分析化学吸光光度法.ppt

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1、KMnO4白光白光吸收绿光。浓度越大吸收绿光。浓度越大, ,颜色越深颜色越深, ,吸收越大；吸收越大；浓度越小浓度越小, ,颜色越浅颜色越浅, ,吸收越小。吸收越小。吸光光度法吸光光度法(分光光度法分光光度法)比色法比色法目视比色法目视比色法光电比色法：光电比色计光电比色法：光电比色计分光光度法分光光度法可见分光光度法（本章内容）可见分光光度法（本章内容）紫外分光光度法紫外分光光度法红外吸收光谱法红外吸收光谱法现代分析化学的现代分析化学的“常规武器常规武器”现在学习的是第1页，共60页 特点特点 （与化学分析比较）：（与化学分析比较）：a.灵敏灵敏（可测（可测1%-10-3%微量组分，甚至微量

2、组分，甚至10-4%-10-5% 微量组分微量组分)b.准确准确（Er=2%-5%）c.操作简便操作简便，快速快速（测微量）（测微量）d.应用广应用广（无机、有机均可测）（无机、有机均可测）各类分析方法比较各类分析方法比较分析方法分析方法类别类别含量含量相对误差相对误差滴定分析法滴定分析法化学分析法化学分析法1%0.1%-0.2%重量分析法重量分析法吸光光度法吸光光度法仪器分析法仪器分析法1%2%-5%现在学习的是第2页，共60页光的波粒二象性光的波粒二象性波动性波动性粒子性粒子性 E光的折射光的折射光的衍射光的衍射光的偏振光的偏振光的干涉光的干涉光电效应光电效应hchEE：光子的能量（光子的

3、能量（J, 焦耳）焦耳） ：光子的频率（光子的频率（Hz, 赫兹）赫兹）：光子的波长（光子的波长（nm）c：光速（光速（2.99791010cm.s-1）一、物质对光的选择性吸收一、物质对光的选择性吸收 第一节第一节 吸光光度法基本原理吸光光度法基本原理（普朗克方程）（普朗克方程）（一）单色光和复合光（一）单色光和复合光现在学习的是第3页，共60页hchE，E ； ，E 射射线线x射射线线紫紫外外光光红红外外光光微微波波无无线线电电波波10-2 nm 10 nm 102 nm 104 nm 0.1 cm 10cm 103 cm 105 cm可可 见见 光光可见光可见光：400-750nm近紫外

4、：近紫外：200-400nm近红外：近红外：7502500nm电磁波谱电磁波谱: :按照波长的长短顺序排列而成。按照波长的长短顺序排列而成。现在学习的是第4页，共60页可见光可见光 400-750nm色散色散红红橙橙黄黄绿绿青青青蓝青蓝蓝蓝紫紫650-750 nm600-650 nm580-600 nm500-580 nm490-500 nm480-490 nm450-480 nm400-450400-450 nmnm 单色光单色光:单一波长单一波长的光。通常意义的单色光是指的光。通常意义的单色光是指波长波长处于处于很很窄窄的某一范围的的某一范围的光光。复合光复合光: :由由不同波长不同波长的

5、光组合而成的光。的光组合而成的光。混合混合现在学习的是第5页，共60页 光的互补光的互补: :若若两种两种不同颜色的不同颜色的单色光单色光按一定的强按一定的强度比例度比例混合混合得到白光，那么就称这两种单色光为得到白光，那么就称这两种单色光为互互补色光补色光，这种现象称为，这种现象称为光的互补光的互补。蓝蓝黄黄紫红紫红绿绿紫紫黄绿黄绿绿蓝绿蓝橙橙红红蓝绿蓝绿现在学习的是第6页，共60页完全吸收完全吸收完全透过完全透过吸收黄色光吸收黄色光光谱示意光谱示意表观现象示意表观现象示意复合光复合光（二）物质对光的选择性吸收（二）物质对光的选择性吸收Why ? ? ? 光作用于物质时，物质光作用于物质时，

