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1、专题二细胞工程动物细胞工程2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体教学目标知识目标 掌握动物细胞融合和植物体细胞杂交区别和联系。 简述动物细胞融合和单克隆抗体制备过程。 了解单克隆抗体在实践中应用。能力目标让学生掌握获取知识和探索生物科学基本方法，使学生了解生物科学认识模式以发展学生创造性能力。情感目标介绍动物细胞融合和单克隆抗体技术发展及一些新研究成果，使学生明确人们对生命奥秘揭示愈加广泛和深入，知识不断更新并向前发展，认识到学无止境，形成终生学习意识。教学重点 单克隆抗体制备教学难点 单克隆抗体制备教学过程一、动物细胞融合自主学习1、概念：_或_动物细胞结合形一个细胞过程，也称细胞杂交。2、结果
2、：形成_。3、过程：两个或多个细胞-灭火病毒、PEG.电激-_。4、意义：克服了_不亲和性，成为研究_、_、肿瘤和 _培育重要手段。合作探究1、植物体细胞杂交和动物细胞融合区别（学生填下表）植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞膜流动性融合过程先使细胞分散开诱导方法电激、振动、离心、聚乙二醇结果应用培育植物新品种意义相同点原生质体融合原理相同；原生质体融合方法相似过程图解2植物体细胞杂交和动物细胞融合主要区别是什么？3、 为什么可以使用灭活病毒促进动物细胞融合？4、不灭活病毒能作为诱导剂吗？病毒在基因工程中有应用于哪方面？知识阅读：阅读课本P52中小字，了解一下动物细胞融合技术发展简史。二
3、、单克隆抗体自主学习（一）、抗体产生细胞：_。 成分：_。特点：从_中分离出抗体产量低、纯度低、特异性差。合作探究1、传统抗体生产方法及缺陷是什么？抗体是从何来？2、体外培养B淋巴细胞有什么特点？3、若要想获得大量单一抗体，如何做呢？4、在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖，那么，怎样解决这一问题呢？5、小结以下内容： 利用_产生特异性抗体功能。 利用_无限增殖特性。 利用_技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。 利用_技术大量培养杂交瘤细胞。（二）、单克隆抗体制备自主学习未融合细胞_ _ _给小鼠注射特定的抗原蛋白培养骨髓瘤细胞从_中分离B淋巴细胞骨髓瘤细胞(1)过程 诱导融合 克隆
4、检测小鼠体内培养体外培养_抗体选择培养基杂交瘤细胞特点：_、_。单克隆抗体优点：_、_、_。合作探究1、如何获得B淋巴细胞？2、如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时，会有几种融合方式（类型）？3、 选择杂交瘤细胞进行几次筛选？每次筛选目是什么？4、 次过程用到了哪些技术手段？5、如何理解单克隆抗体?拓展资料 杂交瘤细胞抗体检测及克隆化培养介绍融合后细胞经选择性培养基培养后，能存活细胞就是杂交瘤细胞，但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔不超过一个细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌抗体，那么上清液
5、可和特定抗原结合培养孔为阳性孔。阳性孔中细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增殖细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞克隆化培养。、单克隆抗体应用自主学习1、作为诊断试剂，具有_、_、_、_优点。2、用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗_、可制成_。合作探究生物导弹成分和作用?和常规癌症治疗方法相比优点有哪些？例1、如图是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答：图中A过程，从小鼠脾脏中取得“小鼠细胞”是_细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射特定物质是_。图中B过程是细胞融合，该过程需要用灭活_、聚乙二醇或电
6、激等诱导。 特异性抗体获取方法也可以采用向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。和这种方法制备抗体相比，单克隆抗体具有_等特点。(4)动物细胞体外培养需要满足环境条件有_。(5)单克隆抗体技术还有哪些用途？_。5、右图示细胞融合技术一些过程，据图回答：(1)从A和B细胞到C细胞过程中，必须用_处理。(2)若A、B细胞为植物细胞，那么这样细胞已经用酶降解脱掉了细胞壁，这种酶可能是_，由此生成A和B细胞称为_。由A、B到C过程中，常用物理方法有_。融合完成标志是_，形成D细胞还要应用_技术，把其培养成植株。(3)若A细胞为骨髓瘤细胞，B为淋巴细胞，那么D细胞称为_
7、，由D细胞连续分裂产生大量细胞过程，称为_，这种细胞既能无限繁殖，又能产生_。(4)若A为人细胞，B为鼠细胞，并分别用红、绿荧光染料标记细胞上蛋白质，在C细胞阶段，细胞一半发红色荧光，一半发绿色荧光，到D细胞阶段，两种颜色荧光均匀分布，原因是_。(5)若A、B细胞为动物细胞，一般取自_，然后用_将其分散开。由A、B到C过程中，采用不同于植物细胞融合手段是_。(6)若该过程为制备单克隆抗体，A和B融合后形成C有几种？_。随堂练习1动物细胞融合目中，最重要是()A克服远缘杂交不亲和障碍 B制备单克隆抗体 C培育新物种 D生产杂交细胞2(2011年高考江苏卷)关于现代生物技术应用叙述，错误是()A蛋
