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1、医院检验科微生物检验实验室常用培养基及试剂配制标准操作规程营养琼脂配制标准操作规程90血琼脂培养基配制标准操作规程91巧克力培养基配制标准操作规程92M-H培养基配制标准操作规程93营养肉汤配制标准操作规程94碱性蛋白胨水配制标准操作规程95沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基配制标准操作规程96XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书营养琼脂配制标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0521版本：20140601生效日期：20140615共 1 页 1. 目的规范营养琼脂培养基配制的操作规程。2原理 培养基含有氮源、碳源和微量无机盐，适宜细菌生长繁殖。3用途供细菌培养、菌株纯化及传种使用
2、。4配方营养琼脂干粉28g、蒸馏水1000ml5.操作步骤将28g营养琼脂干粉溶于1000 ml蒸馏水中，混匀至完全溶解，分装，经121灭菌15分钟，冷藏备用。6.储存条件28冰箱7.有效期实验室自行规定，确保培养基质量。8.质量控制8.1 质控频度 每次新配制时做质控8.2 质控方法及结果见表5-17。表5-17 配制营养琼脂培养基质量控制方法及结果试验方法结果无菌试验 100块随机取10块，35培养2449h无细菌生长生长试验金黄色葡萄球菌ATCC25923，35培养2449h 菌落浅黄色铜绿假单胞菌ATCC2785335培养2448h 菌落无色或浅绿色直径2.7mm平行试验平行试验 做质
3、控时 取新旧批号的培养基同时做 9注意事项倾倒时温度不易过高，否则冷凝水过多易污染；若温度过低，琼脂易凝固。参考文献 1 谢正旸主编。现代微生物培养基和试剂手册。福州：福建科学技术出版社，19942 王钦升，周正明，高屹主编。实用医学培养基手册。北京：人民军医出版社，1999 编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人： XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书血琼脂培养基配制标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0522版本：20140601生效日期：20140615共 1 页 1目的规范血琼脂培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。2原理羊血或兔血等是细菌生长繁殖
4、的良好营养物质。在4550的基础培养基中加入血液可以完好保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将NaCl浓度提高到0.85%，可使血平皿在35培养1824小时后色泽仍然新鲜。3用途供一般病原菌的分离培养、溶血性鉴别及保存菌种用。 4配方特殊蛋白胨23g、淀粉1g，氯化钠5g、琼脂10g、无菌脱纤维羊血（或兔血）5%10%，pH7.17.5。5.操作步骤将上述成分混合，溶于1000ml蒸馏水中，加热溶化，校正pH，121高压灭菌15分钟。冷却至50加入无菌血液，充分摇匀后倾注平板，待凝固后冷藏备用。血琼脂层厚4mm。6.储存条件28冰箱。7.有效期实验室自行规定，确保培养基质量。
5、8. 质量控制8.1 质控频度 每次新配制时做质控8.2 质控方法及结果见表5-18.表5-18 配制血琼脂培养基质量控制方法及结果试验方法结果无菌试验生长试验平行试验100块随机取10块，35培养，观察有无细菌生长化脓性链球菌ATCC19615，35，培养1824小时肺炎链球菌ATCC6305，35，培养1824小时金黄色葡萄球菌ATCC25923，35，培养1824小时大肠埃希菌ATCC25922，35，培养1824小时做质控时，取新旧批号的培养基同时做无细菌生长生长良好，溶血生长良好，a溶血生长良好，溶血生长良好，9.注意事项倾注时温度不易过高，否则血细胞易被破坏而溶血；若温度过低，琼脂
6、易凝固。参考文献 1 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20072 王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999 （周庭银）编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人： XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书巧克力培养基配制标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0523版本：20140601生效日期：20140615共 1 页 1目的规范巧克力培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。2原理流感嗜血杆菌生长依耐血液中的X及V因子，当培养基加热至8090时，可使血液中的红细胞破裂释放出X及V因子，以利用
