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1、简答题：1.核小体与核小体定位在基因表达及其调控中有何作用？核小体是染色质的基本结构单位，体内外试验均证实，核小体是基因转录的通用抑制子。细胞内基因组包裹在核小体内，如果启动子区在核小体内，则转录通常会被抑制。试验也证明由于缺少H4 组蛋白，在核小体不能形成的酵母细胞系中，很多基因变成组成型表达，而在正常的细胞中，他们均处于抑制状态。核小体在DNA 中的精确定位对细胞正常功能的发挥起重要作用。由于核小体与DNA 的动态相互作用，大多数核小体的位置是不固定的。但是在有些情况下，某些核小体被限定在基因组的固定位置上，或者说DNA 序列仅以一种特定的构型装配成核小体，则DNA 上的每个位点将一直位于
2、核小体上的特定位置，我们称这种装配类型为核小体定位。核小体的定位对基因的表达调控有重要的影响。它的定位变化总是伴随着基因从抑制到转录状态的转变。核小体的定位或定位的去稳定或解除可能是影响基因转录调控的重要因素。大量的试验结果表明，核小体的形成和在染色质的精确定位是真核基因表达所必需的。有人提出核小体的形成及其在染色质上的精确定位有以下两方面的作用：（1）提供一个支架结构，使转录因子之间的信息传递更有效；（2）染色质结构的不均一性，即某些区域不形成核小体，保证了转录因子易于接近染色质模板。2.原核生物与真核生物的启动子结构有什么差别？原核生物的启动子在操纵元中，从mRNA 开始转录的位点以上都是
3、启动子序列，20bp-200bp 特点：1.Pribnow 框：TATAAT，位于-10 左右，是RNA 聚合酶的牢固结合位点2.Sextama框：TTGACA，位于-35 附近，是RNA 聚合酶的初始结合位点3.上述二者及之间的距离决定转录效率，一般距离17bp 左右4.CAP 位点 cAMP-受体蛋白复合物在启动子上的的结合位点真核生物有三类RNA 聚合酶，与此对应，有三类不同的启动子。事实上 RNA 聚合酶，所作用的启动子情况比较复杂RNA 聚合酶识别的启动子，除5SrRNA 基因外，其它rDNA 基因组成一个大的多拷贝基因族，转录成一个45S 的 rRNA 前体，其启动子由起始位点的核
4、心启动子和其上游控制元件两部分组成。核心启动子包括-45 到+20，负责转录的启始；上游控制元件从-200 到-150，它们之间的序列长度对转录效率影响很大。RNA 聚合酶启动子可分为两种类型。一种是启动子位于转录起始点下游，又称下游启动子（downstream promoter）、基因内启动子（intragenetic promoter）或内部控制区（internal control region）。另一种启动子是与常见的启动子相似，又称上游启动子（upstream promoter）。下游启动子又分为两个亚型，型和型，型内部启动子有两个 分 开 的 序列boxA（TGGCNNAGTGG）（
5、共 同 序列RRYNNARYGG），和boxC（CGGTCGANNCC）（共同序列RRTGGGA/TGACC），而它们之间的距离比较固定，为中间元件（internal element IE），这是 5SrRNA 基因的典型结构。型内部启动子由boxA和 boxB（GGTTCGANTCC）组成，两者之间距离较大，且不固定，是tRNA 基因启动子的典型结构。上游启动子包括三部分元件，即TATA 框，近侧序列元件（proximal sequence element,PSE），和远侧序列元件（distal sequence element,DSE），这是部分 snRNA基因启动子的典型结构。RNA 聚
6、合酶启动子由四部分元件组成，即转录起始点、TATA 盒、上游元件和远上游元件。转录起始点（initiators）在有些型转录酶启动子中比较保守，其一致性序名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 1 页，共 10 页 -列为 PyPyANT/APyPy，转录起始点常和TATA 盒组成核心启动子起始基础转录，但与其相连的上游元件和增强子可以促进其高效转录。对于含TATA 盒的启动子，其启始点常在其下游25bp30bp，有的基因启动子无典型起始子序列，则 RNA 聚合酶根据TATA盒下游 30bp 附近的第一个嘌呤碱基作为转录启始点。3.常见的反式作用因子有哪些？其结构特点是什么？这些调节