8、白质工程可合成自然界中不存在蛋白质 B体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体C植物细胞培养技术可用于植物茎尖脱毒 D动物细胞培养技术可用于转基因动物培育3(2011年南京市高二检测)下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射物质和A细胞名称分别为()A抗体、T淋巴细胞 B抗原、T淋巴细胞 C抗体、B淋巴细胞 D抗原、B淋巴细胞4单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛应用。下列关于单克隆抗体叙述，错误是 ()A特异性强、灵敏度高 B和抗癌药物结合可制成“生物导弹” C体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体 D由效应B细胞和骨髓瘤细胞融合而成杂交瘤细胞分泌例2、(200
9、9年高考山东卷)人类在预防和诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病病原体为RNA病毒，该病毒表面A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备流程之一如图：请回答：(1)过程代表是_。(2)过程构建A基因表达载体时，必须使用_和_两种工具酶。(3)过程采用实验技术是_，获得X是_。(4)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产_所制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，和已知病毒进行_比较；或用图中_进行特异结合检测。高二生物作业 第9次 班级： 姓名： 1下列不是细胞融合常用方法是()A细胞培养B灭活仙台病毒诱导C电刺激 D聚乙二醇作为诱导剂2
10、下列过程中，没有发生膜融合是()A植物体细胞杂交B受精过程 C氧进入细胞中线粒体D效应B细胞产生抗体3(2011年陕西咸阳高二检测)关于动物细胞融合说法不正确是()A动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞过程B动物细胞融合后形成具有原来两个或多个动物细胞遗传信息单核细胞称为杂交细胞C常用诱导动物细胞融合手段有：聚乙二醇、灭活病毒、电激、紫外线照射D细胞融合技术突破了有性杂交方法局限，使远缘杂交成为可能4要想获得大量单克隆抗体就必须用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群。其原因是()A在体外培养条件下，B淋巴细胞可以无限增殖B在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上抗
11、体C每一个B淋巴细胞都参和特异性免疫反应D每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体5单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖细胞是()B淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞ABC D6用a表示骨髓瘤细胞，b表示效应B细胞，则细胞融合过程中两次筛选目分别为()Aa、aa、ab、bb、ba、aa、abab培养Ba、aa、ab、bb、bab、bb、bab培养Ca、aa、ab、bb、bab产生特定抗体ab培养Da、aa、ab、bb、baa能无限增殖aa培养7(2011年合肥高二检测)科学家用小
12、鼠骨髓瘤细胞和某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量单克隆抗体，和骨髓瘤细胞融合是()A经过免疫B淋巴细胞B不经过免疫T淋巴细胞C经过免疫T淋巴细胞 D不经过免疫B淋巴细胞 8关于单克隆抗体，下列叙述不正确是()A可以制成诊断盒，用于疾病诊断B可以和药物结合，用于病变细胞定向治疗C可以利用基因工程技术生产D可以在生物体内生产，不能体外生产9用动物细胞工程获得单克隆抗体，下列实验步骤错误是()A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体B淋巴细胞B用纤维素酶处理B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞C用聚乙二醇作诱导剂，使能产生抗体B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合D筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体细胞群
13、，培养后提取单克隆抗体10将小鼠骨髓瘤细胞和一种B淋巴细胞融合，可使融合细胞经培养产生单克隆抗体，下列有关此项技术说法中不正确是()A动物细胞融合和动物细胞培养技术是单克隆抗体技术基础B实验中杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖方式是主动运输CB淋巴细胞和骨髓瘤细胞直接放入培养液中就能融合为杂交瘤细胞D按照培养基用途分类，实验中筛选杂交瘤细胞培养基是选择培养基11运用动物体细胞杂交技术可实现基因定位。研究发现：用人细胞和小鼠体细胞进行杂交得到杂种细胞含有双方染色体。杂种细胞在持续分裂过程中仅保留鼠染色体而人类染色体则逐渐丢失，只剩一条或几条。下图是人缺乏HGPRT酶突变细胞株(HGPRT)和小鼠缺乏
