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1、思考思考2该培养基对微生物该培养基对微生物 （具有，（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是机制是 。具有具有只有能够以尿素作只有能够以尿素作为氮源的微生物才为氮源的微生物才能在该培养基上生能在该培养基上生长长（比例计数法）（比例计数法）待测样品待测样品等量的已知含量的红细胞等量的已知含量的红细胞 混匀混匀涂抹涂抹测定：测定： 红细胞数目红细胞数目细菌数目细菌数目计算单位体积内的细菌数目计算单位体积内的细菌数目 将含已知数目的红细胞液体与待测的菌液按将含已知数目的红细胞液体与待测的菌液按1：1均匀混合，在显微镜下数出各自的数目，然后求菌液均匀混合，在显
2、微镜下数出各自的数目，然后求菌液中的细胞数目。中的细胞数目。细菌细菌红细胞红细胞【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。举例：已知红细胞浓度为举例：已知红细胞浓度为M个个/mL，从，从体积为体积为N mL的大肠杆菌培养液中取出大杆的大肠杆菌培养液中取出大杆菌液与红细胞液等量均匀混合后，涂片，染菌液与红细胞液等量均匀混合后，涂片，染色，镜检。在同一视野中发出有红细胞色，镜检。在同一视野中发出有红细胞W个，个，大肠杆菌大肠杆菌Y个，求个，求NmL大肠杆培养液中大肠大肠杆培养液中大肠杆菌的个数杆菌的个数X是多少？是多少？XNM YW(个个)观察到的红细胞平
3、均数观察到的红细胞平均数/观察到的细菌平均数观察到的细菌平均数红细胞含量红细胞含量/细菌含量细菌含量 公公 式式 恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，如何从平板上的菌落数推测出每克如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？样品中的菌落数？ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算值，然后按课本旁栏的公式进行计算教材教材P22实例分析实例分析P22 你认为哪个同学的结果更接近真实你认为哪个同学的结果更接近真实值？
4、值？ 你认为这两位同学的实验需要改进你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？吗？如果需要，如何改进？实例分析实例分析P22 第一同学只涂布了一个平板，第一同学只涂布了一个平板，没有设置没有设置重复组，因此结果不具有说服力。重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是涂布了三个平板，但是其中其中1个平板的计个平板的计数结果与数结果与2个相差太远，说明在操作过程个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地中可能出现了错误，因此，不能简单地将将3个平板的计数值用来求平均值个平板的计数值用来求平均
5、值。菌落计数菌落计数配制土壤配制土壤溶液溶液系列稀释系列稀释涂布平板涂布平板与培养与培养根据图示根据图示27填写以下实验流程：填写以下实验流程：试验设计：试验设计： 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。用前都要灭菌。 制制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 准备准备牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基和和选择培养基选择培养基将菌将菌液稀释相
6、同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照对照，用来，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为个较为宽泛的范围：稀释倍数为10103 310107 7。每个。每个稀释度下需要稀释度下需要3 3个个选择培养基，选择培养基，1 1个牛肉膏蛋白胨个牛肉膏蛋白胨
7、培养基，因此共需要培养基，因此共需要1515个选择培养基，个选择培养基，5 5个牛肉个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备8 8个个灭菌的试灭菌的试管和管和1 1个个灭菌的移液管。灭菌的移液管。 由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为10103 310107 7。每个稀释度下需要。每个稀释度下需要3 3个个选择培养基，选择培养基，1 1个牛肉个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要膏蛋白胨培养基，因此共需要1515个选择培养基，个选择培养基，5 5个牛肉
8、膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备8 8个个灭灭菌的试管和菌的试管和1 1个个灭菌的移液管。灭菌的移液管。 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？实验时要实验时要对培养皿作对培养皿作好标记。注好标记。注明培养基类明培养基类型、培养时型、培养时间、稀释度、间、稀释度、培养物等。培养物等。 当菌落数目稳定时，选取菌落数在当菌落数目稳定时，选取菌落数在3030300
9、300的平板进行计数。在同一稀释度下，的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对至少对3 3个平板进行重复计数，然后求出个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。算出样品中细菌的数目。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质
10、关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 思考在研究未知微生物时务必规范操作，思考在研究未知微生物时务必规范操作，以防被以防被致病微生物致病微生物感染，实验后一定要洗手。感染，实验后一定要洗手。（六）鉴定（六）鉴定：筛选后必鉴定：筛选
11、后必鉴定 鉴别培养基鉴别培养基：加入某种指示剂或化加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存学药品，不影响微生物的生存1 1、酚红培养基：、酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨原理：脲酶催化尿素分解成氨培养基碱性增强培养基碱性增强 酚红变红酚红变红脲脲酶阳性酶阳性2 2、伊红、伊红美蓝培养基：美蓝培养基： 鉴定大肠杆菌。鉴定大肠杆菌。 原理：代谢产物与伊红原理：代谢产物与伊红美蓝美蓝结合结合 菌落呈深紫色并带有金属光菌落呈深紫色并带有金属光泽。泽。伊红伊红美蓝培养基美蓝培养基是鉴别培养基，可以是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，
12、因用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的为的代谢产物与伊红代谢产物与伊红美蓝结合美蓝结合，使菌落呈，使菌落呈深紫色并带有金属光泽深紫色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。制其他微生物的生长。例如：鉴别大肠杆菌培养基例如：鉴别大肠杆菌培养基大肠杆菌呈大肠杆菌呈 黑色中心黑色中心 , ,有或无金属光泽有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 课题成果与评价课题成果与评价 （一）培养物中是否有杂菌污染以（一）培养物中是否有杂菌污染