7、着基因转录活性的反式作用因子，通称为转录因子，已鉴别的转录因子可分为普遍性和组织特异性两类。转录因子有数千种之多，从其结构特点来看，主要有两大功能区，DNA 结合域，活性域。对于 DNA 结合域，根据其氨基酸结构域的特点，又可分为：螺旋-转角-螺旋（helix-turn-helix,HTH），锌指（zinc finger），螺旋-环-螺旋（helix-loop-helix,HLH），亮 氨 酸 拉 链（leucine zipper，ZIP），同 源 异 型 域（homeodomain,HD)，激素受体类（类固醇等）或核受体类，桶（-barrels）结构等。锌指蛋白（zinc finger pr
8、otein）是由含有锌指结构域的两类蛋白质组成，即传统的锌指蛋白和类固醇受体结合蛋白质。锌指结构域是由蛋白质上保守的半胱氨酸及/或组氨酸与锌原子结合形成一个手指状的结构。典型的锌指蛋白往往有多个锌指结构域，其保守序列为Cys-X2-Cys-X3-phe-X5-leu-X2-His-X2-His,锌原子与其中两个半胱氨酸和2 个组氨酸结合形成四面体结构，长23 个氨基酸，两个锌指之间由7 8 个氨基酸相连。从每个锌指的三级结构来看，其N 端形成 折叠，C 端形成 螺旋。反向平行的折叠区含有 2 个半胱氨酸，与其后螺旋中的 2 个组氨酸一起与锌原子结合，而由锌原子稳定了整个锌指结构。同源异型域蛋白
9、属于HTH 蛋白，可形成三个螺旋区，其中螺旋2、螺旋 3 形成典型的 HTH 域，螺旋 3 识别螺旋与DNA 大沟结合，其N 末端臂参与DNA 小沟的结合，同源异型域蛋白形成二聚体后才与DNA 结合-桶(-barrels)结构，每个亚基上的-螺旋则与DNA 大沟相结合，两个相邻的大沟被识别螺旋结合后可导致DNA 分子发生 45的弯曲。HLH 长 4050 个氨基酸，由两个长 1516 个氨基酸的亲水，亲脂的 螺旋及长度不同的环（连接区）将其分开。两蛋白的两个-螺旋疏水面相互作用可形成同二聚体或异二聚体，多数HLH 附近有一强碱性的氨基酸区，但也有不含该区的HLH，含有碱性区的 HLH 称为 b
10、HLH 或 HLP，是 DNA 的识别和结合所必需的，但与 DNA 结合能力的差异则是由bHLH 基序及二聚体的状况所控制的。亮氨酸拉链（leucine zipper，ZIP）的双亲 螺旋其疏水面亮氨酸突出，并与另一个平行的亮氨酸拉链蛋白的亮氨酸突出交错排列，盘绕成卷，两个右手螺旋互相缠绕，每圈 3.5 个氨基酸，每7 个残基构成一个完整的重复单位，因此亮氨酸在拉链区每隔6 个氨基酸残基重复出现一次，两个蛋白形成同源二聚体或异源二聚体。在每个拉链蛋白质中与亮氨酸重复序列邻近的区域是高度碱性的，可作为一个DNA 的结合位点。整个二聚体呈 Y 型结构，拉链构成茎，两个碱性区分叉形成臂，横跨在DNA
11、 分子上并与相邻的 DNA 两个大沟结合，这称为bZIP。4.原核生物与真核生物基因表达调节机制的主要差别是什么？原核生物和真核生物基因表达调控的不同1.在原核生物中，基因表达的调控以转录水平调控为主，在调节基因的作用下，主要以操纵子为单位，转录出一条多顺反子mRNA，并指导蛋白质合成；而且转录和翻译是偶联的，很少发生mRNA 的加工、修饰。但也存在转录后水平的调控，例如反义 RNA 的调控，翻译的调控，RNA 开关等。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 2 页，共 10 页 -2.在真核生物中，基因表达的调控十分复杂，可发生在多个层次、多个水平，包括从染色体和染色质的表观遗传学
12、控制，DNA 的复制、RNA 的转录、加工与拼接、蛋白质翻译及翻译后加工、修饰等等。对于真核生物基因的转录调控，主要是顺式作用元件（cis-acting element）与反式作用因子(trans-acting factor)的相互作用。3.另外，DNA 的重排和RNA 的交替剪接也是真核生物基因表达多样性的重要机制；近年发现的小分子RNA 通过 RNA 干扰途径也可调节基因的表达，介导DNA 的甲基化、mRNA 的降解及翻译起始的抑制等。5.转座子的遗传学效应与应用6.9.1 改变染色体结构当转座子插入后而引起受体位点DNA 一段短的同向重复序列（DR），即靶位加倍（target-site-