14、TK酶细胞株(TK)融合后并在HAT培养液中培养过程，结果表明最终人染色体在融合细胞中仅存有3号染色体或17号染色体或两者都有。已知只有同时具有HGPRT酶和TK酶融合细胞才可在HAT培养液中长期存活和繁殖。(1)体细胞杂交克服了_，过程常用生物方法是_。(2)从培养过程看HAT培养液不仅能提供养料，还起_作用。(3)从图示结果看，可以确定人_基因位于_号染色体上；该方法可以对鼠基因定位吗？_。(4)干扰素是效应T细胞分泌一种淋巴因子，利用动物细胞融合技术，将效应T细胞和骨髓瘤细胞融合并筛选得到杂交瘤细胞。该细胞应该具有_特点。12(2011年南充高二检测)近年来，我国死于狂犬病人数有上升之势
15、。狂犬病病毒核酸是RNA，机体感染病毒后产生特异性IgG抗体，能消除狂犬病病毒，这是接触狂犬病病毒后及时注射疫苗和特异性抗体重要依据。我国利用地鼠肾细胞培养狂犬病疫苗，已取得良好效果。请根据上述材料，回答下列问题：(1)狂犬病病毒毒力可发生变异。从自然感染动物体内分离病毒株称为野毒株，其致病力强。将野毒株在家兔脑_内连续传50代后，变成固定毒株。固定毒株使人及动物致病。(2)特异性抗体获取方法可用单克隆抗体制备法。在制备单克隆抗体过程中，应用动物细胞工程技术是_。13、(2009年高考江苏卷)动物器官体外培养技术对于研究器官生理、病理过程及其机制意义重大。下图是一个新生小鼠肝脏小块培养装置示意
16、图。请回答下列问题。(1)肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞_。(2)气室中充入50%CO2气体主要作用是_。(3)培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要注意选择抗生素_，以保证抗生素对肝脏无害。动物细胞融合和单克隆抗体同步检测一、选择题1单克隆抗体制备过程中使用骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋 呤和胸腺嘧啶培养基（HAT）中无法生长；而小鼠脾细胞是正常细胞，在HAT培养基 上可正常存活。用聚乙二醇诱导细胞融合后，经过数代培养，最终可在HAT培养基上存 活并能产生单克隆抗体细胞是 （ ）A骨髓瘤细胞之间形成融合细胞 B脾细胞之间形成融合细胞C骨髓瘤细胞和脾细胞之间形成融合细
17、胞 D脾细胞2研究单克隆抗体治疗癌症思路是（ ）A利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C抗癌物质在克隆细胞中大量合成 D单克隆抗体携带抗癌药物特异性地和癌细胞结合3科学家用小鼠骨髓瘤细胞和某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量单克隆抗体，和骨髓瘤细胞融合是（ ） A经过免疫B淋巴细胞B不经过免疫T淋巴细胞 C经过免疫T淋巴细胞D不经过免疫B淋巴细胞4用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误是（ ）A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体B淋巴细胞B用纤维素酶处理B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞
18、融合D筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体5只能使动物细胞融合常用诱导方法是 （ ）APEGB灭活病毒 C电刺激 D离心6单克隆抗体是由下列哪种细胞产生 （ ）A.B淋巴细胞 BT淋巴细胞 C骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞7用于动物细胞培养组织和细胞大都取自胚胎或出生不久幼龄动物器官或组织，其主要原因是这样组织细胞 （ ）A.容易产生各种变异 B具有更强全能性 C.取材十分方便 D分裂增殖能力强8.动物细胞融合和植物体细胞杂交比较中，正确是（ ）诱导融合方法完全相同 所用技术手段不相同 所采用原理完全相同 都能形成杂种细胞A.B. C.D.9动物细胞融合和植物原
19、生质融合决定于 （ ）A.细胞膜流动性 B细胞膜选择透过性C.细胞质流动性D细胞质酶活性10.从母羊甲体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核卵细胞中，融合后细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙子宫内，出生小羊大多数性状 （ ）A.难以预测 B.像甲 C.像乙 D.像丙11.“生物导弹”是指 （ ）A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体B淋巴细胞D.在单抗上连接抗癌药物12.动物细胞工程技术基础是 （ ）A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养13下列哪项属于克隆（ ）A将鸡某个DNA片段整合到小鼠DNA分子中 B将抗药菌某基因引入草履虫细胞内C将鼠骨髓瘤细胞和
