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1、Image Lab中文操作手册Fast and ReliableImage Lab全自动图像获取和分析软件用于Molecular Imager ChemiDoc XRS+、Molecular Imager Gel Doc XR+ 和 Criterion Stain FreeTM 成像系统，可应用于凝胶电泳和转印膜的数字成像和分析，而自动化的工作流程能加速图像获取步骤与参数优化，并针对调整好的凝胶或转印膜影像进展系统性分析，进而得到所需的分析数据结果。一、软件操作界面启动精灵程序桌面主窗口工具列分析工具列状态列1. 主窗口工具列档案管理 分析数据ResultsData2. 显示工具列转换3D成模
2、式像亮度明暗度转换改变图像色彩全窗口大小放大缩小图像显示设定图像信息3. 分析工具列1图像工具ImageTools2泳道与条带工具Laneand BandTools3分子量工具MW MolecularWeight4自动定量工具QuantityTools5注释工具AnnotationTools6手动定量工具VolumeTools二、使用Image Lab 软件进展化学发光图像获取流程1. 建立图像获取程序：在凝胶成像Gel Imaging对话框中选择Chemi化学发光应用程序(1) 在成像区域Imaging Area对话框中的下拉式选单中选择适宜的样品大小非必需，可之后通过Position Ge
3、l选择(2) 选择成像曝光Image Exposure方法，可以人为评估曝光时间并以手动设定Manual Exposure，或是使用信号累积模式Signal Accumulation Mode，SAM来进展操作。在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光确实定，因为您想获得一个充分利用了相机大的动态围的图像。过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被识别；过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和也就是说，超出了相机准确报告信号的能力。如果这是您第一次用ChemiDoc XRS+分析化学发光样品，您需要在使用手控或信号累积模式SAM之前决定一个适宜的成像时间框架。获得这个信息的最好的
4、方式是取得一个相对短的手工曝光并利用Image Lab里的工具估计最适的曝光时间。2. 手动曝光(1) 选择手动设定曝光时间Manually set exposure time并在读秒框中输入10秒。(2) 选择Highlight saturated pixels 。(3) 把胶置于透射箱的中心位置。(4) 在程序窗口中点击按钮。(5) 观察显示器中样品的实时图像，打开照胶系统的门并移动样品直到位于视野的中心区域。(6) 可利用照相机的变焦滑板调节成像区域的大小。(7) 选择按钮获得你的第一个图像。假设所需的图像出现在计算机的显示器上，确认图像中是否包含红色的饱和区域。假设有饱和区域存在，请重
5、新以较短的曝光时间来获取图像。假设无饱和区域存在，那么可移动鼠标置于最暗的条带之上，在较低的右下角Image Lab窗口中观察信号的强度数值。如图中显示强度为1994，照相机能记录的最大值的32分之一最大值为65,535。用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相机的最大动态围附近成像你的样品。假设你只需针对单一图像的成像时间进展评估，可直接在手动曝光区域中输入300。3. 信号累积模式Signal Accumulation Mode，SAM如果预估方法不足以准确满足您的目的，请选择SAM按钮，然后按Setup按钮。一个新的对话框会跳出来，其包含有可输入细分的成像时间的领域。在这个例子中，我们
6、已经输入了小于和大于我们原始的300秒曝光估计时间，因为我们有理由相信准确的成像时间将会在这些时间之中。我们总共想要5个成像，推测其中一个将会与最正确成像极为接近。一个您的SAM设定的图像显示出现在对话框里。而SAM设定的影像显示对话窗口，在您选择按钮后再点选按钮，窗口会显示相关进度图标来说明整体图像获取的时间。在250秒获取第一个图像，同时一个小的缩略图会出现在窗口的下方，以此类推整个过程将持续到获取所有的图像。就像前面做过的那样，通过移动鼠标在图像上，您能判定强度值。您也可以通过使用位于程序窗口左边的图像转换窗口Image Transform中的调节划片改变图像的表观。在SAM程序中的任何
7、地方您都能通过点击缩略图查看图像。假设确定调整到符合您要求的图像时，点击按钮舍弃其它不适合的图像来完成获取图像的程序。也可在SAM获取图像的过程中或之后来保存需要的所有图像，直接点选右键单点缩图窗口的图像即可进展存盘保存下来。在决定获取图像的数量时，记住增加SAM图像会导致背景信号的平均。当较多的图像被获得时，在背景强度水平附近的弱的信号将会变得难以识别。如果区分最弱的信号很重要，我们推荐在适宜的时间下获得单一的成像。三、建立全自动图像获取与分析程序CreatingProtocols1. 启动分析精灵窗口 - STEP1.GELIMAGING1按照应用NucleicAcid/Protein/B