13、duplication）。如转座子切离在DR 之间重组，结果是夹在两个DR 之间的DNA 序列被切离而缺失(deletion)，中间的 DNA 序列形成一个环，将从细胞中丢失，DR在染色体上只留下一个拷贝(图 6-51a)；如重组发生在IR 之间，结果是夹在两个IR 之间的 DNA 发生倒位（inversion）(图 6-51b)，而反向重复得到保留，这将会导致下一次的倒位。6.9.2 诱发基因突变当转座子插入到某个基因座位中往往导致该基因失活，在某些情况，插入位点的基因保持正常转录，只是转录子中的插入序列通过转录后的剪接过程而被除掉，因此插入位点的基因仍表现出显性性状，这种现象叫做渗漏突变(
14、leaky mutation)。也就是仍有些残余水平基因表达的突变。该基因称为渗漏基因（leaky gene），又称亚效等位基因（hypomorph），即一种突变种基因与其野生型有相似的效应，但效应较弱。6.9.3 调节基因表达反转录病毒带有增强子（enhancer）序列，很多转座子也带有增强子，它们像RNA病毒一样，能使其插入位点附近的基因活性增强。转座子除了含有增强子外，有的转座子还含有启动子，也能促进基因的转录活性。6.9.4 产生新的变异由于转座插入位点可能出现新的基因，如像Tn 带的抗药性基因，它的转座不仅造成某个基因的插入突变，同时在此位点上出现一个新的抗药性基因。由于转座作用，使
15、某些原来在染色体相距甚远的基因组合在一起，构建成一个操纵子或表达单元，也有可能产生一些具有新的生物学功能的基因和编码新的蛋白质分子。6.9.5 转座子标记克隆目的基因基因克隆是研究基因结构和功能及基因转移的必要前提，目前常用的办法是构建基因组文库或cDNA 文库，然后从中筛选目的基因。该技术的原理是由于转座子序列可以在基因组中转座，如该序列转座正好插入某一基因的外显子区域时，导致这一基因失活，结果表型改变而成为突变体，如该突变是由于转座子的DNA 克隆，其中必定会含有与该突变体有关的基因。也就是说，用转座子给未知的目的基因加以标记，这样便于该基因的识别与分离。用该突变型提取DNA 构建基因组D
16、NA 文库，用标记的转座子序列作为探针，筛选出的克隆中，再对转座子两端序列进行亚克隆，这是被转座子插入的基因序列。这些亚克隆又反过来作为探针，用于筛选野生型个体的基因文库，获得完整的目的基因。6.9.6 转座因子作为基因工程载体利用 P 因子作为载体，将外源基因转移到果蝇胚胎生殖系细胞中，对果蝇进行遗传操作。将携带目的基因的缺陷P 因子和完整的P 因子同时注入到胚胎的前胚盘，完整的名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 3 页，共 10 页 -P 因子不仅能识别自身的末端序列，也能识别缺陷P 因子的末端而进行转座，结果两种P 因子都被插入到基因组中。只有P 因子两末端之间的DNA 序
17、列才能被插入，两端外侧序列不是转座因子的组成部分，不会被插入到基因组。因此该技术的优点是只插入一个外源基因的拷贝。也就是说，所有转基因果蝇只携带一个拷贝的外源基因，因而便于对其结构和功能进行研究（图6-55）。6.简述染色质重塑的基本过程及其生物学功能。染色质重塑(chromatin remodeling)是表观遗传修饰中一种常见的方式，是指导致整个细胞分裂周期中染色质结构和位置改变的过程。此过程涉及某些依赖能量供给的组蛋白修饰，从而导致许多蛋白-蛋白及蛋白-DNA 的互作受到破坏。在染色质发生重塑的过程中，密集的染色质丝在核小体连接处发生松懈造成染色质疏松，从而使启动子区中的顺式作用元件得以
18、暴露，为反式作用因子（转录因子）与之结合提供了空间接触的可能。细胞基因组中的DNA 通常并非处于裸露状态，而是与组蛋白一起构成结构致密的染色质，故染色质结构状态的改变会影响基因的表达。染色体重塑过程由两种蛋白复合体所介导，即 ATP 依赖型核小体重构复合体和组蛋白修饰复合体。前者通过水解作用改变核小体构型，后者对核心组蛋白N 端尾部的共价修饰进行催化。9.2.3 染色质重塑与发育9.2.4 染色质重塑与人类疾病染色质重塑复合物和组蛋白修饰酶的突变均可引起人体生长发育畸形，导致智力发育迟缓，甚至癌症的发生，其原因可能是由于重塑复合物中的关键蛋白发生突变，使染色质重塑失败，核小体不能正确定位，并使
