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1、时境水体中的磨降ft异构体图1 Q7OH的结构式Fig. 1 The structure of Q7 -OH(a)小棒涂层的厚度(b)小棒的形状图2自制固相微萃取小棒涂层的厚度和小棒的形状The coating thickness and the appearance of the solid phase microextraction stir bar解吸溶剂种类 解吸溶剂1汨(b)溶液pH值(，)盐离子浓度(d)萃取时间解吸时间图3 SBSE搅拌棒对硝基苯酚异构体萃取条件的优化Fig. 2 Optimization of the extraction conditions for nitr
2、ophenol isomers with SBSE表1 3个硝基苯酚异构体的分析参数Tab. 1 Analysis parameters of three nitrophenol isomers化合物线性范用/(ng I/1 )相关系数K(ng - I/*)“(mg I/1)味7%(C=0.8 mg/L)“内精密度(n =5)日间精密度(”=3x5)邻-硝居米的0. ()1 10.000.999 80. ()020. 0072.94.5间-硝基冰给0. 03 10.000.999 90.0060. 0206.47.5肉-硝基茶酚0.999 70. ()04().0103.35.8a花溪河水h加
3、标花溪河水(C=0.8 mg/L)1对-硝基苯酚2间-硝基苯酚3令B-硝基苯酚0510152025保存时间/min图4 SBSE小棒萃取硝基苯酚异构体的HPLCDAD色谱图Fig. 4 The HPLC-DAD chromatograms ofnitrophenol isomers extracted by SBSE表2花溪河水样品的分析测定结果Tab. 2 Determination of water samples from Huaxi River化合物加入量/( mg I/1 )回收率/%(71 =3)/%0. 0295.72.4邻硝基苯基0. 20116.82.95.00110.97.
4、 10.04106.78.7间-硝基苯酚0. 40111.77.55.0088.83.70. 0573.27.5对硝基苯基0. 5088. 17.71.0071.55.8表3本文方法与其他分析方法的比拟Tab. 3 Comparison of this method with other analytical methods分析物分析方法a之性也火(mgL )mg L 1 )回收率/%方法邻、间、对硝庙笨酚纳米管修饰电极1. 1-12.50.20-0. 8()90. 1 -108.0文献3邻、间硝基笨酚双浊点萃取-E细管电泳0. 2-5.()0. 16-0. 18文献4邻、间、对硝基茶酚固相萃
5、取-高效液相色谱-紫外吸收0. 5-5.()0. 10-(). 16文献8邻、间、对硝“率酚公墨烯复合材料修饰电极0. 33 976. 500. ()5 0. 34文献15对硝城不的固相萃取超前效液相色诣质谐5x10 150x103. 25x10-。91.6108.0文献16邻、间、对硝基茶酚固相微萃取高效液相色谱紫外吸收0. ()3 -10.000.002 0. 006本文注:一表示文中未列出,作为重要有机合成中间体的邻、间、对硝基苯酚在化工材料、农药和染料等工业领域有着广泛的应用。它们已被 证实为环境内分泌干扰物之一，被联合国环境署列为环境必测工程之一1。硝基苯酚在生产和使用过程中会随生活
6、污水 及工业废水进入环境水体，对动物、微生物、植物和人体健康造成巨大的危害2。这几种异构体具有相似的物理化学性 质，同时测定较难，从而一直是人们关注的课题。目前，环境水体中硝基苯酚的测定方法有色谱法、电化学方法网和毛 细管电泳法4等。其中，色谱法是最常用的分析方法，包括气相色谱、气相色谱质谱联用及液相色谱-质谱联用7 等。色谱法由于检测灵敏度较低而环境水样中硝基苯酚的含量很低，需对样品进行预处理以满足仪器的测定要求。液/ 液萃取、固相萃取网是传统的样品前处理方法，具有较好的富集、净化能力，但大量的有毒、有害有机溶剂的使用， 较复杂的操作以及较多的样品使用量是其主要的缺陷。固相微萃取(soild
7、 phase micro-extraction, SPME)于1989年由加拿大Waterloo大学Pawliszy教授课题组提 出，是一种新型微型化和绿色环保的样品前处理技术。这种方法具有样品用量少、操作简单、富集倍数高的特点，可以 集成样品的吸附、解吸、进样于一体，不使用或使用很少的有机溶剂9-10。SPME有多种萃取形式，包括管内固相微 萃取、固相微萃取纤维和固相微萃取搅拌棒(stir-bar sorptive extraction, SBSE)等。瓜环是一类人工合成的新型大 环化合物。亚甲基桥联不同数目的昔股单元形成不同空腔大小的瓜环(Qn, n=510)。瓜环对分子的识别作用可通 过
