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1、关于微生物的实验室培养详解现在学习的是第1页，共63页微生物包括：微生物包括：细菌、蓝藻、细菌、蓝藻、放线菌、支原体放线菌、支原体、衣原体、衣原体原核生物界原核生物界真菌真菌 原生生物原生生物没有细胞结构的生物没有细胞结构的生物真核真核生物生物有细有细胞结胞结构的构的生物生物现在学习的是第2页，共63页菌落：菌落：不同的细菌的菌落特征不不同的细菌的菌落特征不同同 菌落是鉴定菌种的重要依菌落是鉴定菌种的重要依据。据。一个细胞繁殖而一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子来的肉眼可见的子细胞群体。细胞群体。现在学习的是第3页，共63页现在学习的是第4页，共63页培养皿培养皿现在学习的是第5页，共63页按成分
2、分按成分分按按功能分功能分按物理状态分按物理状态分培养基类型培养基类型合成培养基合成培养基天然培养基天然培养基基本培养基基本培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基分类：分类：（一）培养基：（一）培养基：人们按照微生物对营养人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养殖的营养基质。基质。现在学习的是第6页，共63页选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培
3、养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞现在学习的是第7页，共63页根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的微生物。例如，在培养基中加入伊红和美蓝，可微生物。例如，在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大
4、肠杆菌等细菌：如果有等细菌：如果有大肠杆菌大肠杆菌，其代谢产物就与，其代谢产物就与伊红和伊红和美蓝美蓝结合，使菌落呈结合，使菌落呈深紫色深紫色，并，并带有金属光泽带有金属光泽。鉴别培养基鉴别培养基现在学习的是第8页，共63页不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮氮源源、无机盐无机盐等营养物质，另外还需要满足微生等营养物质，另外还需要满足微生物生长对物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧
5、啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等等的要求。的要求。培养基的营养物质培养基的营养物质现在学习的是第9页，共63页1、获得纯净培养物的关键是什么？2、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面 3、什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？（二）无菌技术（二）无菌技术现在学习的是第10页，共63页消毒与灭菌消毒与灭菌消毒：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。是最重要的技术
6、。现在学习的是第11页，共63页消毒的方法：消毒的方法：1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100煮沸煮沸5-6min2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 下煮下煮30min或或 80 下煮下煮15min3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%酒精、新洁尔灭酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4、紫外线或化学药物消毒、紫外线或化学药物消毒现在学习的是第12页，共63页灭菌的方法：灭菌的方法：1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 下加热下加热1-2h。3、高压蒸汽灭菌：、高压蒸汽灭菌：100kPa、121 下维持下维持15-30min.
7、现在学习的是第13页，共63页1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者自答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。现在学习的是第14页，共63页2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实
8、验操作者的双手答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要）需要消毒。消毒。现在学习的是第15页，共63页实验操作实验操作 本实验用牛肉膏蛋白胨固体培养基进本实验用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，可分为行大肠杆菌的纯化培养，可分为制备制备培养基培养基和和纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌两个阶段进行。两个阶段进行。现在学习的是第16页，共63页2.1微生物的实验室培养.flv现在学习的是第17页，共63页现在学习的是第18页，共63页 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度能用
9、来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。物污染培养基。现在学习的是第19页，共63页3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的
10、部位，这个平板还能用来培养皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可避免培养基中的水分过快地挥发。避免培养基中的水分过快地挥发。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。物。现在学习的是第20页，共63页纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌接种方法有：接种方
11、法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法现在学习的是第21页，共63页 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作表面连续划线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面散到培养基的表面.在数次划线后在数次划线后,可以分离到由一个细胞繁可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落这就是菌落.现在学习的是第22页，共63页现在学习的是第23页，共63页现在学习的是第24页，共63页 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线
12、之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？烧接种环吗？为什么？答：操作的答：操作的第一步灼烧第一步灼烧接种环是为了接种环是为了避免接种环避免接种环上可能存在的微生物污染培养物上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧每次划线前灼烧接种环是为了接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得
13、到菌落。每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线划线结束后灼烧结束后灼烧接种环，能接种环，能及时杀死接种环上残留的菌及时杀死接种环上残留的菌种种，避免细菌污染环境和感染操作者。，避免细菌污染环境和感染操作者。现在学习的是第25页，共63页 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线
14、条答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。现在学习的是第26页，共63页现在学习的是第27页，共63页现在学习的是第28页，共63页 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第想一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？应从操作
15、的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。等等。现在学习的是第29页，共63页固体培养基：菌落固体培养基：菌落现在学习的是第30页，共63页 1 1、临时保藏：接、临时保藏：接种到固体斜面培养基种到固体斜面培养基，菌落长成后置于，菌落长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。2 2、长期保存：甘、长期保存：甘油冷冻管藏法油冷冻管藏法现在学习的是第31页，共63页现在学习的是第32页，共63页现在学习的是第33页，共63页
16、现在学习的是第34页，共63页现在学习的是第35页，共63页现在学习的是第36页，共63页现在学习的是第37页，共63页现在学习的是第38页，共63页现在学习的是第39页，共63页现在学习的是第40页，共63页以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基 是是分离分离尿素尿素细菌细菌判断该判断该培养基培养基有无选有无选择性择性实验组实验组对照组对照组培养基类型培养基类型是否是否接种接种 目的目的 结果结果只生长尿只生长尿素细菌素细菌生长多种生长多种微生物微生物是是现在学习的是第41页，共63页以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基牛肉膏牛肉膏蛋
17、白胨蛋白胨培养基培养基 是是分离分离尿素尿素细菌细菌判断该判断该培养基培养基有无选有无选择性择性实验组实验组对照组对照组培养基类型培养基类型是否是否接种接种 目的目的 结果结果只生长尿只生长尿素细菌素细菌生长多种生长多种微生物微生物是是现在学习的是第42页，共63页现在学习的是第43页，共63页现在学习的是第44页，共63页现在学习的是第45页，共63页现在学习的是第46页，共63页现在学习的是第47页，共63页现在学习的是第48页，共63页 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm3cm左左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。右，再取样，将样品
18、装入事先准备好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。灭菌。制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择培养基选择培养基。现在学习的是第49页，共63页现在学习的是第50页，共63页实验时要对实验时要对培养皿作好标记培养皿作好标记。注明培养。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。基类型、培养时间、稀释度、培养物等。现在学习的是第51页，共63页稀释倍数稀释倍数目的目的细菌细菌10104 4、10105 5、10106 6放线菌放线菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10
19、104 4现在学习的是第52页，共63页要将哪些培养皿进行培养？要将哪些培养皿进行培养？现在学习的是第53页，共63页现在学习的是第54页，共63页现在学习的是第55页，共63页现在学习的是第56页，共63页现在学习的是第57页，共63页现在学习的是第58页，共63页现在学习的是第59页，共63页现在学习的是第60页，共63页现在学习的是第61页，共63页 根据细胞生存所需物质的种类和数量根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。辅助物质。优点：优点：标准化生产，组分和含量相对标准化生产，组分和含量相对固定固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，不能完全满足缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。体外细胞生长需要。合成培养基合成培养基:现在学习的是第62页，共63页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第63页，共63页