19、DNA 损伤修复复合物和转录因子等不能接近 DNA，从而影响基因的正常表达。如果突变导致抑癌基因或调节细胞周期的蛋白发生异常，将导致癌症发生。染色质重塑复合物及其相关蛋白均与转录激活和抑制、DNA甲基化、DNA 修复以及细胞周期相关。9.2.5 染色质重塑与基因剂量补偿论述题1.有哪些方法可用于功能基因组学的研究？现在有何进展？在功能基因组学的研究中通常运用高通量技术（high-throuput techniques），如 DNA微阵列（DNA microarrays），反向遗传学（reverse genetics）技术如基因打靶，转基因以及反义 mRNA 和 RNA 干扰等技术来系统地分析基
20、因功能及基因间相互作用，基因组的时空表达以及发现和寻找新基因等。DNA 微阵列技术又称DNA 芯片（DNA chips）或基因芯片技术（gene chips），它通过将对应于不同基因或 cDNA 的 DNA 片段或寡聚核苷酸点样于微芯片上形成高密度的矩阵，与荧光标记的总mRNA 进行杂交，然后通过激光共聚焦扫描检测并运用计算机软件对杂交信号进行自动化定性定量分析，具有高通量、实时、灵敏、准确等特点。基因打靶是指通过转染的DNA 序列与细胞内同源的基因组序列（靶序列）之间进行同源重组，以改变靶序列来研究其结构和功能或进行基因治疗的技术。基因打靶技术包括基因敲除（knock-out）和基因敲入(k
21、nock-in)，前者是用无功能的DNA 序列与靶序列重组，破坏原基因组的遗传功能，后者是用有功能的DNA 序列与受到破坏的靶序列重组使其恢复遗传功能。基因打靶技术是一种从基因到表型的新研究方法，属于反求遗名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 4 页，共 10 页 -传学范畴。反义 mRNA 技术通过向细胞导入一段与特定编码mRNA 互补的非编码RNA 链，使其与该段mRNA 特异性结合而定向阻抑靶基因表达的技术。这一技术的成熟，为功能基因组学的研究和基因治疗提供了新的思路。在反义mRNA 技术的研究过程中，科学家们意外发现导入正义mRNA（sense RNA）与导入反义mRNA
22、具有等效的阻抑效应。而更令人吃惊的是如果导入相应双链RNA（dsRNA），其阻抑效应比导入任一单链RNA强十倍以上，dsRNA 若经纯化则阻抑效应更强。这种双链RNA 特异性地作用于与其序列配对的基因而抑制其表达的现象叫做RNA 干涉。RNA 干涉技术作为一种新的定点敲除 knockdown 技术，赋与了功能基因组学、基因治疗等全新的思路，堪称生命科学近年来的革命性的突破。因而发现RNA 干扰机制的两位美国科学家Fire 和 Mello 荣获 2006年诺贝尔生理学或医学奖(表 1 1)。可见该项成果的重大科学意义。2.目前最常用的突变体创制方法有哪些？如何利用突变体进行功能基因组学研究？突变
23、体是遗传学研究的重要材料，其表型与基因型是基因功能研究的直接证据，因此突变体的创制和特异突变体的筛选非常重要。已知突变体可分为自发突变和人工诱变。自发突变不足以满足现代遗传学研究的需要。诱发突变则可以利用人工的方法提高基因突变频率，在短时间内创制大量突变体，还可以获得许多在自发突变下很难产生的新类型突变体。基因诱变常用的化学诱变因素多为烷化剂，如 EMS 和 N-甲基-N-亚硝基脲(methylnitrosourea，MNU)等，物理诱变因素为电离辐射和快种子等，生物诱变因素为转座子、逆转座子等。5.5.1 EMS 突变体EMS 处理生物材料可使DNA 的鸟嘌呤第六位酮基烷化而形成O6-乙基鸟
24、嘌呤，而O6-乙基鸟嘌呤可以与腺嘌呤配对而不能与胞嘧啶配对。因此，原来DNA 中的 G-C 对通过随后的修复变为A-T。通常 EMS 诱发突变99%为 C/T 突变，导致C/G 变为 T/A 碱基替换。5.5.2 快中子突变体电离辐射是原子核发生衰变时所放出的射线，种类很多，主要有：射线，其本质是氦的原子核，穿透能力弱，在生物组织中穿透只有几十微米；射线，一种电子流，其穿透能力较粒子强，在生物组织中达数个毫米；射线，有时也称为光子，是不带电的粒子，比、粒子小，有很强的穿透能力；n 射线，也就是中子流，不带电，几乎不能与原子的电子相互作用，只能和原子核相互作用，一般中子源发出的中子为快中子，能量
