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1、-*PA120 特定蛋白分析仪标准操作SOP1 适用仪器本SOP文件仅用于深圳锦瑞电子有限公司生产的PA120全自动特定蛋白分析仪。2 测定方法原理方法学：免疫散射比浊法原理：抗原抗体结合后，形成免疫复合物，出现浊度，当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。一定波长的光沿水平轴照射，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物也越多，散射光也越强。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。 一定波长的光
2、沿水平轴照射，通过溶液使遇到抗原抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物也越多，散射光也越强；在特定的反应段内，反应速度与被测物浓度的一次方成正比，且在该段时间内，吸光度的增加（或降低）量与被测定物的浓度成正比，固定检测时间，依据不同浓度标准品在此段时间内对应的吸光度增加量，绘制出的标准曲线，仪器检测出样本的吸光度增加量，根据标准曲线即可换算出样本浓度。n 定标类型PA120特定蛋白分析仪的定标类型为Logit-5P。定标参数直接写入磁卡中，不需要客户进行单独
3、定标。定标公式，有5个参数，即R0、K、a、b和c。 要求提供至少5个标准液，各参数用迭代法求出。3 标本要求根据不同的测试项目，选择不同的样本类型。项目名称中文名称样本类型ASO抗链球菌溶血素0血清/血浆Anti-CCP抗环胍氨酸肽抗体血清RF类风湿因子血清/血浆mAlb尿微量白蛋白尿液Cys-C胱氨酸蛋白酶抑制剂C血清/血浆hs-CRP全程量超敏C-反应蛋白全血/血清/血浆HbA1c糖化血红蛋白全血D-DimerD-二聚体血浆3.1 血液样本采集病人准备：病人应处于安静、呼吸稳定的状态，穿刺时应尽量减少病人的疼痛感。坐位与卧位、睡眠后与清醒时、运动后与进餐后都会产生不同的结果。样本种类：生
4、物学的体液样本应该以同样的方式来收集，以便用来测试任何实验室中的试验。样本采集：除非是卧床的病人，一般在静脉采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐 5min。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后立即松开止血带。样本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求（要求封密、无溶血、无杂物）、所用试管是否正确、试管标签是否填写完整、并询问采血时间，对不合格标本应退回重采，并填写记录。3.2 血液样本保存：采血管应该一直保持垂直、塞住的姿势。血清应该立即被分离，防止溶血，避免接触到血球部分。从采血到上机的最长时间限制是 2小时。分离的血清保
5、存在 2-8的环境中可存放 1周；冰冻在-15 -20的环境中可存放 3个月。冰冻的样本只能解冻一次，有时分析物产生降低或恶化的情形多半是因为重复冰冻及解冻的原因所造成。室温运送，4小时内完成检测。3.3 标本拒收标准严重溶血、凝固、血量少、无条码、无标识的血液标本不能进行检测。4 试剂及配套品各项目有锦瑞公司配套试剂盒，由锦瑞公司提供包括反应杯、打印纸等配套的必备消耗品。5 操作规程5.1 开机准备在每次开机前,操作者应按以下步骤检查：l 检查仪器背面连接的纯净水、清洗液是否接好，确保余量足够。l 检查废液桶是否满，仪器背面传感器线、电源线或其他设备是否接好。l 打开试剂盘盖板，检查确保试剂
