33页哦(2014新新课课标标，40)某某研研究究者者用用抗抗原原(A)分分别别免免疫疫3只只同同种种小小鼠鼠(X、Y和和Z)，每每只只小小鼠鼠免免疫疫5次次，每每次次免免疫疫一一周周后后测测定定各各小小鼠鼠血血清清抗抗体体的的效效价价(能能检检测测出出抗抗原原抗抗体体反反应应的的血血清清最最大大稀稀释释倍倍数数)，结结果果如下图所示。如下图所示。第32页，此课件共33页哦若若要要制制备备杂杂交交瘤瘤细细胞胞，需需取取免免疫疫后后小小鼠鼠的的B淋淋巴巴细细胞胞(染染色色体体数数目目为为40条条)，并并将将该该细细胞胞与与体体外外培培养养的的小小鼠鼠骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞(染染色色体体数数目目为为60条条)按按一一定定比比例例加加入入试试管管中中，再再加加入入聚聚乙乙二二醇醇诱诱导导细细胞胞融融合合，经经筛筛选选培培养养及及抗抗体体检检测测，得得到到不不断断分分泌泌抗抗A抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。第33页，此课件共33页哦