25、比较高，质量小，速度快，穿透能力极强。5.5.3 T-DNA 标签突变体T-DNA 标签技术是以农杆菌介导的遗传转化为基础的一种插入突变研究方法。由于农杆菌的寄主范围较广,转化技术成熟,故是创造插入突变体的有效途径。5.5.4 转座子标签突变体由于转座子活跃的转座活性能导致高频率的基因突变而被广泛应用与病毒、细菌、酵母、果蝇、拟南芥菜、水稻等物种的突变体创制与基因功能研究。3.RNAi 通过哪些机制控制基因的表达？实践中有何应用？通过各种途径产生的dsRNA 进入宿主细胞，由其细胞质中的核酸内切酶Dicer 将dsRNA 切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA，即 siRNA。该 siRN
26、A 在细胞内名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 5 页，共 10 页 -RNA 解旋酶的作用下可解链成正义链和反义链，继之由反义siRNA 再与体内一些酶和蛋白质（包括内切酶、外切酶和解旋酶等）结合形成RNA 诱导的沉默复合体（RISC）。研究表明RNA 诱导的沉默复合体有多种成员，并使其激活。RISC 具有 RNA 切割的特点。与 RISC 结合的双链siRNA 通过变构释放出和mRNA 序列相同的片段，活化的 RISC在保留的反义单链RNA 引导下与mRNA 的靶位点结合，在与 siRNA 反义链互补结合的mRNA 中间切断mRNA，被切段的mRNA 随即降解失去翻译活性。由
27、 dsRNA 加工产生的siRNA 可能数量很多，有些还可能不完全配对，它与RISC结合后可与mRNA3非翻译区结合，通过结合poly(A)的 PABP 与 eIF-4F 作用，抑制翻译的起始；RISC 同样可再进入细胞核，在该dsRNA 的引导下诱导靶基因的启动子DNA 发生甲基化，即RNA 指导下的DNA 甲基化使其不能转录而沉默；或者 RISC 在 siRNA 引导下通过RDRP 募集组蛋白修饰因子，使H3K9 甲基化，从而导致基因附近形成异染色质而是基因沉默。siRNA 还有一个扩增过程，即由 siRNA 导致 mRNA 切断后，含 polyA 的 mRAN 后半段会在核酸酶的作用下从
28、5到 3外切而降解，而含帽子的mRNA 前半段在依赖于RNA 的 RNA 聚合酶的作用下合成双链。该双链 RNA 又可作为Dicer 的底物，产生更多的 siRNA，从而使 siRNA 序列扩散到mRNA 的多处，产生广泛的有效的基因沉默现象。RANi干涉将成为基因功能研究的一把利器，也是基因表达调控、基因治疗的一种重要手段。4.DNA 甲基化是如何在转录水平上抑制基因表达的？直接干扰特异转录因子与各自启动子结合的识别位置DNA 的大沟是许多蛋白因子与 DNA 结合的部位，胞嘧啶的甲基化干扰转录因子与DNA 的结合。许多转录因子，如 AP-2 和 E2F 等能识别含CpG 的序列，且对其甲基化
29、程度非常敏感，当CpG 上的 C被甲基化后，转录即被抑制转录抑制复合物干扰基因转录甲基化DNA结合蛋白与启动子区内的甲基化CpG 岛结合，再与其它一些蛋白共同形成转录抑制复合物(transcriptional repression complex,TRC)，阻止转录因子与启动子区靶序列的结合，从而影响基因的转录。已经鉴定了甲基化胞嘧啶结合蛋白1 和 2(MeCP1 和 MeCP2)及甲基化DNA 结合蛋白（MBD）等转录抑制复合物。MeCP1 是一个蛋白复合体，但不稳定，主要由MBD3、MBD2、HDAC1/2 和 RbAp46/48(Rb-associated histone-binding
30、 protein 46/48)等所组成。MeCP1的抑制作用比较弱，需要与含12 个甲基化CpG 的位点结合，缺乏MeCP1 的细胞其基因组内甲基化基因的抑制作用减弱。MeCP2 在细胞中比MeCPl 丰富，转录抑制作用比较强，可与单个甲基化的CpG 碱基对结合。它含有2 个结构域，即染色体定位必需的甲 基 化CpG 结 合 结 构 域和 在 一 定 距离 内 可 抑 制启 动 子 转 录的 转 录 抑 制结 构 域(transcriptional-repression domain，TRD)。MeCP2 也可以与转录因子竞争结合位点，通过不依赖于组蛋白去乙酰化酶(histone deacet