6、瓶瓶盖已经打开，以防开机启动时采样针撞针。5.2 测试流程1. 开启仪器工作电源开关和制冷开关，仪器自动初始化，并进入项目选择界面。2. 选择需要测试的项目，进入主测量界面。3. 点击主测量界面的“批号”按钮，进入刷卡界面，取该项目磁卡，对准仪器刷卡区，进行刷卡操作，刷卡完成后，在仪器主测量界面上方会显示该项目刷卡批号。若该项目已刷过该批次的磁卡，则略过此步。4. 在主测量界面点击“主菜单”按钮，进入主菜单，依次点击“维护”“试剂位”，观察或改变该项目的试剂位。并在试剂位中放入该项目所需的试剂，返回主菜单，点击“测量”按钮，进入主测量界面。5. 在主测量界面，点击“样本类型”按钮，选择该项目的
7、样本类型，并保存。6. 在主测量界面，点击“信息”按钮，输入该测试样本的病人信息，每次最多可新增20个病人信息，若仪器连接条码扫描设备，请扫描该样本的ID号，若没有连接条码扫描设备，可手动输入或不输入ID号。7. 将该测试样本置于采样针下，按开始键，仪器自动进样，并完成其他试剂加样动作，屏幕右上方正测个数加1。 8. 采样针不在初始位时，主菜单按钮处于锁定状态，当采样针完成加样动作，回到初始吸样位时，“项目设置”、“样本类型”按钮释放可选，其余按钮仍处于锁定状态；此时可切换项目或更改样本类型，继续进行下一样本的测试。9. 待所有测试结果显示完毕后，屏幕上方正测个数显示为0，主测量界面所有锁定的
8、按钮释放，可进行所有其他操作。5.3 结果查询若在连续测试过程中未能及时输入病人信息，可参照以下步骤完善。1. 待所有测试完成后，进入主菜单选择“回顾”按钮，进入回顾菜单，点击下方进度条即可查看所有历史结果。2. 根据病人的No编号，选中对应的结果，点击“详细”按钮，即可查看或编辑信息。5.4 结果打印1. 测试完成后，主测量界面被锁定的按钮释放，点击“打印”按钮即可打印当前结果。2. 测试完成后，进入回顾菜单，查询选中样本结果，点击“打印”按钮，即可打印。3. 进入主菜单-设置-打印设置，将打印设置为“实时打印”，测试结果出来后即可自动打印。5.5 关机1. 当天操作完成后，点击关机按钮，仪
9、器自动完成清洗动作，并提示“请关闭电源”，此时关闭工作电源开关，将各试剂位试剂盖好瓶盖，防止挥发。2. 若抗体位试剂需要取出，则取出抗体并关闭制冷电源开关，若无需取出，制冷开关不关闭，仪器继续制冷。5.6 如何更换试剂仪器测试过程中会自动检测试剂余量，当某种试剂不足时，仪器给出报错提示，并发出报警音，被锁定的主菜单界面按钮自动释放。根据提示，若需更换纯净水/清洗液，请点击主菜单“服务”按钮，进入服务菜单，灌注对应试剂。若更换的是稀释液/缓冲液/抗体，则只需添加对应试剂，根据屏幕提示操作，无需灌注，继续完成下一样本测试。5.7 仪器的常规保养与维护n 若样本量较大，仪器连续运行超4小时，建议进入
10、服务菜单，执行一次“反应杯清洗”，便于彻底清洗反应杯。n 在“设置”菜单，选择“控制”子菜单，根据样本量设置自动清洗时间，当设置时间到达后仪器自动清洗液路。n 仪器每天完成测试后，点击“关机”按钮，自动进行清洗和保养动作，请勿直接关闭工作电源开关。n 建议每周执行一次“保养”程序，对整机进行保养，在主菜单选择“服务”子菜单，点击“保养”按钮，按照屏幕提示，设置浸泡时间，完成操作即可。n 仪器连续工作一月后，在“服务”菜单执行“检测反应杯”时序，仪器即可自动检测反应杯的清洁度，必要时更换不洁净的反应杯。6 质控方法6.1 质控编辑准备好该项目的质控品，在主菜单点击“质控”按钮，进入“质控”子菜单
11、。点击“质控编辑”按钮，选择质控库，依次输入样本类型和质控品的批号和参考值，并保存。 若某一参数输入无效（非法或不合理）数据 ，在存储质控数据时，该质控参数的参考值不做处理，保持之前设置的参数。 6.2 质控测量 当选定质控文件的质控参数输入完成后，即可对该质控文件进行质控测量。点击“质控测量”，仪器将进入质控测量窗口。 若选定的质控项目该批次试剂尚未刷卡，点击项目批号可进入刷卡界面，刷卡即可，若已刷卡，在质控测量界面上方显示已刷卡批号。 若需切换质控项目，点击项目按钮，即可切换，点击样本类型可选择质控的样本类型。准备好待测质控品，按开始键，进行质控测量。每个质控文件最多可存储30次质控数据。