20、经过免疫脾细胞融合成杂交瘤细胞 D将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系14单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活增殖细胞是B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D15关于单克隆抗体，下列叙述不正确是（ ） A可以制成诊断盒用于疾病诊断 B可以和药物结合，用于病变细胞定向治疗 C可以利用基因工程技术生产 D可以在生物体内生产，不能体外生产16（多选）下列关于单克隆抗体制备和应用叙述中，正确是（ ）AB淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，一般不需要灭活仙台病毒或聚乙二醇诱导
21、B融合后形成杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克隆抗体C体外培养时，一个效应B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖D单克隆抗体和常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，优越性明显17（多选）1975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中和单克隆抗体制备有关是（ ）A.效应B细胞 BT淋巴细胞C.骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞二、非选择题1.下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：（1）图中A过程是从小鼠脾脏中取得_细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。（2）B过程是一个_过程，该过程进行需要灭活_或_诱导。（3）单克隆抗体在疾病诊断、治疗和预防方面，和常
22、规抗体相比，其特点是_2.两场筹备了10年“太空结合”首次在神舟八号飞船上举行了,“新人”之一是小白鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞,新人在“产房”电融合仪内孕育新生命。160min后,中国首批“太空娃娃”终于顺利诞生。“太空娃娃”诞生和地面实验如图所示。请回答下列问题：(1)小白鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞能融合在一起,体现了细胞膜具有_特点。(2)若用于SARS预防上,则宜采用_细胞。科学工作者正在研究治疗癌症使用生物导弹是_。(3)B淋巴细胞和T淋巴细胞都是由_细胞形成。这种相同细胞后代,在形态、结构和生理功能上产生稳定差异过程,叫做_。(4)鼠淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后,在培养时通过_（有丝/减数
23、）分裂方式大量繁殖。细胞中染色体数目和淋巴细胞相比有何特点？_；要观察融合后细胞中染色体形态、数目,可用一定浓度_处理。(5)融合细胞具有两种细胞特性,即_和_。31975年科学家首次利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。请观察下图，回答问题：（1）单克隆抗体是指 ，其特点是 。（2）1984年以来，科学家针对如右图所示单克隆抗体来自 ，应用于人体，会作为_ 产生 ，加速排斥反应，以及完整抗体分子相对分子质量过大，难以穿透肿瘤组织，达不到有效治疗浓度等问题，制备出可用于肿瘤治疗相对分子质量小单克隆抗体。（3）制备单克隆抗体B淋巴细胞一般从_ （器官） 培养基特殊成分主要作用次黄嘌呤骨髓瘤细
24、胞不能利用氨基蝶嘌呤阻断DNA合成胸腺嘧啶核苷脾细胞用于合成DNA中采集。从下表看，用于筛选杂交瘤细胞是特定 培养基。（4）大量制备单克隆抗体方法主要有两种：体外培养法，可获得10g/mL抗体；动物体内诱生法可获得520mg/mL抗体。你选择方法及原因是 。2右图为某同学根据杂交瘤技术方法，设计生产破伤风杆菌抗体实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是。（2）图中为过程，常用作为诱导剂。该细胞继承了，因此不仅能分泌，还有_本领。（3）该方案目是_。参考答案：一、选择题参考答案：一、选择题CDABB DDCAB DDDAD （BCD）（ABCD）二、非选择题 1.（1）效应B
25、抗体 抗原 （2）细胞融合 仙台病毒 聚乙二醇 （3）特异性强、灵敏度高2.（1）一定流动性 （2）SARS病毒感染后产生效应B细胞,单克隆抗体+抗癌药物（3）造血干细胞 细胞分化（4）有丝,加倍,龙胆紫 （5）无限增值,产生单一抗体39（1）卵巢和精巢 410-3 既保证了染色体形态正常,又使细胞分裂处于中期细胞比例最高。 3（1）化学性质单一，特异性强抗体 特异性强，灵敏度高（2）鼠 异物 免疫反应 （3）脾 选择 （4）大量生产选，小规模生产选 （答案合理即可）三、应用创新1、（1）不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体B淋巴细胞（2）细胞融合 灭活病毒（或PEG） 双亲细胞遗传物质 特异性抗体 在体外培养条件下大量增殖（3）制备单克隆抗体w.w.w.k.s.5.u.c.o.m