31、ylase，HDAC)的方式抑制基因的转录。与DNA 甲基转移酶一样，MeCP2 对胚胎干细胞的存活不是必需的，但对胚胎发育是必需的。MeCP2 能募集(recruitment)组蛋白去乙酰化酶，说明 DNA 甲基化和组蛋白乙酰化之间有一定的联系。组蛋白去乙酰化酶能提高转录抑制因子Sin3 的活性，其活性增强会引起基因的失活。MeCP2 以甲基化依赖的方式结合到染色质上，通过转录抑制结构域与Sin3A-HDAC抑制复合体紧密联系。该复合体包含至少7 种蛋白，如转录抑制子Sin3、HDAC1 和 HDAC2 等(图 9-6)。通过改变染色质结构而抑制基因表达DNA甲基化与组蛋白去乙酰化正相关，名
32、师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 6 页，共 10 页 -而乙酰化修饰正是调节基因表达的另一重要方式。染色质构型的变化伴随着组氨酸的乙酰化和去乙酰化，许多乙酰化和去乙酰化酶本身就分别是转录增强子蛋白和转录阻遏物蛋白。DNA 失活的区域处于高度甲基化状态，同时又富含低乙酰化组氨酸。CpG 二聚体中胞嘧啶甲基化是高等真核生物基因组的主要特征。一般来说，在基因启动子区的DNA 甲基化伴随着基因沉默5.真核生物CG 岛的甲基化状态与基因的表达活性的关系如何？9.3.3 DNA 甲基化的转录抑制机制直接干扰特异转录因子与各自启动子结合的识别位置DNA 的大沟是许多蛋白因子与 DNA 结合的
33、部位，胞嘧啶的甲基化干扰转录因子与DNA 的结合。许多转录因子，如 AP-2 和 E2F 等能识别含CpG 的序列，且对其甲基化程度非常敏感，当CpG 上的 C被甲基化后，转录即被抑制转录抑制复合物干扰基因转录甲基化DNA结合蛋白与启动子区内的甲基化CpG 岛结合，再与其它一些蛋白共同形成转录抑制复合物(transcriptional repression complex,TRC)，阻止转录因子与启动子区靶序列的结合，从而影响基因的转录。通过改变染色质结构而抑制基因表达DNA甲基化与组蛋白去乙酰化正相关，而乙酰化修饰正是调节基因表达的另一重要方式。染色质构型的变化伴随着组氨酸的乙酰化和去乙酰化
34、，许多乙酰化和去乙酰化酶本身就分别是转录增强子蛋白和转录阻遏物蛋白。DNA 失活的区域处于高度甲基化状态，同时又富含低乙酰化组氨酸。CpG 二聚体中胞嘧啶甲基化是高等真核生物基因组的主要特征。一般来说，在基因启动子区的DNA 甲基化伴随着基因沉默。6.端粒及其生物学意义端粒是线状染色体末端的DNA 重复 序列，是真核染色体两臂末端由特定的DNA重复序列构成的结构，使正常染色体端部间不发生融合，保证每条染色体的完整性。端粒是短的多重复的非转录序列（在人和酵母中该序列为：TTAGGG）及一些结合蛋白组成特殊结构。一个基因组内的所有端粒都是由相同的重复序列组成，但不同物种的端粒的重复序列是不同的。除
35、了提供非转录DNA 的缓冲物外，它还能保护染色体末端免于融合和退化，在染色体定位、复制、保护和控制细胞生长及寿命方面具有重要作用，并与细胞凋亡、细胞转化和永生化密切相关。当细胞分裂一次，每条染色体的端粒就会逐次变短一些，构成端粒的一部分基因约50200 个核苷酸会因多次细胞分裂而 不能达到完全复制（丢失），以 至细胞终止其功能不再分裂。因此，严重缩短的端粒是细胞老化的信号。在某些需要无限复制循环的细胞中，端粒的长度在每次细胞分裂后被能合成端粒的特殊性DNA 聚合酶-端粒酶所保留。稳定染色体末端结构，防止染色体间末端连接，并可补偿滞后链 5 末端在消除RNA引 物后造成的空缺。组织培养的细胞证明
36、，端粒在决定动植物细胞的寿命中起着重要作用，经过多代培养的老化细胞端粒变短，染色体也变得不稳定。染色体由于融合、降解、重排而形成不稳定结构从而威胁到DNA 的正确复制和细胞生存，端粒的存在能够保护染色体免于化学修饰、被核酸降解以及因端端作用而产生的威胁。端粒使染色体末端区域形成异染色质，在细胞进行减数分裂的过程中结合到核膜一特定区域，使得染色体寻找同源染色体启动和配对的过程更加容易，并且保证了染色体分离的正确性 1013。在细胞有丝分裂的过程中，端粒会随着分裂次数的增加逐渐缩短，当端粒缩短到一定程名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 7 页，共 10 页 -度时便无法继续维持染色体