8、疏水的空腔和富含翔基氧原子的端口来完成，呈现出作用模式丰富、分子识别能力强的特点。疏水的空腔与中性小分 子或分子的中性局部通过疏水作用发生主客体包结作用，而瓜环的端口因呈负电性可与分子的极性局部发生离子偶极、 氢键等作用11-12。本文团队报道将普通七元瓜环衍生化为单羟基七元瓜环(Q7卜OH)后与端羟基聚二甲基硅氧烷(OH-PDMS) 一 起作为固定相，溶胶凝胶法制备了基于单羟基七元瓜环的固相微萃取搅拌棒并应用于食品中残留雌激素的测定13。本 文基于该萃取小棒良好的分子识别能力，首次对环境水样中的3种硝基苯酚异构体同时进行了富集。为了提高萃取小棒 对硝基苯酚异构体的萃取效率，对影响萃取效率的因
9、素，如萃取时间、溶液pH值、盐离子浓度、解吸溶剂、解吸时间 等进行了优化，并在最优萃取条件下，利用SBSE-高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC) .二极管阵列检测器(diode-array detector, DAD)方法对水中的硝基苯酚异构体进行了测定，取得了满意的结果。1材料与方法1.1 试剂与仪器甲醇、乙睛，色谱纯;磷酸、氯化钠、二氯甲烷，分析纯。三氟乙酸（TFA） , 丫缩水甘油醒氧丙基三甲氧基硅烷 （KH-560）,端羟基聚二甲基硅氧烷（OH-PDMS）,甲基三甲氧基硅烷（MTMOS）,含氢硅油（PMHS）均购自阿
10、拉丁试剂公司（上海）。去离子水由Millipore公司超纯水器制得。对照品邻硝基苯酚、间硝基苯酚和对硝基苯酚购自 阿拉丁试剂公司，用甲醇配成浓度为1.0x10g/mL的混合储藏液，于冰箱中4保存。混合贮备液经甲醇进一步稀释配 成不同浓度的标准工作溶液并于冰箱中4保存。岛津LC-10A高效液相色谱仪（日本），配备自动进样器和二极管阵列检测器（diode-array detector, DAD）; KQ2200型超声波清洗器（昆山超声波仪器）;ZNCL-S-5D多点智能磁力搅拌器（河南予华仪器）。 TGL-16c高速离心机（上海安亭仪器厂）。根据文献14的方法，实验室自制单羟基七元瓜环（Q7-OH
11、）,结构如图1所示。1.2 萃取小棒（SBSE）的制备将1.0 mm x 15 mm的玻璃管作为萃取小棒的载体，其内心密封一段铁丝并两端烧结封死。将此玻璃管浸泡在I mol/L的NaOH溶液中8h,去离子水清洗后再浸泡在0.1 mol/L的HCI溶液中2 h,最后用去离子水洗至中性并在120 C 下烘干备用。SBSE小棒的制备：于10mL聚氯乙烯离心管中依次加入Q7OH20mg, TFA （95%） 300 pL, CHCI 500 pL, OH-PDMS 300 pL, MTMOS 50 pL, PMHS 50 pL和KH-560 300 pL。离心管在涡旋振荡器上混匀3 min后，在高速
12、离心机上以12 000r/min离心5 min,用滴管移出上清液置于另一个10 mL的聚氯乙烯离心管中。将处理好的玻璃管放 入此清液中进行反徨涂覆，涂覆的次数可控制小棒涂层的厚度。涂覆好的SBSE小棒于氮气保护下室温放置12 h成胶。小棒老化：为使凝胶涂层固化，需对小棒进行加热老化处理。成胶后的小棒放置于100 mL圆底烧瓶中，氮气保 护下升温老化小棒。温度设置为60 C,小棒保持30 min,然后升温至120 停留1 h,最后温度升到180 保持1 h 完成小棒的老化。小棒清洗：小棒涂层上未反响的固定相可通过清洗的方法去除。将制备好的小棒在80C蒸储水中浸泡清洗1 h可 去除未反响的Q乃-O
13、H,然后再放入40 二氯甲烷中回流清洗2 h可去除未反响的其他有机反响试剂。制备好的小棒 经电镜测量厚度大约为440 pm ,如图2所示。小棒的涂层外表具有粗糙、多孔的特点，与文献13-14的结果一致， 因此有关的表征如电镜、红外、热重等不过多赘述。（a）小棒涂层的厚度（b）小棒的形状1.3 SBSE-HPLC实验方法在10 mL带密封垫的样品瓶中放入1根自制的萃取小棒，精密加入经0.45 pm滤膜过滤后的水样样品8.0 mL, 并在室温下搅拌萃取50 min。萃取完成后，取出小棒用无尘纸擦干外表的水分。将萃取后的小棒放入200 pL样品瓶内 插管中，加入甲醇100 pL,超声解吸10 min