12、6.3 质控图 质控数据通过质控图形的方式直观表现出来，可以很方便的观察仪器质控数据的分布、偏差，了解仪器发生偏差的趋势。 质控图的横坐标是质控运行的次数，纵坐标是测量项目的值，中间是设置的项目的参考值，质控测量的值在参考值上下分布，通过连线直观的观察每次测量的变化，右边显示质控图上显示的项目，对应项目的Mean(平均值),Diff(标准差),CV(变异系数)，在图形下方式可以选择显示的项目，选择任何一个项目，对应的质控图形都会显示出来。6.4 质控查询仪器提供回顾查询质控的测量数据。在主菜单窗口，点击“质控查询”，选择质控下的需要的质控文件。仪器将进入质控查询窗口。屏幕将以列表的方式同时显示
13、5个序号的质控数据。操作屏幕下边的滚动条，可以连续选择不同的序号。7 校准方法每台仪器在出厂前，都已经过严格的检测和校准。但在运输和日常工作中，由于多种原因，仪器的测量结果可能会产生漂移。校准的目的是为了保证仪器的测量结果的准确度始终达到设计要求。 为了保证仪器的测量准确度，获得稳定可靠的测试结果，在下列情况下必须对仪 器进行校准。1、首次装机使用及异地重新安装。2、仪器经过维修。注意：1、必须使用锦瑞公司指定的标准品进行校准。并按照校准物的说明书的要求小心使用和 存储校准物。2、校准前必须确认仪器处于正常工作状态。3、确认校准正确完成之前，不要将仪器测试结果用于医学试验或临床。7.1 人工校
14、准 可以使用正常新鲜血液标本，用标准机的结果作为参考值，也可使用标准品，用标准品的靶值作为参考值计算校准系数，推荐采用新鲜血校准的校准方法。7.1.1 校准方法 在主测量界面测试新鲜血/标准品五次，计算平均值，即为测量平均值。 新校准系数=当前校准系数*参考值/测试平均值7.1.2 校准系数修改 根据上述方法计算校准系数，进入“主菜单”-“校准”-“人工校准”，使用上下箭头修改对应测试项目的校准系数即可。7.2 自动校准在主菜单点击校准-自动校准，进入自动校准界面。输入校准品的参考值或新鲜血样本在标准机上测出的平均值作为靶值。准备好校准物或新鲜血样本并摇匀，将校准物置于采样针下，按吸样键，仪器
15、吸取校准物或新鲜血，等到吸样针上去后才 能将样本移出。测试结束后，校准运行的结果会显示在当前的校准流水号栏下。仪器将自动对机器 进行校准，计算出CV值和校准系数值。点击“保存”按钮，当前的校准结果，自动保存到“人工校准”界面。点击项目设置可切换至下一项目。点击样本类型可选择样本类型。注意1、自动校准最多允许进行五次测试。2、至少测试三次后才给出校准结果。3、如果计算出的CV%值不在重复性要求所示范围内或者校准系数超出75.0125.0，建议操作者查找原因重新执行校准操作，如果多次重复出现这种情况，请与锦瑞公司售后服务部联系。8 参考范围8.1 参考范围项目名称中文名称参考范围检测范围单位ASO
16、抗链球菌溶血素00-17120800IU/mLAnt-CCP抗环胍氨酸肽抗体0-305100U/mLRF类风湿因子0-203160IU/mLmAlb尿微量白蛋白0-2510200mg/LCys-C胱氨酸蛋白酶抑制剂C0-1.1608mg/Lhs-CRP全程量超敏C-反应蛋白0-100.5300mg/LHbA1c糖化血红蛋白4.2-6.5020%D-DimerD-二聚体0-0.5020mg/Lmg/L9 临床意义9.1 hs-CRP （c反应蛋白）CRP是最敏感的炎症指标之一，主要针对 CVD心血管疾病、新生儿细菌感染、肾脏移植病人。表现健康人：903mg/L，9910mg/L。由细菌感染或创伤