6、物质吸收了吸收了可见光，而显示出特征的颜色。可见光，而显示出特征的颜色。物质呈现的物质呈现的颜色颜色与与光光有着有着密切的关系密切的关系，物质呈现何种颜色，与，物质呈现何种颜色，与光的组成和物质本身的结构有关。光的组成和物质本身的结构有关。1 1、颜色与光的关系、颜色与光的关系现在学习的是第7页，共60页 物质选择性地物质选择性地吸收吸收白光中白光中某种颜色某种颜色的的光光，物质物质就会就会呈现呈现其其互补色光互补色光的的颜色颜色。 物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就构成了物质对光的选择吸收基础。同，这就构成了物质对光的选择吸收基础。 溶液

7、颜色的溶液颜色的深浅深浅，取决于取决于溶液中吸光物质溶液中吸光物质浓度浓度的的高低高低。 红红蓝绿蓝绿紫红紫红绿绿紫紫黄绿蓝黄黄绿蓝绿蓝橙橙现在学习的是第8页，共60页物质的颜色物质的颜色吸收光吸收光 颜色颜色波长范围波长范围( ,nm)黄绿黄橙红紫红紫蓝绿蓝蓝绿紫蓝绿蓝蓝绿绿黄绿黄橙红400-450450-480480-490490-500500-560560-580580-600600-650650-750互补色互补色现在学习的是第9页，共60页（三）吸收曲线（吸收光谱）（三）吸收曲线（吸收光谱）吸光度吸光度（A）与与波长波长（）的的关系曲线关系曲线 现在学习的是第10页，共60页定性分析

8、基础定性分析基础 不同的物质具有不同的分子不同的物质具有不同的分子结构，因而具有不同的吸收曲线，结构，因而具有不同的吸收曲线，可以根据吸收曲线的形状和最大可以根据吸收曲线的形状和最大吸收波长的位置，对物质进行定吸收波长的位置，对物质进行定性分析。性分析。定量分析基础定量分析基础 在同一波长下，物质的浓度越大，在同一波长下，物质的浓度越大，物质对光吸收程度越大。物质对光吸收程度越大。 图图11-2 KMnO4溶液的吸收曲溶液的吸收曲线线(cKMnO4:abc104Lmol-1cm-1的方法是较灵敏的。的方法是较灵敏的。 与与a的关系为：的关系为： =aM 桑德尔灵敏度桑德尔灵敏度S：当光度仪器的

9、检测极限为：当光度仪器的检测极限为A0.001时，时，单单位截面积光程内位截面积光程内所能所能检出检出的吸光物质的的吸光物质的最低质量最低质量。ug/cm2MS 现在学习的是第17页，共60页垂直照射；入射光为平行单色光且. 1朗伯朗伯比尔定律的使用条件：比尔定律的使用条件：生。无荧光和光化学现象发. 4均匀非散射体系；.2）；（稀溶液，用吸光质点之间无相互作LmolC/01. 0. 3现在学习的是第18页，共60页例：用双硫腙比色法测定镉，已知含 Cd2+浓度为 140g/L，比色皿厚度为 2cm，在 = 520 nm 处测得透光率为 60.3%，求吸光度、金属离子的吸收系数、摩尔吸收系数、

10、金属离子的桑德尔灵敏度。( MCd = 112.4 ) 解：解：220.0603.0lglg1lgTTA11261086. 7101402220. 0;cmgLbCAaabCALmolCMbCAbCACdCd/1025.141.1121014041.112;662)/(1019.31052.341.112234cmgMS)(1052.31025.12220.01156cmmolL现在学习的是第19页，共60页吸光度吸光度A A具有具有加和性加和性。注意：注意：A=A1+A2+.+An 在某一波长，溶液中含有对该波长的光产生吸收的多种物在某一波长，溶液中含有对该波长的光产生吸收的多种物质，那么溶

11、液的质，那么溶液的总吸光度总吸光度等于溶液中等于溶液中各个吸光物质各个吸光物质的的吸光度之吸光度之和和。A1 = 1bc1A2 = 2bc2 An= nbcnA= 1bc1+ 2bc2+ nbcn 现在学习的是第20页，共60页三、引起偏离朗伯比耳定律的因素三、引起偏离朗伯比耳定律的因素负偏离负偏离正偏离正偏离现在学习的是第21页，共60页（一）物理因素（一）物理因素原因：原因：1.1.非单色光；非单色光； 2. 2.非平行入射光；非平行入射光； 3. 3.介质不均匀介质不均匀1.1.非单色光（仪器本身所致）非单色光（仪器本身所致） 仪器使用的是仪器使用的是连续光源连续光源，用单色器分光，由于

