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1、-枯草芽孢杆菌常用培养基配方枯草芽孢杆菌常用培养基配方： 1l蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂 枯草芽孢杆菌原生质体的制备 1培养枯草芽孢杆菌 取亲本菌株t4412、tt2新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(cm)的试管中，36振荡培养14h，各取1ml菌液转接入装有20ml液体完全培养基的250ml锥形瓶中，36振荡培养3h，使细胞生长进入对数前期，各加入25u/ml青霉素，使其终浓度为0.3u/ml，继续振荡培养2h。 2.收集细胞 各取菌液10ml，4000r/min离心10min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。如此洗涤两次，将菌
2、体悬浮10mlsmm中，每ml约含108109活菌为宜。 3.总菌数测定 各取菌液0.5ml，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7各1ml(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36培养24h后计数。此为未经酶处理的总菌数。 4.脱壁 二株亲本菌株各取5ml菌悬液，加入5ml溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100ug/ml，混匀后于36水浴保温处理30min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000r/min离心10min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5ml高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。 5.剩余菌数测定 取0.5ml上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4稀释液各0.1ml，涂布于完全培养基平板上，36培养2448h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。 计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。-第 1 页-