8、lots选择相关的程序Choose an application2选择成像区域Choose the Imaging Area3选择成像曝光时间Choose ImageExposure Time4选择显示设定 Choose DisplayOptions , Highlight saturatedpixels and Image Color2. 图像自动分析AnalyzeImage- STEP2.DETECTLANESANDBANDS 设定DETECTLANESANDBANDS的参数Low Band Detection SensitivityLowsensitivity=25、High Band
9、Detection SensitivityHigh sensitivity=75或自行设定灵敏度。3. 分子量分析AnalyzeMolecularWeight -STEP3.ANALYZEMOLECULARWEIGHT设定Analyze Molecular Weight Settings的分子量标准品Molecular Weight Standard类型，所有Bio-Rad的各类标准品包括核酸、蛋白均已预存。当然，您也可以根据您的实验设置您自定义的分子量标准品。并同时设定分子量标准品的泳道与回归方式。4. 报告输出设定ReportSettings- STEP4.SPECIFYCONTENTOF
10、REPORTS5. 结果ResultsOverview与报告Report1数据显示信息DisplayingData2分析表格设定AnalysisTableOptions3Lane 信息LaneProfile4标准曲线StandardCurve四、建立图像分析程序CreatingImages Analyzing Protocols1. 图像分析AnalyzingImages1分析工具AnalysisToolBoxA自动分析AutoAnalysis 点选进入DetectionSettings窗口 设定Detect lanes and bands的参数LowBandDetectionSensitiv
11、ityLowsensitivity=25、HighBandDetectionSensitivityHigh sensitivity=75或自行设定灵敏度，接着再设定 MolecularWeightAnalysisSettings的MolecularWeightStandard、Standard Lanes与RegressionMethod参数。2. 图像工具ImageTools可进展水平或垂直翻转、左右旋转90或自由旋转Rotate、裁剪Crop、反转InvertData与迭合Merge。3. Lanes与Bands工具LaneandBandTools1LaneTab 使用自动Automati
12、c或手动Manual搜寻Lane功能A针对所有的LanesAllLanes进展大小调整Resize、Adjust与 删除Delete等参数调整。B针对单一LaneSingleLane进展增加Add、弯曲Bend、移动Move、宽度Width与删除Delete等参数调整。C利用LaneBackgroundSubtraction进展背景值的扣抵，并可点选ApplytoselectedLane针对单一Lane进展调整。- 可以藉由Rolling Disk参数设定1-99mm来去除背景值。2Bands Tab通过Detect Bands进展自动搜寻Bands功能或手动进展增加Add、删除Delete与
13、Adjust等参数调整。4. 分子量分析工具MolecularWeightAnalysisTools 此工具可由的标准品测算相对的分子量或碱基对base pairs。5. 定量工具QuantityTools1相对定量RelativeQuantityTab从图像中选择的标准品referenceband与其标准品浓度以绿色R表示，其分析结果可从Analysis table观察。2绝对定量AbsoluteQuantityTab通过选择标准品浓度的bands至少两个以上,以R表示，并设定适宜的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标bands的绝对浓度回归参数设定如Linear(较常用)、Point-to
14、-Point或Cubicspline。RegressionMethodMinimumnumberof standardbandsMinimumnumberwith ForceThroughOptionLinear21Point-to-Point21CubicSpline546. 注释工具AnnotationTools可以通过Add Annotations工具增加文字批注与箭头批注，并可调整批注相对位置Alignment、文字属性、颜色与旋转方向等参数17 / 177. 定量工具VolumeTools 按下选择较适合的Band型态, 选取想要定量分析的Band位置, 并在Band上点击左键两下可
15、将样品定义为标准品、未知样品或背景空白, 并分别定义其定量依据如kb，ppm，mg/ml建议用Rect Tool方形，先框出适当的方形，并用复制方式将分析的Band框出Ctrl+C+左键/即可复制，或Ctrl+C复制/Ctrl+V粘贴。在Band上点击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白。1VolumeBackgroundSubtraction- LocalLocal backgroundsubtraction通过我们所圈选的unknown volume 和 standardvolume 的pixels密度总和来进展背景值的扣抵。- GlobalGlobal background subtraction通过整胶或膜的背景平均的密度来进展背景值的扣抵。有任何疑问与意见，欢迎随时来电询问800-820-5567