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1、-HE染色基本流程-第 3 页HE（Hematoxylin & Eosin）染色基本流程苏木精伊红染色法简称HE染色法，它是最常用的普通染色方法。苏木精是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。伊红是阴离子染料，将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。1、二甲苯脱蜡三道，每道30min2、无水乙醇两道，每道5min3、95%乙醇两道，每道5min4、80%乙醇5min5、70%乙醇5min6、50%乙醇5min7、蒸馏水3-5min8、苏木素染色液5-10min，根据染色结果和气温调整时间9、浸自来水冲洗多余的染色液10、0.5%盐酸酒精分色（70%酒精配制）3-10seconds11、水洗蓝化
2、15-30min12、50%乙醇5min13、70%乙醇5min14、80%乙醇5min15、伊红染色液（95%乙醇配制）60seconds16、95%乙醇两道，每道5min17、无水乙醇两道，每道5min18、乙醇+二甲苯（1:1）5min19、二甲苯三道，每道5min20、中性树胶封片HE染色注意事项：1. 染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，自来水中冲洗时间要长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显
3、微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。4. 在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。5. 切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。6. 最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。试剂配制：0.5%盐酸酒精分色液浓盐酸1 ml70%酒精99 ml