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1、专题二细胞工程.动物细胞工程2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体课前预习学案一、预习目标预习动物细胞融合和单克隆抗体制备过程，了解单克隆抗体在医学实践中应用，并说其应用实例。“二、预习内容、动物细胞融合1、概念：_或_动物细胞结合形一个细胞过程，也称细胞杂交。2、结果：形成_。3、过程：两个或多个细胞_。4、意义：克服了_不亲和性，成为研究_、_、肿瘤和 _培育重要手段。、单克隆抗体1、抗体产生细胞：_。 成分：_。特点：从_中分离出抗体产量低、纯度低、特异性差。2、单克隆抗体制备给小鼠注射特定的抗原蛋白培养骨髓瘤细胞从_中分离B淋巴细胞骨髓瘤细胞_抗体(1)过程杂交瘤细胞特点：_、_。单克隆抗
2、体优点：_、_、_。、单克隆抗体应用1、作为诊断试剂，具有_、_、_、_优点。2、用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗_、可制成_。三、提出疑惑同学们，通过你自主学习，你还有哪些疑惑，请把它填在下面表格中疑惑点疑惑内容课内探究学案一、学习目标1、 掌握动物细胞融合和植物体细胞杂交区别和联系。2、 简述动物细胞融合和单克隆抗体制备过程。3、 了解单克隆抗体在医学实践中应用，并说其应用实例。学习重难点：单克隆抗体制备二、学习过程(一) 动物细胞融合探究一：动物细胞融合1、植物体细胞杂交和动物细胞融合区别（学生填下表）植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞膜流动性融合过程先使细胞分散开诱导方法电
3、激、振动、离心、聚乙二醇结果应用培育植物新品种意义相同点原生质体融合原理相同；原生质体融合方法相似2植物体细胞杂交和动物细胞融合主要区别是什么？3、为什么可以使用灭活病毒促进动物细胞融合？4、不灭活病毒能作为诱导剂吗？知识阅读：阅读课本P52中小字，了解一下动物细胞融合技术发展简史。（二）单克隆抗体探究二：单克隆抗体制备原理1、传统抗体生产方法及缺陷是什么？抗体是从何来？2、B淋巴细胞有什么特点？3、若要想获得大量单一抗体，如何做呢？4、在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖，那么，怎样解决这一问题呢？5、小结以下内容： 利用_产生特异性抗体功能。 利用_无限增殖特性。 利用_技术将
4、两种细胞融合获得杂交瘤细胞。 利用_技术大量培养杂交瘤细胞。探究三：单克隆抗体制备过程1、如何获得B淋巴细胞？2、如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时，会有几种融合方式（类型）？3、 选择杂交瘤细胞两步筛选目各是什么？4、如何进行杂交瘤细胞抗体检测及克隆化培养？（教师讲解为主）融合后细胞经选择性培养基培养后，能存活细胞就是杂交瘤细胞，但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔不超过一个细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌抗体，那么上清液可和特定抗原结合培养孔为阳性孔。阳性孔中细胞还不能保证是来自单个细
5、胞，挑选阳性孔细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增殖细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞克隆化培养。探究四：单克隆抗体应用1、单克隆抗体应用有哪些？2、生物导弹组成及优点（三）反思总结 (四)当堂检测1、基因型为Aa和基因型为Bb动物体细胞混合，用灭活仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型细胞 ( )AAAaa BAaBb CAabb DBBbb2、动物细胞融合和植物体细胞杂交比较中，正确是 ( )诱导融合方法完全相同 所用技术手段不相同 所采用原理完全相同 都能形成杂种细胞A.B. C.D.3、关于单克隆抗体，下列叙述不正确是( )A、可以制成诊断盒用于疾病珍断 B
6、、可以和药物结合，用于病变细胞定向治疗 C、可以利用基因工程技术生产 D、可以在生物体内生产，不能体外生产4、“生物导弹”是指( )A、单克隆抗体 B、带有特定药物单克隆抗体C、杂交细胞 D、B淋巴细胞课后练习和提高1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性是( )A、融合原理 B、融合优点 C、融合诱导手段 D、融合过程2、下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射物质和A细胞名称为( )A、抗体、T淋巴细胞 B、抗原、T淋巴细胞C、抗体、B淋巴细胞 D、抗原、效应B淋巴细胞3、单克隆抗体和血清抗体相比，其优越性在 于( )A、单克隆抗体能够制成“生物导弹” B、单
7、克隆抗体能够在体外制备C、单克隆抗体比血清抗体特异性强、免疫活性高D、单克隆抗体制备过程简单4、单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛应用。下列关于单克隆抗体叙述，错误是( ) A特异性强、灵敏度高 B和抗癌药物结合可制成“生物导弹” C体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体 D由效应B细胞和骨髓瘤细胞融合而成杂交瘤细胞分泌5、试管婴儿、试管苗、克隆羊三者均属于生物工程技术杰出成果,下面对其生物学原理及技术叙述正确是 ( ) A都属于无性生殖,能保持母本性状 B都是细胞工程技术范围C都充分体现了体细胞全能性 D都不会发生基因重组和变异6、右图为细胞融合简略过程，请据图回答：（
8、1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用_ _处理，除去了_；由A、B到细胞C过程中，常用物理方法是_。融合完成标志是_。（2）若A、B是植物细胞，则形成D细胞还要应用_技术把D培养成植株。（3）若A、B是动物细胞，一般取自_，然后用_使其分散开来；由A、B到C过程中，常用不同于植物细胞融合手段是_，所形成D称为_ ，A、B融合为C过程说明了细胞膜具有_。（4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已经被注射了 。注射后小鼠身体发生了相应免疫反应，生成了_，图中B为 。（5）若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C过程中，所形成C有_种，用来培养D细胞应该