12、单色器色散，用单色器分光，由于单色器色散能力的限制和出口狭缝要保持一定的宽度，所以我们能力的限制和出口狭缝要保持一定的宽度，所以我们不可能不可能得到得到纯的单色光纯的单色光。现在学习的是第22页，共60页非单色光引起的偏移非单色光引起的偏移 复合光由复合光由 1和和 2组成，对于浓度不同的溶液组成，对于浓度不同的溶液a和和b，引起引起的的吸光度吸光度的的偏差不一样偏差不一样，浓度大浓度大，复合光引起的，复合光引起的误差大误差大，故在故在高浓度高浓度时线性关系时线性关系向下弯曲向下弯曲。 A 1=A 1-A 2 A 2=A 3-A 4A 1 A 2 直线偏向直线偏向 c 轴轴所以所以，比尔定律比

13、尔定律应在一定的浓度范应在一定的浓度范围内使用围内使用现在学习的是第23页，共60页A克服方法：克服方法：3. 3. 介质不均匀介质不均匀散射、假吸收。散射、假吸收。克服方法：避免溶液产生胶体或浑浊克服方法：避免溶液产生胶体或浑浊2.2.非平行入射光非平行入射光 导致光束的导致光束的平均光程平均光程bb大于大于吸吸收池厚度收池厚度b b，实际测得的吸光度大于实际测得的吸光度大于理论值，产生正偏离。理论值，产生正偏离。 入射光会因散射入射光会因散射 而损失，导致而损失，导致T减小，实测的减小，实测的A A偏高偏高b.b.入射波长入射波长 选择在峰值位置（在波峰选择在峰值位置（在波峰有一个有一个A

14、 A值相差较小的区域）值相差较小的区域）a.a.尽量选用较好的单色器尽量选用较好的单色器现在学习的是第24页，共60页例，聚合引起的对吸光定律的偏离例，聚合引起的对吸光定律的偏离单体：单体：SNH+(CH3)2NN(CH3)22SNH+(CH3)2NN(CH3)2 2 max = 660 nm二聚体：二聚体： max = 610 nmA 660 nm610 nmAC max = 660 nm（二）（二） 化学因素化学因素 1. 1.溶液溶液浓度过高浓度过高；2.2.化学反应化学反应有色物有色物离解离解、缔合缔合. . 现在学习的是第25页，共60页例如例如 Cr2O72- + H2O = 2H

15、CrO4- = 2H+2CrO42- 橙色橙色 黄色黄色 1max=350nm max=375nm 2max=450nm 等吸收点：等吸收点：335 和和445的曲线相交处两吸收物质的吸光度的曲线相交处两吸收物质的吸光度相等相等 现在学习的是第26页，共60页第二节第二节 吸光光度法的仪器吸光光度法的仪器一、目视法一、目视法c4c3c2c1c1c2c3c42.2.特点：简单、可测微量，复合光，误差大。特点：简单、可测微量，复合光，误差大。观察方向观察方向观察方向观察方向1.1.方法：方法：现在学习的是第27页，共60页二、二、 光电比色法光电比色法 通过通过滤光片滤光片得一窄得一窄范围的光范围

16、的光( (几十几十nm)nm)光电比色计结构示意图光电比色计结构示意图1.1.方法：方法：（滤光片获取单色光）（滤光片获取单色光）AC2.2.特点：准确度较高（消除人眼的主观因素）特点：准确度较高（消除人眼的主观因素） 选择性较好（滤光片、参比液可消除干扰）选择性较好（滤光片、参比液可消除干扰）现在学习的是第28页，共60页三、分光光度法三、分光光度法1.1.方法：同上。方法：同上。不同点：不同点：光栅或棱镜获取单色光光栅或棱镜获取单色光四、基本构造四、基本构造 由由光源光源、单色器单色器（分光系统分光系统）、）、吸收池吸收池（比色比色皿皿）、）、检测系统检测系统、信号显示系统信号显示系统五大