17、引起的急性炎症 10mg/L。近期研究表明，长期反复的慢性炎症是动脉粥样硬化形成与扩展的一个重要组成部分，是引发心血管疾病的独立危险因素。该状态下 CRP呈低浓度升高（10mg/L以下），只能用超敏 CRP（hsCRP）来检测（普通 CRP检测低限为 810mg/L，不能检测低浓度）。对无症状的人，基础 CRP值可预示将来610年或更长时间发生心脑血管意外的危险程度。hs-CRP经常2.11mg/L：初发心梗危险度增2.9倍；初发中风危险度增加1.9倍；发生严重外周动脉血管性疾病危险度增加 4.1 倍；妇女患血管性疾病的危险性增加5倍，发生心肌梗塞或中风的危险性增加 8倍。联合检测血脂（TG、
18、CHO、HDL-C、LDL-C、apoA1、apoB等），可提高初发心肌梗塞危险性预测的准确度，提前 48年预知可能发生心肌梗塞的危险程度。hsCRP还可用于：早期骨关节病：参考值5mg/L新生儿细菌感染：参考值2mg/L心脑血管疾病：参考值3mg/L 9.2 mAlb（尿微量白蛋白）白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质。尿微量白蛋白的增高多见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标。 9.3 HbA1c（糖化因红蛋白）糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。血糖和血红蛋白的结合生成糖化
19、血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，反映的是在检测前120天内的平均血糖水平，是判定糖尿病长期控制的良好指标。 9.4 D-Dimer（D二聚体）主要反映纤维蛋白溶解功能。是一个特异性的纤溶过程标记物，只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，D-二聚体就会升高。增高或阳性见于继发性纤维蛋白溶解功能亢进，如高凝状态、弥散性血管内凝血、肾脏疾病、器官移植排斥反应、溶栓治疗等。特别对老年人及住院患者，因患菌血症等病易引起凝血异常而导致D-二聚体升高。9.5 RF(类风湿因子）类风湿因子是由于感染因子（细菌、病毒等）引起体内产生的以变性IgG为抗原的一种抗体，主要存在于
20、类风湿性关节炎患者的血清和关节液中，类风湿因子阳性患者较多伴有关节外表现，如皮下结节及血管炎等。IgM型RF阳性率为60%-78%。9.6 ASO（抗链球菌溶血素O）A组链球菌感染后1周，ASO即开始升高，46周可达高峰，并能持续数月，当感染减退时，ASO值下降并在6个月内回到正常值，如果ASO滴度不下降，提示可能存在复发性感染或慢性感染。多次测定，抗体效价逐渐升高对诊断有重要意义，抗体效价逐渐下降，说明病情缓解。除了急性阶段外，类风湿关节炎患者的血清中通常检测不到ASO值的升高。在肾病综合征和抗体缺乏综合征患者的血清中仅有极低含量的ASO。机体因咽炎、扁桃体炎、猩红热、丹毒、脓皮病风湿热等感
21、染A组链球菌后，可产生链球菌溶血素O抗体，风湿性关节炎活动期，抗“O”升高。 9.7 Anti-CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）CCP抗体对RA具有相当高的特异性和敏感性（68%75%），即使是RA早期患者，敏感度也有40%60%。还有学者认为，CCP抗体不仅是RA早期诊断指标，而且是鉴别侵蚀性、非侵蚀性RA的灵敏指标，CCP抗体阳性者通常出现或易发展成较抗体阴性者更严重的关节骨质破坏。9.8 Cys-C(胱抑素C)反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物,评估肾功能指标。当肾功能受损时，Cys C在血液中的浓度随肾小球滤过率变化而变化。肾衰时, 肾小球滤过率下降，Cys C在血液中浓度可增加10多倍；若肾小球滤过率正常,而肾小管功能失常时，会阻碍Cys C在肾小管吸收并迅速分解，使尿中的浓度增加100多倍。