37、的稳定，细胞最终死亡，故而能够根据端粒的长度预测细胞的寿命。但是在生殖细胞中，端粒的长度不随细胞分裂而缩短，推测是由于生殖细胞中富含端粒酶的缘故。名词解释：DNA 甲基化（DNA methylation）:是指由DNA 甲基化转移酶介导，催化甲基基团从S-腺苷甲硫氨酸向胞嘧啶的C-5 位点转移的过程。ENCODE 计划(The Encyclopedia of DNA Elements Project)：即“DNA元件百科全书计划”，简称 ENCODE 计划，是在完成人类基因组全序列测定后的2003 年 9 月由美国国立人类基因组研究所（National Human Genome Researc
38、h Institute，NHGRI）组织的又一个重大的国际合作计划，其目的是解码基因组的蓝图，鉴定人类基因组中已知的和还不知功能的多个物种的保守序列等在内的所有功能元件。ENCODE 计划的实施分为3 个阶段：试点阶段（a pilot phase）、技术发展阶段（a technology development phase）和生产阶段（a producttion phase）。gRNA(guide RNA)：既指导”RNA(gRNA，guide RNA)，能通过正常的碱基配对途径，或通过 GU 配对方式与mRNA 上的互补序列配对，指导编辑的进行。GT-AG 规律（GT-AG rule）：真核
39、生物所有编码蛋白质的结构基因，其 RNA 前体在内含子和外显子交界处有两个较短的保守序列，内含子的左端均为GT，右端均为AG，此规律称 GT-AG 规律。miRNA：即小RNA，长度为 22nt 左右，5端为磷酸基团、3端为羟基。miRNA 广泛存在于真核生物中，不具有开放阅读框架，不编码蛋白质，其基因的转录产物是发夹状结构，在 RNase酶切后以双链形式存在，是近几年在真核生物中发现的一类具有调控功能的非编码RNA，它们主要参与基因转录后水平的调控。RNA 编辑(RNA editing):是指通过碱基修饰、核苷酸插入或删除以及核苷酸替换等方式改变 RNA 的碱基序列的转录后修饰方式。RNA
40、诱导的沉默复合体（RNA Induced Silencing Complex，RISC）：与 siRNA 结合后可识别并切断mRNA。RNA 指导的DNA 甲基化（RNA Directed DNA Methylation RDDM）：活性 RISC 进入核内，指导基因发生DNA 的甲基化。密码子摆动假说（wobble hypothesis）：密码子的第1，2 位核苷酸（5 3）与反密码子的第 2，3 核苷酸正常配对；密码子的的第3 位与反密码子的第1 位配对并不严谨，当反密码子的第1 位为 U 时可识别密码子第3 位的 A 或 G，而 G 则可识别U 或 C，I（次黄嘌呤）可识别U 或 C 或
41、 A。比较基因组学（comparative genomics）：是一门通过运用数理理论和相应计算机程序，对不同物种的基因组进行比较分析来研究基因组大小和基因数量、基因排列顺序、编码序列与非编码序列的长度、数量及特征以及物种进化关系等生物学问题的学科。表观遗传变异（epigenetic variation）:基因的碱基序列未发生改变，而是由于DNA 甲基化，组蛋白的乙酰化和RNA 编辑等修饰导致基因活性发生了变化，使基因决定的表型发生变化，且可遗传少数世代，但这种变化是可逆的。超基因家族（supergene family）：是 DNA 序列相似，但功能不一定相关的若干个单拷名师资料总结-精品资料
42、欢迎下载-名师精心整理-第 8 页，共 10 页 -贝基因或若干组基因家族的总称。沉默子（silencer）：一种转录负调控元件，当其结合特异蛋白因子时，对基因转录起阻遏作用。特点很象增强子，但不增强转录，而是减弱转录，故称负增强子。代谢组学(metabolomics)：是对某一生物或细胞在一特定生理时期内所有低分子量代谢产物同时进行定性和定量分析的一门新学科。端粒(telomere)：是由独特的DNA序列及相关蛋白质组成的线性真核染色体的末端结构，它具有防止末端基因降解、染色体末端间的粘连和稳定染色体末端及其精确复制等功能。反向遗传学（reverse genetics）：是从改变某个感兴趣的
43、基因或蛋白质入手，然后去寻找相关的表型变化。反转座子（retroposon）或“反转录转座子（retrotransposon）”:先转录为RNA 再反转录成 DNA 而进行转座的遗传元件。核酶（ribozyme）:具有催化活性的RNA,即化学本质是核糖核酸(RNA),却具有酶的催化功能。核酶的作用底物可以是不同的分子,有些作用底物就是同一RNA 分子中的某些部位。核心启动子（core promoter）：是指在体外测定到的由RNA pol进行精确转录起始所要求的最低限度的一套DNA 序列元件。化学基因组学(chemogenomics)：它是作为后基因组时代的新技术,是联系基因组和新药研究的桥梁
