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1、选修1课时14 血红蛋白的提取和别离学习目标1了解色谱法、电泳法等别离生物大分子的根本原理。2体验提取生物大分子的根本过程和方法。自主梳理1蛋白质的别离原理：根据蛋白质各种特性的差异别离不同种类的蛋白质，如分子的_、所带电荷的_、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等。2凝胶色谱法：(1)概念：也称做_，是根据_别离蛋白质的有效方法。(2)(3)别离原理：别离物质通道路程速度相对分子质量较大凝胶外部_较快相对分子质量较小_较长_3缓冲溶液：(1)组成：通常由12种_溶解于水中配制而成。(2)作用：抵抗外界的酸和碱对_的影响而保持其稳定。4电泳：(1)概念：指_在电场的作用下发生_的过程。(2)
2、原理：电泳利用了待别离样品中各种分子_以及分子本身的_的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的别离。(3)两种常用方法：_和聚丙烯酰胺凝胶电泳。5血红蛋白的提取和别离：(3)_(即样品的参加和洗脱)：_。(4)纯度鉴定：_。6凝胶色谱操作：(1)凝胶色谱柱的制作。取长40 cm，内径为1.6 cm的玻璃管，_。选择适合封堵玻璃管口的_，中间打孔，孔径大小要能够严密插入0. 5 mL的移液管。将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴，将0. 5 mL的_头部切下5 cm长的一段，插入橡皮塞孔内，插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。将尼龙网覆盖在橡皮塞的凹穴上，再用_将橡皮塞
3、上部包好，插到玻璃管的一端。在色谱柱下端用_头部作出口部位，连接一细的尼龙管；并用螺旋夹控制尼龙管的翻开与关闭， 尼龙管的另一端放入收集器内。柱顶部的制作，在色谱柱的另一端插入安装了玻璃管的_。(2)凝胶色谱柱的装填。材料：本实验使用的是_。方法：凝胶用_充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，一次性缓慢倒入色谱柱内。考前须知。a.商品凝胶使用前需直接_；b.装填时可_，使凝胶装填均匀；c.不能有气泡存在，防止其_，降低别离效果；d.不能发生_的现象。检验：如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。(3)样品的参加与洗脱。调整缓冲液面：与凝胶面平齐滴加透析样品：用吸管将(1)mL透析后的样品加到色谱
4、柱的_样品渗入凝胶床：翻开下端出口 ，使_洗脱：翻开下端出口 ，用_洗脱收集：待_接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集课堂练习1判断正误：凝胶色谱法别离蛋白质时利用了蛋白质相对分子质量大小和形状的不同。2判断正误：在凝胶色谱法别离过程中，血红蛋白比相对分子质量较小的杂蛋白移动慢。3判断正误：电泳时带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。4判断正误： 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少。5判断正误：用于透析的薄膜具有选择透过性。6判断正误：可通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。7判断正误：假设红色区带不均匀地移动，说明色谱柱制作成功。1凝
5、胶色谱法别离蛋白质的原理依据是2利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来3关于电泳的说法不正确的选项是D.用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小4样品的参加和洗脱的操作不正确的选项是A.加样前，翻开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B.加样后，翻开下端出口，使样品渗入凝胶床内C.等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D.用吸管小心地将1 mL透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面5在利用凝胶电泳法别离蛋白质时，一定要参加缓冲溶液，起到的作用是6下面是凝胶色谱法别离血红蛋白时样品参加(图I)和洗脱(图)示意图。请据图答复以下问题：(1
6、)在加样品示意图中，正确的顺序是_。(2)用吸管加样品时，应注意正确操作，分别是：_;_；_。(3)等样品_后，参加缓冲溶液。待_接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每_mL收集一管，连续收集。【自主梳理】1形状和大小 性质和多少2(1)分配色谱法 相对分子质量的大小(2)多孔球体 多糖类化合物贯穿的通道(3)较短 凝胶内部较慢3(1)缓冲剂 (2)溶液pH4(1)带电粒子 迁移(2)带电性质的差异 大小、形状(3)琼脂糖凝胶电泳5(1)去除杂蛋白 低速短时间离心 蒸馏水和甲苯 过滤除去脂溶性沉淀层 有机溶剂(甲苯) 血红蛋白溶液(2)小分子 大分子 相对分子质量较小 20 mmol/L的磷酸
7、缓冲液中(3)纯化 凝胶色谱法(4)SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳6(1)两端磨平 橡皮塞 移液管 尼龙纱 移液管 橡皮塞(2)交联葡聚糖凝胶 蒸馏水 放在洗脱液中膨胀 轻轻敲动色谱柱 搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序 洗脱液流干，露出凝胶颗粒(3)顶端 样品渗人凝胶床内磷酸缓冲液 红色的蛋白质【预习小测】1234567【随堂自测】1B 2A 3C 4A 5C6(1)(2)不要破坏凝胶外表 贴着管壁加样 使吸管管口沿着管壁环绕移动(3)完全进入凝胶层 红色的蛋白质 5【解析】在装填好的色谱柱中参加样品时，先翻开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓缓下降到与凝胶面平齐，关闭出口。用吸管小心地将lmL透析后的样品加到色谱柱的顶端，注意参加时要使吸管管口沿管壁环绕移动，贴着管壁加样，以免破坏凝胶面()，加样后翻开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全渗入之后，关闭下端出口()，接着采用同样的方法参加緩冲液到适当髙度()，连接緩冲溶液洗脱瓶进展洗脱()。待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。