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1、RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤关键词： RNA 琼脂糖 电泳 2012-03-09 00:00 来源：互联网 点击次数：38148 一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%-1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。三、实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微
2、波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5g/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。四、实验步骤（1）用1TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。（2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4l于封口膜上。在实验台上再加入5l 1TAE电泳缓冲液及1l 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。（3）打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。RNA的变性琼脂糖凝胶检测试剂：（1）MOPS缓冲液（10*）:0.4mol/L 吗
3、啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。（2）上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。（3）甲醛。（4）去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）水冲洗乙醇干燥3%H2O2灌满室温放置10分钟0.1%DEPC水冲洗。操作：（1） 将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。（2） 配制琼脂糖凝胶。称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml 锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。待胶凉至60-70 ，依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0
4、.5ul 溴化乙锭，混合均匀。灌制琼脂糖凝胶。（3） 样品准备： 取 DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂： 10x MOPS缓冲液2ul，甲醛3.5ul,甲酰胺（去离子）10ul，RNA 样品 4.5ul,混匀。 将离心管置于60水浴中保10分钟，再置冰上2分钟。 向管中加入3ul 上样染料，混匀。（4）上样。（5）电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7.5V/ml 的电压下电泳。（6）电泳结束后，在紫外灯下检查结果。3凝 果电查灯实在后电泳下步步压 .冲 内泳电样上匀匀样 入管 钟 冰钟0浴置管匀混 品 ）去酰甲 ，冲 0：如次管小0的过 取备样胶凝匀均锭乙 0液 0 醛 入其次 匀化彻琼加炉水 ，瓶 0的，琼.胶胶制 用干遍冲醇用用 作洗水 置室 干水）泡般干污洗泳。甲子醛甲）蓝蓝 0蓝 , / ，0：样 0) （磺丙 / ）0冲 剂检检琼变。泳 观仪透在漂清, 色染放 凝 ，正负 ，0 压调，开 孔样入.，匀缓 及泳 / 上在 膜于 样总器 移上净超?胶胶液=冲泳 胶琼液 泳 步 验液缓 （ 乙 /. 冲电 脂。测 外 ，微枪器，子 泳仪 总药具 器胶糖%制时总目验 击网互来:000 电 _泳 % %=?/ / /: 脂 % % /. : 整 所非速在性用电一量的 测要和系性法的分与的 件性变只子断无但也带的，的.-%使性非下条性性在电原验