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1、1 专题 10 生物技术实践第 31 讲 微生物的利用（时间： 30 分钟）1.（2015浙江五校第二次联考）近几年生物技术发展迅猛，和我们的生活关系越来越密切了。请回答下列问题：外植体 A B 植株（ 1）利用植物组织培养可实现农作物的大规模快速繁殖，植物组培培养基的类型有、发芽培养基。上图中，由外植体通过植物组织培养技术培育成完整植物，这项技术利用了植物细胞具有全能性的原理。图中A代表；AB 过程表示。（2）在植物组织培养中关于消毒和灭菌操作的叙述，正确的是（）A.操作者的双手可以不消毒B.外植体可以用酒精消毒C.镊子等器械需用酒精灭菌D.接种后培养基需用高压蒸汽灭菌（3）通常用来分离菌种
2、的方法有和。（4）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：第一步：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。第二步：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，还要添加，加琼脂后灭菌，制成固体平板。第三步：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。第四步：根据是否能在该培养基上生长筛选出突变菌。（5）土壤中有些细菌含有脲酶，这些细菌能够将分解成氨，从而使培养基中加入的指示剂产生红色透明环。答案（1）生根培养基愈伤组织再分化（2）B （3）划线分离法涂布分离法（4）高浓度蔗糖（或葡萄糖）、调低 pH（加酸）（5）尿
3、素酚红2. 为了调查长江的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 6 页 - - - - - - - - - 2 （1）制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是（2）该小组可采用上图所示的（方法）检测水样中的细菌含量。在接种前，随 机 取 若 干 灭 菌 后 的 空 平
4、板 先 行 培 养 了 一 段 时 间 ， 这 样 做 的 目 的 是_ ；然后，将1 mL水样稀释 100 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为39、 38 和 37。 据此可得出每升水样中的活菌数为。（3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及 以 后 划 线 时 ， 总 是 从 上 一 次 的 末 端 开 始 划 线 。 这 样 做 的 目 的 是_ _ 。（4）在纯化过程中，在固体培养基上划线分离过程中，正确的操作是（）A.每次划线时，接种环都需要蘸菌液一次B.划线分离时，需要把接种环深入
5、到培养基中进行接种C.划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连D.在超净平台中进行接种时，不能关闭过滤风答案（1）调整 pH 高压蒸汽灭菌防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染（2）涂布分离法检测培养基平板灭菌是否合格3.8 107（3）将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落（4）D 3.（2015浙江名校协作体联考）下图表示菊花的嫩枝离体培养过程，请据图回答下面的问题。（1）若使用自然生长的嫩枝进行组织培养，需将材料放在70% 乙醇中浸泡名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - -
6、 第 2 页，共 6 页 - - - - - - - - - 3 10 min ，再放入中浸泡 5 min ，然后用另一该溶液浸泡5 min ，最后在中用无菌水清洗。（2）实验中使用的生长素是人工合成的，培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值（填“高”或“低”）时，有利于芽的分化。（3） 待生根后，将苗移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持以上的湿度， 23 天后打开玻璃罩逐渐降低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度下为止。A.8% B.30% C.60% D.80% （4）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌，并进行了细菌分离等工作。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂，
7、 培养后， 在菌落周围出现就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌。（5）下列有关“分离以尿素为氮源的微生物”实验叙述，正确的是（）A.对尿素溶液要使用70% 酒精浸泡灭菌B.分离出的菌落继续在固体培养基中扩大培养C.划线分离法比涂布分离法更易获得单菌落D.培养基中需加琼脂糖作为凝固剂答案（1）5%NaClO （ 5% 次氯酸钠或NaClO，都可）超净台（2）NAA （萘乙酸）低（3）B （4）酚红红色（5）D 4.（20161 月宁波期末测试）石油烃是环境的重要污染源。为了筛选出具有强分解石油烃能力的微生物，进行了一系列操作，请回答下列问题：（ 1）分解石油烃的微生物一般要从土壤中分离，获取土壤