14、。取20 PL解吸液进行HPLC分析。小棒每次使用后，需用5 mL甲醇分 别超声洗涤3次以除去吸附的杂质。1.4 色谱条件色谱柱，ODS-BP（SinoChrom, 4.6 mmx200 mm, 5 pm）;检测波长 220 nm;流动相，甲醇-水（用磷酸调 pH=5.0）, 其中甲醇的体积分数为30%流速0.8 mL/min;进样量20四;温度，室温。2结果与讨论2.1 萃取条件的优化用自制的SBSE小棒考察了解吸溶剂的种类、溶液的pH值、盐离子浓度、萃取时间、解吸时间等因素对3种硝 基苯酚异构体萃取效率的影响，确定最正确萃取条件。2.1.1 解吸溶剂的考察解吸溶洌是影响小棒萃取效率比拟重要
15、的因素。合适的解吸溶剂可使吸附的待测物质完全解吸以提高萃取效率。 本实验考察了甲醇、乙醇和乙睛作为解吸溶剂对硝基苯酚异构体萃取效率的影响，结果如图3 (a)所示。从图3 (a) 可以看出：甲醇对3种化合物的解吸效果最好，应选做本实验的解吸剂;自制小棒对邻硝基苯酚的萃取效率最好，这可能 是因为邻硝基苯酚的空间位阻最小，最有利于分子上的苯环进入七元瓜环的空腔而发生相互作用。2.1.2 萃取溶液的pH值酸性或碱性化合物在溶液中的存在形式受溶液pH值的影响很大。一般中性存在形式更利于涂层的萃取。酚类化合 物是酸性物质，在酸性条件下以分子形式存在有利于萃取。从图3(b)可以看出，3种硝基苯酚异构体在pH
16、为3时， 萃取效率均为最正确，应选择pH为3作为最正确萃取pH值。2.1.3 盐离子浓度盐效应可通过增加溶液中离子强度的方式降低有机物在水中的溶解度，使待测物以分子形式析出，有利于在涂层 上的吸附。从图3 (c)可以看出：随着加入盐离子浓度的增大，3个硝基苯酚化合物的萃取效率提高，盐离子浓度为 0.30 g/mL时几乎已到达其饱和浓度，因此采用饱和氯化钠作为盐离子浓度。2.1.4 萃取时间萃取时间越长，待测物在小棒上吸附的量越多，最后吸附到达平衡，萃取量不再增加。从图3(d)可以看出，当 萃取时间为50 min时，吸附量到达最大，所以选择50 min为最正确萃取时间。2.1.5 解吸时间解吸时
17、间越长，目标物解吸得越彻底，但过长的解吸时间会缩短涂层的使用寿命。从图3 (e)可以看出，解吸时 间为10 min时就可获得最好的萃取效率，因此选择10 min为最正确解吸时间。2.2 SBSE-HPLC-DAD分析方法的方法学验证精密量取相同体积不同浓度的混合标准溶液分别加入到8mL水样中，配成一系列浓度的加标溶液，按照1.3和 1.4的方法进行处理并测定。以3个硝基苯酚异构体的峰面积对质量浓度进行线性回归，得到3个硝基苯酚的线性范围 和相关系数。方法的检测限(Ld)和定量限(Lq)分别按照公式L = 3S/S和L=10S/S进行计算，其中，S为10次空 白试剂所测值的标准偏差，S为分析校准
18、曲线的斜率。日内精密度以浓度为0.8 mg/L的样品在一日内连续测定5次的相 对标准偏差来表示;日间精密度那么以同一个样品连续测定5 d,每天重复测定3次的相对标准偏差表示。所有测定结果如 表1所示。从表1可以看出：本法的线性范围为0.0110.00mg/L,检测限为0.0020.006 mg/L,日内、日间精密度 的相对标准偏差(D)为2.9%7.5%,说明该法具有较宽的线性范围、良好的灵敏度和重现性。2.3 实际样品分析为检验本方法的适用性，对当地花溪河水、自来水和校园湖水进行了检测，没有检测出3种硝基苯酚异构体。以 花溪河水为样本，在高、中、低3个浓度水平进行了加标回收率实验，相关的色谱
19、图如图4所示，测定结果见表2。3 个加标浓度的平均相对回收率为71.5%116.8%,相对标准偏差为2.4%8.7%,说明所建立方法的准确度和精密度良 好，可用于实际水样中3种硝基苯酚异构体的测定。2.4 本文方法与其他分析方法的比拟将本文方法与文献报道的测定水样中硝基苯酚异构体的方法进行了比拟，结果见表3。从表3可以看出，本文方 法具有更好的灵敏度，样品处理简单、环保、取样量少。结果说明：自制萃取小棒选择性好，萃取性能高，能较好地提 高仪器测定的灵敏度。3结论通过溶胶凝胶方法制备了基于单羟基七元瓜环的固相微萃取搅拌棒，联用HPLC-DAD建立了水样中3种硝基苯 酚异构体的测定方法。通过对萃取
20、条件的优化，得到固相微萃取搅拌棒对酚类物质萃取的最优萃取条件为：萃取时间50 min,溶液的pH值为3.0,盐离子浓度为饱和氯化钠，解吸溶剂为甲醇，解吸时间10 min。方法的样品预处理简单、 环保、样品用量少。测定结果准确、灵敏，满足水样中痕量硝基苯酚异构体的检测要求。参考文献：1BHUSHANB, CHAUHAN A, SAMANTASK, et al. Kinetics of biodegradation of p-Nitrophenol by different bacteriaJ. Bio-chemical & Biophysical Research Communications,
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