17、部分组成。五大部分组成。 单色光纯度高单色光纯度高测定多组分（利用测定多组分（利用A的加和性）的加和性）应用范围广（无色、有色）应用范围广（无色、有色）2.2.特点：特点：现在学习的是第29页，共60页 分光光度计的组成分光光度计的组成光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测系统检测系统显示系统显示系统现在学习的是第30页，共60页紫外紫外- -可见分光光度计组件可见分光光度计组件光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测系统检测系统信号显示系统信号显示系统氢灯，氘灯，氢灯，氘灯，185 375 nm； 钨灯，钨灯，360 2500 nm.基本要求：光源强，能量分布均匀，稳定基本要求：光源强，能量分布均

18、匀，稳定作用：将作用：将复合光色散复合光色散成成单色光单色光棱镜棱镜光栅光栅玻璃，玻璃， 360 3200 nm, 石英，石英，200 4000 nm平面透射光栅，平面透射光栅， 反射光栅反射光栅玻璃，光学玻璃，石英。玻璃，光学玻璃，石英。玻璃比色皿玻璃比色皿可见光区可见光区石英石英比色皿比色皿可见光区、紫外光区可见光区、紫外光区作用：接收透射光，将光信号转换为电信号，并放大作用：接收透射光，将光信号转换为电信号，并放大 光电管，光电倍增管，光电二极管，光导摄像管（多道光电管，光电倍增管，光电二极管，光导摄像管（多道分析器）分析器）表头、记录仪、屏幕、数字显示表头、记录仪、屏幕、数字显示现在学

19、习的是第31页，共60页常用光源常用光源光源光源波长范围波长范围(nm)适用于适用于氢灯氢灯185375紫外紫外氘灯氘灯185400紫外紫外钨灯钨灯3602500可见，近红外可见，近红外卤钨灯卤钨灯2502000紫外，可见，近红外紫外，可见，近红外氙灯氙灯1801000紫外、可见（荧光）紫外、可见（荧光）能斯特灯能斯特灯10003500红外红外空心阴极灯空心阴极灯特有特有原子光谱原子光谱激光光源激光光源特有特有各种谱学手段各种谱学手段现在学习的是第32页，共60页第三节第三节 显色反应及其影响因素显色反应及其影响因素一、显色反应的类型及要求一、显色反应的类型及要求广义，广义，有吸收有吸收 对对

20、显色反应显色反应或或显色剂显色剂的的要求要求：定义定义显色反应：将被测组分转变为显色反应：将被测组分转变为“有色物质有色物质”的反应的反应 选择性好（最好是特效反应）选择性好（最好是特效反应） 对比度要大，对比度要大，(max)最大吸收最大吸收波长相差波长相差60nm以上以上 显色反应的条件要易于控制显色反应的条件要易于控制 灵敏度高（灵敏度高（ max 104Lmol-1cm-1） MR稳定，组成恒定稳定，组成恒定 M无色无色 + R = MR有色有色(主要是主要是络合反应络合反应、氧化还原反应氧化还原反应）现在学习的是第33页，共60页 max对比度对比度( max)：络合物最大吸收波长络

21、合物最大吸收波长( MRmax)与试剂与试剂 最大吸收波最大吸收波( Rmax)之差之差 现在学习的是第34页，共60页络合反应络合反应氧化还原反应氧化还原反应 显色反应类型显色反应类型NNFe2+3现在学习的是第35页，共60页 在分析化学中应用较多的是有机显色剂在分析化学中应用较多的是有机显色剂。二、无机离子的常用显色剂二、无机离子的常用显色剂无机显色剂无机显色剂: : 过氧化氢，硫氰酸盐，氨水和钼酸铵等。过氧化氢，硫氰酸盐，氨水和钼酸铵等。 无机显色剂在光度无机显色剂在光度分析中应用不多，这主要是因为生成的分析中应用不多，这主要是因为生成的络合物稳定络合物稳定性性差，灵敏度和选择性都不高

22、。差，灵敏度和选择性都不高。 有机显色剂有机显色剂与金属离子能形成稳定的、具有特征颜色的螯与金属离子能形成稳定的、具有特征颜色的螯合物，其灵敏度和选择性都较高。合物，其灵敏度和选择性都较高。有机显色剂：有机显色剂：定义定义显色剂：能与被测组分反应生成有色物质的试剂显色剂：能与被测组分反应生成有色物质的试剂现在学习的是第36页，共60页三、影响显色反应的因素三、影响显色反应的因素11112345661.溶液的酸度：溶液的酸度：H+一切反应的基础一切反应的基础 a.影响影响M的存在状态，的存在状态， H+ ，M会水解；会水解； b.影响影响R及颜色，及颜色，H+ ，影响，影响R（大多有机弱酸）大多