7、嗜血杆菌的生长培养。3用途主要用于嗜血杆菌的分离培养，亦可用于奈瑟菌的增值培养。 4配方牛肉浸出液1000ml、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂5g、无菌脱纤维羊血100ml，pH7.27.4。5.操作步骤将前4项成分混合，加热溶化，校正pH，121高压灭菌15分钟，冷却至8085，以无菌技术加入羊血，摇匀后置8085水浴中，维持15分钟，使之成巧克力色取出，倾注平板，待凝固后冷藏备用。6.储存条件28冰箱。7.有效期实验室自行规定，确保培养基质量。8. 质量控制8.1 质控频度 每次新配制时做质控8.2 质控方法及结果见表5-19.表5-18 配制巧克力琼脂培养基质量控制方法及结果试验方法结果
8、无菌试验生长试验平行试验100块随机取10块，35，CO2培养2448小时流感嗜血杆菌ATCC10211，35，CO2培养1824小时奈瑟氏菌ATCC43069，35，CO2培养1824小时做质控时，取新旧批号的培养基同时做无细菌生长生长生长9.注意事项水浴温度不宜过高，时间不宜过长，否则X和V因子消耗殆尽；水浴温度也不宜过低，时间也不宜过短，否则X和V因子不能充分释放出来，应控制在8085。参考文献 1 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20072 王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999 （周庭银） 编写人： AAA、
9、BBB 操作人：本室操作人员 批准人： XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书M-H培养基配制标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0524版本：20140601生效日期：20140615共 1 页 1目的规范M-H培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。2原理M-H培养基用Mueller-Hinton琼脂（水解酪蛋白琼脂）配制，淀粉为保护性胶体，能对抗细菌中的毒性物质，水解酪蛋白含多种氨基酸，牛肉浸膏能提供细菌氮源的主要营养物质。药敏试验中，为保证结果重复性及抑菌环的大小、清晰，因此培养基不含对抗生素及磺胺药物的拮抗剂。3用途用于普通细菌的抗菌药物敏感试验。 4配方成品OXO
10、ID M-H干粉38g、蒸馏水1000ml，pH7.17.5。5.操作步骤将上述成分混合，校正pH。121高压灭菌15分钟。冷至50左右，无菌定量吸取25ml于直径9cm的无菌平板内，凝固后冷藏备用。琼脂层厚4mm.6.储存条件28冰箱。7.有效期实验室自行规定，确保培养基质量。8. 质量控制8.1 质控频度 每次新配制时做质控8.2 质控方法及结果见表5-20.表5-18 配制M-H培养基质量控制方法及结果试验方法结果无菌试验质量检测平行试验100块随机取10块，35，CO2培养24小时在M-H培养基上涂布粪肠球菌ATCC29212，用甲氧苄啶磺胺甲噁纸片进行药敏试验，35培养24小时做质控
11、时，取新旧批号的培养基同时做无细菌生长出现一个边缘清楚的抑菌圈，直径应20mm9.注意事项9.1 倾注琼脂量为25ml，平板深度4mm。若太薄，易产生假敏感。若太厚，平皿中的抗生素往下扩散而使抑菌环变狭窄，产生假耐药性。9.2 pH会影响某些抗生素的活性。实验时不可将平板培养在CO2培养箱中，否则会在琼脂的潮湿表面产生碳酸而降低pH值，将影响各种抗生素的扩散速度、抑菌环大小。参考文献 1 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20072 王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999 （周庭银）编写人： AAA、BBB 操作人：本室
12、操作人员 批准人： XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书营养肉汤配制标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0525版本：20140601生效日期：20140615共 1 页 1目的规范营养肉汤配制标准操作规程，保证培养基质量。2原理含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，如蛋白胨、牛肉浸膏、食盐、水等，所以可供微生物生长繁殖之用。3用途用于标本及各类细菌增菌。 4配方蛋白胨10g、氯化钠5g、牛肉浸液1000ml，pH7.27.4。5.操作步骤将上述成分混合，校正pH，分装试管，每支35ml，经121高压灭菌15分钟，冷藏备用。6.储存条件28冰箱。7.有效期实验室自行