9、是_。从中选择出它方法是_培养，获得D后，常用培养方法是培养液中培养和_。动物细胞融合和单克隆抗体导学案答案预习内容：（一）、1、两个；多个 2、杂交细胞 3、结合形成一个细胞过程 4、远缘杂交；细胞遗传；细胞免疫；生物新品种 （二）、1、(1)效应B细胞 (2)蛋白质 (3)血清2、(1)脾脏细胞；自身融合细胞；杂种细胞；杂种细胞；单克隆 (2)迅速大量繁殖；产生专一抗体 (3)特异性强；灵敏度高；产量大（三）、1、准确；高效；简易；快速 2癌症；生物导弹学习过程：探究一：动物细胞融合1、植物体细胞杂交和动物细胞融合区别（学生填下表）植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞膜流动性细胞膜流
10、动性融合过程先除去细胞壁先使细胞分散开诱导方法电激、振动、离心、聚乙二醇电激、灭活病毒、聚乙二醇结果杂种植株杂交细胞应用培育植物新品种主要用于制备单克隆抗体意义突破远缘杂交不亲和障碍，打破了生殖隔离。相同点原生质体融合原理相同；原生质体融合方法相似2、两者主要区别是什么？（1）动物细胞融合不需要去除细胞壁；（2）动物细胞融合常使用灭活病毒，而植物细胞融合不用；（3）植物杂交细胞可以培养成杂种植株，而动物杂交细胞则不可。3、为什么可以使用灭活病毒促进动物细胞融合？灭活病毒可以使细胞膜上蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。两个不同动物细胞放在一起，用灭活病毒处理细胞后，它们就先质融
11、合，再核融合，进而形成杂交细胞，这个细胞有丝分裂后仍能形成两个完整杂交细胞。4、不灭活病毒能作为诱导剂吗？不能，因为不灭活病毒会感染细胞，而不能诱导细胞融合。探究二：单克隆抗体制备原理1、传统抗体生产方法及缺陷是什么？抗体是从何来？传统抗体生产方法是向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需要抗体。这种生产抗体方法产量和纯度都很低，而且制备抗体特异性差。2、B淋巴细胞有什么特点？B淋巴细胞能产生抗体，但每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3、若要想获得大量单一抗体，如何做呢？我们必须用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，也就是通过克隆形成细胞群，这样细胞群就有可能产生出化学
12、性质单一、特异性强抗体，即单克隆抗体4、在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖，那么，怎样解决这一问题呢？把一种B淋巴细胞和能在体外大量增殖骨髓瘤细胞进行融合，所得到融合细胞既能大量增殖，又能产生足够数量特定抗体。5、填写一下内容： 利用B淋巴细胞产生特异性抗体功能。 利用骨髓瘤细胞无限增殖特性。 利用动物细胞融合技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。探究三：单克隆抗体制备过程1、如何获得B淋巴细胞？要得到能产生所需抗体B淋巴细胞，必须对小鼠进行免疫处理，即给小鼠皮下或脾内注射特定抗原，为保证B淋巴细胞数量和质量，往往需要进行初次免疫、二次免疫和
13、加强免疫，然后取免疫小鼠脾获得B淋巴细胞。2、如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时，会有几种融合方式（类型）？三种，有B淋巴细胞间融合、骨髓瘤细胞间融合以及B淋巴细胞和骨髓瘤细胞间融合。3、 选择杂交瘤细胞两步筛选目各是什么？第一步筛选目是获得杂交瘤细胞。原因是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合后用聚乙二醇处理诱导融合，这样处理后细胞中有以下五种：未融合B淋巴细胞、未融合骨髓瘤细胞、B淋巴细胞和B淋巴细胞融合细胞、骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合细胞、B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合细胞，其中只有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合细胞才是我们需要杂种细胞。第二步筛选目是获得能产生所需单一抗体杂交瘤细胞。因为小鼠体内B淋
14、巴细胞有很多种，因此获得杂交瘤细胞可能产生不同抗体，需要从中筛选出能产生我们所需单一抗体杂交瘤细胞，筛选方法是专一抗体检验。4、如何进行杂交瘤细胞抗体检测及克隆化培养？（教师讲解为主）融合后细胞经选择性培养基培养后，能存活细胞就是杂交瘤细胞，但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔不超过一个细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌抗体，那么上清液可和特定抗原结合培养孔为阳性孔。阳性孔中细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增殖细胞为单克隆细胞。该过
15、程即为杂交瘤细胞克隆化培养。探究四：单克隆抗体应用1、单克隆抗体应用有哪些？（1）可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速优点（2）可用于疾病治疗（3）可用于运载药物（作为运载对应疾病药物“生物导弹”）2、生物导弹组成及优点组成：“生物导弹”单克隆抗体药物放射性同位素优点：疗效高、毒副作用小。当堂练习：1-4、CCDB课后练习和提高：1-5、CDCCB 6、纤维素酶和果胶酶 细胞壁 电激、离心、振动 产生新细胞壁 植物组织培养 动物胚胎或出生不久幼龄动物组织或器官 胰蛋白酶 灭活病毒 杂交细胞 一定流动性 抗原 效应B细胞、记忆细胞、抗体 骨髓瘤细胞 3 杂交瘤细胞 用特定选择培养基 小鼠腹腔内增殖