23、有机弱酸） 影响颜色（大多酸碱指示剂）影响颜色（大多酸碱指示剂） c.影响影响MRn组成组成现在学习的是第37页，共60页显色反应显色反应酸度酸度由由实验测得：实验测得： 例如：铁（例如：铁（）与水杨酸的显色反应：）与水杨酸的显色反应： pH9 9时，生成时，生成1?3黄色黄色络合物络合物Fe(ssal)33-。pH 曲线中曲线中平坦部分平坦部分所对应所对应的的pH范围范围即为显色反应即为显色反应适适宜宜的的酸度范围酸度范围。 现在学习的是第38页，共60页2.2.显色剂的用量（显色剂的用量（CR） 为使为使显色反应完全显色反应完全，一般，一般R过量过量（同离子效应同离子效应），但），但R也不

24、也不能大过头，否则，物极必反（能大过头，否则，物极必反（盐效应盐效应）。a. R本身有色，空白本身有色，空白 b. 改变络合比，无法定量。例：改变络合比，无法定量。例：Mo()与与SCN-: 浅红橙红浅红, 6SCN, 5SCN2, 3)SCN(Mo)SCN(Mo)SCN(MoCR由实验确定由实验确定现在学习的是第39页，共60页3. 时间时间tAt t 由实验确定。显色后，至少应保持到测定由实验确定。显色后，至少应保持到测定工作做完。工作做完。现在学习的是第40页，共60页4.温度温度T 大多显色反应在大多显色反应在室温室温下进行，但也有需要下进行，但也有需要加热加热才能完成的。才能完成的。

25、 V=f(T) T , V 。但但T 太太 ，有色物分解。，有色物分解。合适的合适的T 由实验确定。由实验确定。5.5.溶剂和表面活性剂溶剂和表面活性剂溶剂影响有色络合物的离解度溶剂影响有色络合物的离解度溶剂影响有色络合物的显色速度溶剂影响有色络合物的显色速度溶剂影响有色络合物的颜色溶剂影响有色络合物的颜色表面活性剂表面活性剂胶束增溶胶束增溶形成三元络合物形成三元络合物现在学习的是第41页，共60页6. 6. 干扰及消除干扰及消除a.干扰干扰干扰物干扰物本身有色本身有色或或与显色剂显色与显色剂显色，+ +干扰干扰干扰物干扰物与与M、N反应反应，使，使显色不完全显色不完全，- -干扰干扰b. b

26、. 消除消除控制酸度控制酸度，使，使M显色，干扰不显色显色，干扰不显色氧化还原，改变干扰离子价态氧化还原，改变干扰离子价态掩蔽掩蔽校正系数校正系数参比液：可消除显色剂和某些离子的干扰参比液：可消除显色剂和某些离子的干扰选择选择 测测，可避开干扰的吸收，可避开干扰的吸收增加显色剂用量增加显色剂用量分离分离现在学习的是第42页，共60页第四节第四节 光度法的测量及误差控制光度法的测量及误差控制一一. .测量波长测量波长 的选择的选择(1)“最大吸收最大吸收”原则原则无干扰，无干扰， 选择选择 maxmax为测量波长为测量波长(2)“)“吸收较大，干扰最吸收较大，干扰最小小”原则原则有干扰，选有干扰

27、，选择不受干扰的择不受干扰的次强吸收次强吸收波长波长为为测量波长测量波长A A 1 1）非单色光非单色光影响小影响小2 2）灵敏度高灵敏度高现在学习的是第43页，共60页I0It参参比比I0 IrIaI0 Ir二二. .参比溶液的选择参比溶液的选择显色反应：显色反应：M + R = MR有色有色A(样样) = A(待测吸光物质待测吸光物质) + A(干扰池干扰池)A(参比参比) = A (干扰干扰+池池) 光度分析时，入射光光度分析时，入射光先先射入射入参比溶液参比溶液，然后然后再入射再入射样品样品溶液溶液。参比溶液的作用：参比溶液的作用： 1）调节仪器的工作零点；）调节仪器的工作零点； 2）