13、以及选择培养基是否筛选出菌落及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目培养基的数目，说明选择培养基已筛选，说明选择培养基已筛选出一些菌落。出一些菌落。如果学生选取的是同一种土样，统计的结如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步分析产生差异的原因。分析产生差异的原因。（二）样品的稀释操作是否成功（二）样品的稀释操作是否成功 如果得
14、到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。进行菌落的计数。 （三）重复组的结果是否一致（三）重复组的结果是否一致课后练习课后练习 2.提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还应参照物除了
15、需要准备选择培养基外，还应参照厌氧菌的培养厌氧菌的培养方法进行实验设计。方法进行实验设计。六、例题解析六、例题解析 例例1 1对细菌群体生长规律测定的正确的表述是对细菌群体生长规律测定的正确的表述是A A在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B B至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C C接种一个细菌接种一个细菌 DD及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。这些条件是：这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。时测
16、定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。定的接种量。答案：答案：A A1.1.对细菌群体生长规律测定的正
17、确的表述是（对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ ） A.A.在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B.B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C.C.接种一个细菌接种一个细菌 D.D.及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 2.2.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（ ） A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别其他微生物加以区别3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( )( ) A
18、.CO A.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A AC CD D4.4.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（ ） A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值作为该样品菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因设置
19、对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。5.5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）加入（） A.A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B.B.较多的碳源物质较多的碳源物质 C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食盐B BC C（09，宁夏，宁夏，15分）分）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑）在大肠杆菌
20、培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。 （2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行进行_（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能
21、使蛋白质变性，还能_。 （3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。 （4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的细菌进行初步的_。 （5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是培养基应采用的检
22、测方法是_。 （6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案答案:（1）温度）温度 酸碱度酸碱度 易培养易培养 生活周期短生活周期短 （2）灭菌）灭菌 消毒消毒 损伤损伤DNA的结构的结构 （3）比例合适）比例合适 （4）鉴定）鉴定(或分类或分类) （5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生观察培养基上是否有菌落产生. （6）灭菌）灭菌例例3 3（20052005年江
23、苏）抗生素作为治疗细菌感年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意义。义。青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是是 ，青霉素是青霉菌的，青霉素是青霉菌的 代谢产物。代谢产物。在生产和科研中，常选用处于在生产和科研中，常选用处于 期的青霉菌作期的青霉菌作为菌种或研究材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛，为菌种或研究材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛， 和和 比较稳定。比较稳定。对青霉菌菌体生
24、长情况的测定：取一定体积的发对青霉菌菌体生长情况的测定：取一定体积的发酵液，经离心分离、反复洗涤后，酵液，经离心分离、反复洗涤后， ，再计算，再计算发酵罐中菌体的总重量。发酵罐中菌体的总重量。异养需氧型异养需氧型次级次级对数对数个体的形态个体的形态生理特性生理特性称菌体的湿重称菌体的湿重 （称烘干后的重量）（称烘干后的重量）解析：解析：青霉菌属于真菌，其代谢类型应为异养需氧型，青霉菌属于真菌，其代谢类型应为异养需氧型，而青霉素作为它的代谢产物，并不是它生长、繁殖而青霉素作为它的代谢产物，并不是它生长、繁殖所必需的，所以青霉素应属于次级代谢产物。在测所必需的，所以青霉素应属于次级代谢产物。在测定
25、培养基上青霉菌菌体的生长情况时，常用的方法定培养基上青霉菌菌体的生长情况时，常用的方法有两种：一种是测量青霉菌的细胞数目，另一种是有两种：一种是测量青霉菌的细胞数目，另一种是测重量，取一定体积的发酵液，经离心分离、反复测重量，取一定体积的发酵液，经离心分离、反复洗涤后，称菌体的湿重，或烘干后称干重，再由此洗涤后，称菌体的湿重，或烘干后称干重，再由此计算出其中的细胞总重量。在细菌生长的四个主要计算出其中的细胞总重量。在细菌生长的四个主要时期中，因为处于对数期的细菌代谢旺盛，个体的时期中，因为处于对数期的细菌代谢旺盛，个体的形态和生理特性比较稳定，常作为生产用的菌种和形态和生理特性比较稳定，常作为生产用的菌种和科研的材料。科研的材料。