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1、血血清清二二氧氧化化碳碳酶酶试试剂剂法法 测测定定法法 作业指导书作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 使用磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)和稳定的 NADH 类似物的酶检测终点法。 磷酸烯醇丙酮酸 + HCO3- 草酰乙酸 + H2PO4- 草酰乙酸 + NADH 类似物 + H+ 苹果酸 + NAD+ 类似物 上述反应会破坏下列平衡： CO2 + H2O H2CO3 H+ + HCO3- 促使 CO2向 HCO3-的转换，由此可以检测出血清或 血浆中总 CO2的浓度。 PEPCMg2+ MDH 在 405nm 或 415nm 波长处检测吸光度的下降，反映 还原型的辅因子 NADH 类
2、似物的减少，和样品中的总二 氧化碳浓度呈比例。 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 类型：血清、肝素血浆。 3 3. . 标标本本存存放放： 应尽快分离血清或血浆，并保存于 28。不可将标本暴露于空气。分离的样品需密闭保 存，防止二氧化碳的损失，并在收集后的最短时间内完 成检测。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 超时送检的 、细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 申能 CO2测定试剂盒（货号： 1 0950 99 10 试剂 6100ml） 6.1.1 试剂组成 试剂（ R）：
3、 缓冲液 pH 7.5 磷酸烯醇丙酮酸 (PEP) 12.5mmol/L 磷酸烯醇丙酮酸羧化酶 (PEPC) 400U/L 苹果酸脱氢酶 (MDH) 4100U/L NADH 类似物 0.6mmol/L 活化剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂 适量 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28， 若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放 于仪器的冰箱中可以稳定30 天。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2
4、 校准品：建议使用DiaSys 公司提供的 TruCal Bicarbonate 标准品对自动分析仪进行校准。校准稳定 期：10 天。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 6.3 质控品：每批样品检测时，建议使用DiaSys 公 司提供的 TruLab Bicarbonate 控制品进行内部质量控 制。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器： 奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪项目测定参数 .SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1
5、000 生化分析仪操作规程 .SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控（ DR00611998.p.318-329. 2. Norris KA, Atkinson AR, Smith WG. Colorimetric enzymatic determination of serum total carbon dioxide analyser. Clin Chem 1975; 21: 1093-1101. 3. US patent # 5,801,006. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。