28、消除吸收池、溶剂和试剂对光）消除吸收池、溶剂和试剂对光的吸收、反射或散射；的吸收、反射或散射； 3）扣除干扰。）扣除干扰。现在学习的是第44页，共60页参比溶液的选择参比溶液的选择原则：原则：扣除非待测组分的吸收扣除非待测组分的吸收A （样）样） = A （待测吸光物质）待测吸光物质） + A （干扰池）干扰池）A （参比）参比） = A （干扰干扰+池）池） M无色无色 + R = MR有色有色试样试样 不只是不只是M试剂试剂 不只是不只是R示意图示意图参比液参比液无色无色无色无色 MR 溶剂溶剂空白空白有色有色无色无色M MR试样试样空白空白无色无色有色有色MR R试剂试剂空白空白有色有色

29、有色有色 M MR R显色显色空白空白现在学习的是第45页，共60页现在学习的是第46页，共60页三三. .吸光度测量的误差吸光度测量的误差 光度分析法的光度分析法的误差误差除了来源于除了来源于朗伯比耳定律的偏离朗伯比耳定律的偏离以外，以外，仪器测量不准确仪器测量不准确也是导致误差的原因。也是导致误差的原因。偏离偏离A= bC 任何光度计都有一定的测量误差。这些误差可能来源于任何光度计都有一定的测量误差。这些误差可能来源于光光源不稳定源不稳定、实验条件的偶然变动实验条件的偶然变动、读数不准确读数不准确等。等。普通分光光度计的普通分光光度计的仪器测量误差仪器测量误差主要是主要是透射比透射比的的读

30、数误差读数误差现在学习的是第47页，共60页控制控制 A=0.15 0.8 T=70 %15% 减少测量误差减少测量误差吸光度范围的控制吸光度范围的控制方法方法选择选择 C A = bC 选择选择 b A = bC 为了减少为了减少仪器测量误差，仪器测量误差，应控制应控制吸光度吸光度（透射比透射比）的读数范围。）的读数范围。 可见可见：1）T在在15%-70%（即（即A为为0.15-0.8）时，由）时，由dT引起的引起的Er较小；较小；2）当）当T=e-1=0.368，即，即A=0.434时，时，Er最小最小，即浓度的测量误差最小。，即浓度的测量误差最小。现在学习的是第48页，共60页(1)选

31、择合适的显色反应和显色条件选择合适的显色反应和显色条件 (2)绘出被测组分的吸绘出被测组分的吸 A收光谱曲线收光谱曲线(用用标液标液) (3)在在max下测一系列标准溶液下测一系列标准溶液 A的的A值，绘制工作曲线值，绘制工作曲线A-c(4)与工作曲线相同的方法，测未知物与工作曲线相同的方法，测未知物AX ， 从工作曲从工作曲线上查线上查（或计算）（或计算）得到得到c查查，计算得到，计算得到cx。 AxC C查查第五节第五节 吸光光度分析方法吸光光度分析方法一、经典光度分析方法一、经典光度分析方法（一）校准曲线法（工作曲线法）（一）校准曲线法（工作曲线法）现在学习的是第49页，共60页 标准标

32、准对照法对照法(直接比较法直接比较法)标标标测测测标测bckbckAA标标测测ccAA 要求要求A与与c线性关系良好，被测样品溶液与标准溶液浓度接近，线性关系良好，被测样品溶液与标准溶液浓度接近，以减少测定误差。用一份标准溶液即可计算出被测溶液的含量或浓以减少测定误差。用一份标准溶液即可计算出被测溶液的含量或浓度，方便，操作简单。度，方便，操作简单。 将试样溶液和一个标准溶液在相同条件进行显色、定容，将试样溶液和一个标准溶液在相同条件进行显色、定容，分别测出它们的吸光度，按下式计算被测溶液的浓度。分别测出它们的吸光度，按下式计算被测溶液的浓度。k标标=k测测 b标标=b测测所以所以现在学习的是

33、第50页，共60页（二）（二） 示差光度法（测高含量，技术处理）示差光度法（测高含量，技术处理）A0.81.20.4 原理：设用于参比的标准溶液的浓度为原理：设用于参比的标准溶液的浓度为Cs，待待测试液的浓度测试液的浓度Cx，且且Cs Cx ，则：，则：CbCCbAAAbCAbCAsxsxfssxx)(: ) 1 ()2()2() 1 ( Af 示差吸光度。以浓度为示差吸光度。以浓度为Cs的标准溶液作参比时测定的待测试液的的标准溶液作参比时测定的待测试液的吸光度。吸光度。 Af 与与C成正比。成正比。cX = cS + c现在学习的是第51页，共60页普通法：普通法： cs的的T=10%；cx