8、样品的取样地点最好选在_ 。（2）微生物实验室常采用法对培养基进行灭菌处理。A.干热灭菌B.过滤灭菌C.灼烧灭菌D.高压蒸汽灭菌（3）下图为获取土壤样品后的培养研究过程：名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 6 页 - - - - - - - - - 4 为 了 能 有 效 地 分 离 出 分 解 石 油 烃的 微 生 物 ， 过程 所 用 培养 基 的 成 分 的特 点是，从而有利于分解石油烃的微生物的生长。（4）对进行接种常采用的两种方法分别是和。（5）若发
9、现在中无法区分菌落，可以将图中取出的菌液。（6）若实验室为分离纯化优良菌种进行了如下操作，排序最合理的是。A.B.C. D.（7）整个微生物的分离和培养的操作，一定要注意在条件下进行。解析（1）分解石油烃的微生物在石油污染明显处分布较多。（2）微生物实验室对培养基常用高压蒸汽灭菌。 （3）实验过程中，过程所用培养基应用石油烃作唯一碳源，以抑制其他种类微生物的生长，从而分离出以石油烃为碳源的微生物。（4）对微生物的分离实验中，常用划线分离法或涂布分离法进行接种。（5）若发现在中无法区分菌落，可能是菌液中细菌浓度太高，可进行梯度稀释处理后再进行接种。（6）图示为用划线法进行接种分离。接种过程中应先
10、在酒精灯火焰上灼烧接种环后，蘸取菌液进行接种，整个操作在酒精灯火焰旁进行，接种结束后还须在酒精灯上灼烧接种环。（7）为避免污染， 整个微生物的分离和培养的操作，一定要注意在无菌条件下进行。答案（1）石油污染明显处（2）D （3）以石油烃为唯一碳源（4）划线分离法涂布分离法（5）进行（梯度）稀释（6）B （7）无菌5. （2016金丽衢十校联考）下表是3 组生物实验培养基。请回答下列问题：组别培养基a 无机盐、蔗糖、维生素和甘氨酸等有机物、水、琼脂b 葡萄糖、 NaCl、K2HPO4、尿素、酚红、水、琼脂糖c 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水、琼脂（1）分离以尿素为氮源的细菌应选用培养基。在含有
11、脲酶的细菌菌落周围会出现，这是由于尿素被分解产生的使 pH 升高，酚红指示剂产生颜色变化，名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页，共 6 页 - - - - - - - - - 5 从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力。（2）用培养基a 进行植物组织培养，则培养基中还需加入。一般先用（填“发芽”或“生根”）培养基进行培养，使之长出较多的丛状苗，然后将丛状苗分株培养。（3）生产上利用黑曲霉或苹果青霉来提取果胶酶，在用果胶酶水解果胶的实验
12、中，下列说法正确的是。A.实验后滴加酒精的目的是增加果胶酶的活性B.沸水浴加热后果胶酶的活性随着温度的下降逐渐恢复C.间歇搅拌2030 min 的目的是让果胶酶与果胶充分接触D.选用黑曲霉提取液是因为果胶酶只能在生物细胞内起催化作用解析（1）分离以尿素为氮源的细菌应选用以尿素为唯一氮源并添加酚红指示剂的培养基。分解尿素的微生物可产生脲酶，脲酶可催化尿素分解产生氨，使酚红指示剂变红，从而在菌落周围形成红色环带，形成的红色环带越大，表明该菌株利用尿素的能力越强。（2）植物组织培养所需的MS培养基需加入植物激素。培养过程中一般先用发芽培养基进行培养，使之长出较多的丛状苗，然后将丛状苗分株培养，诱导生
13、根。（3）在用果胶酶水解果胶的实验中，实验操作后滴加酒精的目的是检验实验过程中果胶是否被水解；沸水浴加热后果胶酶会失去活性；只要条件适宜，果胶酶在细胞内外均可发挥催化作用。答案（1） b 红色环带氨越强（2）植物激素（植物生长调节剂）发芽（3）C 6.（2015郑州中学模拟卷）培育脱毒草莓的目的是利用植物组织培养技术避免病毒感染草莓幼苗，从而提高草莓的生命力和产量。脱毒草莓具有栽培容易、增产效果显著、周期短、经济效益高等特点， 是发展我国高效农业和绿色有机农业的首选经济作物。请回答下列问题：（ 1）培育脱毒植物的原理是植物细胞具有。外植体形成愈伤组织需要经过过程，愈伤组织形成幼苗需要经过过程。
14、整个培养过程要在条件下进行。（2）对培养基进行灭菌时，多采用法，而在微生物培养实验中对接种环或涂布器灭菌时，则用法。（3）进行植物组织培养需配制MS培养基， 培养基中常用的凝固剂是。该培养基中常需要添加、等植物激素。欲利于根的分化，植物激素的用量比例应为_ 。解析（1）植物细胞具有全能性，这是植物组织培养的理论基础。培养的外植体要经过脱名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 5 页，共 6 页 - - - - - - - - - 6 分化和再分化过程才能形成幼苗，整个过程要保持无菌操作。 （2）培养基常采用高压蒸汽灭菌，玻璃器皿常采用干热灭菌，接种环等金属器具常采用灼烧灭菌。（3）配制培养基时常用的凝固剂是琼脂， 生长素与细胞分裂素等植物激素可调节脱分化和再分化过程。当生长素多于细胞分裂素时，利于生根。答案（1）全能性脱分化再分化无菌（2）高压蒸汽灭菌灼烧灭菌（3）琼脂生长素细胞分裂素生长素多于细胞分裂素（合理即可）名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 6 页，共 6 页 - - - - - - - - -