44、和纽带。它指的是使用对确定的靶标蛋白高度专一的小分子化合物来进行基因功能分析和发现新的药物先导化合物。基因组印迹(genomic imprinting):也称作基因印迹(gene impringting)，是一种新发现的非孟德尔遗传现象，指来自双亲的某些等位基因在子代中呈现差异性表达的现象。程序性细胞死亡/凋亡（programmed cell death/apoptosis)：细胞应答一类刺激剂，引起一连串特征性的反应，从而启动导致细胞死亡的途经。焦磷酸化编辑（pyrophosphorolytic editing）：RNA 聚合酶通过PPi 的掺入（聚合反应的逆反应）去除错误加入的核苷酸，然后
45、加入正常的核苷酸，虽然这种编辑不能区分正常和错误的核苷酸，但由于转录在错误加入核苷酸后停留时间过长，而对其有优先校正功能。酵母双杂交(yeast two-hybrid)：利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白质与蛋白质间的相互作用。亮氨酸拉链（leucine zipper）：是由伸展的氨基酸组成，每7 个氨基酸中的第7 个氨基酸是亮氨酸，亮氨酸是疏水性氨基酸，排列在-螺旋的一侧，所有带电荷的氨基酸残基排在另一侧。当2 个蛋白质分子平行排列时，亮氨酸之间相互作用形成二聚体，形成“拉链”。密码子使用的偏好（relative synonymous codon usage，RSCU）：编码同一氨基
46、酸的各个密码子的使用频率在不同生物中并不相同，也不与该氨基酸在整个蛋白质中的频率成正比，这也就是密码子使用的偏好现象，该现象可影响基因表达的效率。母系印迹(maternal imprinting):来自母本的等位基因（母源等位基因）不表达，而父源等位基因表达的现象。母性基因（maternal gene)：母体卵子发生时所表达的基因，母性体细胞基因是在母性体细胞中表达，而母性胚系基因则在生殖细胞中表达（如卵母细胞）。染色质重塑(chromatin remodeling):是表观遗传修饰中一种常见的方式，是指导致整个细胞分裂周期中染色质结构和位置改变的过程。染色质重塑因子（chromatin re
47、modeling factor）:依靠水解 ATP 提供能量来完成染色质结构的改变。染色质重塑因子在组成及功能上不同，但都包含类Snf2 超家族的ATP 酶亚基增强子（enhancer）：该DNA 序列可增加与其连锁基因转录的频率。增强子多位于基名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 9 页，共 10 页 -因的 5 端，但也可位于基因的3 端，甚至基因的内含子中。无位置及方向性，但可能有组织细胞特异性，一般能使基因转录频率增加10 200 倍，有的甚至可以高达上千倍。甚至远离靶基因达几千kb 也仍有增强作用。转座子沉默（transposon silencing）:宿主积累了转座子的
48、多个拷贝，从而阻遏转座发生。组成型剪接（constitutive splicing）：编码蛋白质的不连续基因通过RNA 剪接将内含子从 mRNA 的前体中依次去除，然后规范地将外显子剪接成成熟的mRNA，这种剪接方式是一个基因只产生一种成熟的mRNA，一般也只产生一种蛋白质产物。组蛋白密码（histone code）：组蛋白氨基端的各种修饰（甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化等）及组合通过改变染色质的结构或产生效应蛋白质的结合位点而影响基因的表达活性，从而调控下游的细胞学过程。组蛋白修饰(histone modification):是指染色质上的组蛋白被甲基化、乙酰化或磷酸化的过程。中心法则（central dogma）F.Crick 于 1958 年提出的阐明遗传信息传递方向的法则，指出遗传信息从DNA 传递至RNA，再传递至多肽。DNA 与 RNA 之间遗传信息的传递是双向的，而遗传信息只是单向地从核酸流向蛋白质。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 10 页，共 10 页 -