34、的的T=7%示差法：示差法： cs 做参比，调做参比，调T=100%则：则： cx的的T=70% ；标尺扩展标尺扩展10倍倍示差法标尺扩展原理：示差法标尺扩展原理：特点：测高含量（准确度相对提高，若标液配特点：测高含量（准确度相对提高，若标液配 制不当，误差大）制不当，误差大）测量误差变小了测量误差变小了现在学习的是第52页，共60页（三）多组分的同时测定（三）多组分的同时测定 若各组分的吸收曲线若各组分的吸收曲线互不重叠互不重叠，则可在则可在各自最大吸收波长处各自最大吸收波长处分别进行分别进行测定测定。这本质上与单组分测定没有区别。这本质上与单组分测定没有区别。 若各组分的吸收曲线若各组分的

35、吸收曲线互有重叠互有重叠，则可，则可根据吸光度的加和性根据吸光度的加和性求解联立方程组得出求解联立方程组得出各组分的含量。各组分的含量。1 ：A1= a,1bca b,1bcb 2： A2= a,2bca b,2bcb 利用吸光度的加和性利用吸光度的加和性现在学习的是第53页，共60页例：有下列一组数据：例：有下列一组数据：吸光物质吸光物质C(mol/L) (nm)b(cm)AA5.010-444010.68359010.139B8.010-544010.10659010.470A+B?44011.02259010.414求未知液中求未知液中A和和B的浓度。的浓度。解：先求出纯解：先求出纯A、

36、纯纯B在两种波长下的在两种波长下的 （Lmol-1cm-1）：35B59035B44024A59034A4401088. 51081470. 0;1033. 11081106. 01078. 21051139. 0;1037. 11051683. 0bCA现在学习的是第54页，共60页再根据再根据A的加和性，列方程求解：的加和性，列方程求解：BB590AA590B590A590590BB440AA440B440A440440bCbCAAAbCbCAAALmolCLmolCCCCCBABABA/1069. 3/1010. 71088. 51078. 2414. 01033. 11037. 102

37、2. 1543233即：现在学习的是第55页，共60页第六节第六节 吸光光度法的应用吸光光度法的应用一、定量分析一、定量分析( (一一) )无机离子分析无机离子分析（二）生化物质分析（二）生化物质分析二、物理化学常数的测定二、物理化学常数的测定现在学习的是第56页，共60页1、Ka的测定的测定1）固定）固定测测2）固定总浓度，仅改变）固定总浓度，仅改变pH可测到可测到不同的不同的A值值（1）将组分全调到酸式）将组分全调到酸式(强酸介质强酸介质,pHpKa+2)：AB= BbC（3）在某一）在某一pH下下(pH在在pKa附近附近)，HB、B-均存在：均存在：) 2( CKHHHBa) 3 ( C

38、KHKBaa现在学习的是第57页，共60页aaBaHBKHKbCKHHbCA)5(lgAAAApHpKHBBa或：)4(HAAAAKBHBa整理得：aaBaHBKHKAKHHA现在学习的是第58页，共60页2 2、络合物组成的测定、络合物组成的测定(1)(1)摩尔比法摩尔比法: : 前提前提 ：1. 1. M、R均无色，即均无色，即M和和R均不干扰均不干扰MRn； 2. MRn稳定；稳定；3. n值大值大M + nR MRn(有色）有色）最终体积最终体积1010mL 固定固定CM，改变改变CR，配制一系列配制一系列CR/CM不同的溶液，在不同的溶液，在max处处分别测量各溶液的吸光度分别测量各溶液的吸光度A，作作ACR/CM图图。 CM=CR=现在学习的是第59页，共60页1:13:1c(R)/c(M)A1.0 2.0 3.0 n=(CR/CM)转折点转折点 摩尔比法适用于解离度小、稳定性高、络合比高摩尔比法适用于解离度小、稳定性高、络合比高的络合物组成的测定。的络合物组成的测定。 现在学习的是第60页，共60页