13、规定，确保培养基质量。8. 质量控制8.1 质控频度 每次新配制时做质控8.2 质控方法及结果见表5-22.表5-21 配制营养肉汤质量控制方法及结果试验方法结果无菌试验生长试验平行试验100块随机取10块，35培养1824小时，观察有无细菌生长（若有细菌生长，则营养肉汤变浑浊）大肠埃希菌ATCC25922，需氧，35，1824小时金黄色葡萄球菌ATCC25923，需氧，35，1824小时35培养做质控时，取新旧批号的培养基同时做无细菌生长生长生长9.注意事项调整pH时，加碱后，必须加热，使pH值得以稳定。参考文献 1 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20
14、072 王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999 （周庭银） 编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人： XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书碱性蛋白胨水配制标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0526版本：20140601生效日期：20140615共 1 页 1目的规范碱性蛋白胨水配制标准操作规程，保证培养基质量。2原理在pH8.09.0环境中，霍乱弧菌能较好地生长繁殖，而其他大部分细菌在此环境中生长受抑制，因此霍乱弧菌在次培养基上生长占优势，为进一步分离培养提供有利条件。3用途主要用于霍乱弧菌增菌培养用。 4配方蛋白胨1
15、0g、氯化钠20g、蒸馏水1000ml，pH8.48.8。5.操作步骤将上述成分混合加热溶解，调整pH至8.48.8，煮沸，稍冷后，分装试管，每支8ml，121高压灭菌15分钟，冷藏备用。6.储存条件28冰箱。7.有效期实验室自行规定，确保培养基质量。8. 质量控制8.1 质控频度 每次新配制时做质控8.2 质控方法及结果见表5-23.表5-23 配制碱性蛋白胨水质量控制方法及结果试验方法结果无菌试验生长试验平行试验100支随机取10块，35培养1824小时，观察有无细菌生长（若有细菌生长，则营养肉汤变浑浊）非O1群弧菌（质控菌株），35孵育6h大肠埃希菌ATCC25922，35孵育6h副溶血
16、弧菌（质控菌株），35孵育6h做质控时，取新旧批号的培养基同时做无细菌生长生长良好生长抑制生长良好9.注意事项蒸馏水配制时，由于蒸馏水pH偏低，故pH要重新测定。参考文献 1 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20072 王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999 （周庭银）编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人： XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基配制标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0527版本：20140601生效日期：20140615共 1 页 1目的
17、规范沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。2原理绝大多数真菌在此培养基中能利用葡萄糖及蛋白胨分别作为碳源和氮源进行生长繁殖。培养基形成的pH5.6环境也适合于真菌的生长。3用途真菌分离的常规培养基，适用于各种标本的初代分离，对酵母、霉菌都适用。 4配方葡萄糖40g,蛋白胨10g，琼脂20g，蒸馏水1000ml。5.操作步骤先取700ml蒸馏水将琼脂加热溶解，300ml蒸馏水溶解葡萄糖和蛋白胨，两者混合均匀后分装试管，加塞后121高压灭菌10分钟。置斜面冷却。贴标签及标注制备日期和有效期。如制备平皿培养基，可在高压灭菌后倾注无菌平皿。可添加氯霉素200mg（适用于含细菌的标
18、本，如痰、粪、尿、脓及皮屑等）、放线菌酮500mg（适用于甲屑标本，可抑制污染真菌，促进皮肤藓菌生长），均可在高压消毒前加入。6.结果判断培养物出现气泡者为阳性。7.注意事项严格控制高压灭菌的温度与时间，以防因温度过高或时间过长导致葡萄糖焦化、培养基颜色变深。8.有效期限试管：3个月；平皿：2周。9.质控培养基色泽为黄色半透明。每批培养基制备后应抽检5%（100支，抽检10支）分别置37及2548小时，观察有无细菌、真菌的生长。分别接种酵母及真菌的标准菌株，观察能否正常生长。参考文献1 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20072 王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999 （周庭银）编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：