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1、血血清清二二氧氧化化碳碳酶酶反反应应终终点点法法测测定定作作业业指指导导书书 1 1. . 实实验验原原理理 Vitros CO2试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的 聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。 将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地 分布。分布层中的高PH 值能确保样品中所有的CO2 以碳酸氢盐的形式存在。碳酸氢盐分布到凝胶层中，在 磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶的作用下被用来羟化磷酸烯醇 式丙酮酸，生成草酰乙酸和无机磷。反应最后是苹果酸 脱氢酶氧化 NADH 及还原草酰乙酸，生成NAD+和苹果 酸。本干片要在 37下孵育。样品中的CO2浓度是通 过用反射光谱法测定未反应的NADH
2、 的吸光度来确定的。 测定方式：酶反应终点法 波长： 340nm 测试时间和温度： 37约分钟 反应过程： 磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶 碳酸氢根 + 磷酸烯醇式丙酮酸 草酰乙酸 + 磷酸根 苹果酸脱氢酶 草酰乙酸 + NADH + H+ 苹果酸 + NAD 2 2. . 标标本本：2.1 病人准备：无特殊。 2.2 样品类型：血清；肝素锂 /钠抗凝血浆。 2.3 标本采集与处理： 血清和血浆样品：特别要注意的是：不要用枸橼酸 盐作抗凝剂。不要从正在静脉注射的手臂上采血。采血 时尽量将真空管装满，否则测试结果最多会偏低 3mmol/L。样品采集后 4 小时内要离心标本，吸出血清。 处理样品时要将其当
3、成生物污染品。 3 3. . 标标本本的的存存放放 ：血清、血浆室温下密封保存最多24 小时； 48冷藏最多 3 天；-18冷冻保存可长达 1 个月。 4 4. . 标标本本的的运运输输 ：样品要放在带盖的容器内以防污染和 蒸发，不加盖的样品杯在空气中放置1 小时， CO2浓 度最多要偏低 6mmol/L。 5 5. . 标标本本拒拒收收的的标标准准 ：污染、抗凝剂不符合要求，标本 放置时间过长。 6 6. . 试试验验材材料料： 6.1 测试 CO2所需的物品包括： Vitros 化学定标物 Kit2；Vitros 特制质控液；生理盐水稀释液。 强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试
4、项 目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。 6.1.1 试剂组成：干片成分： 反应成份有磷酸烯醇式 丙酮酸羟化酶，苹果酸脱氢酶，磷酸烯醇式丙酮酸和 NADH。其它成份有粘合剂，缓冲剂，抑制剂，染色剂， 稳定剂，表面活性剂和聚合物交叉连接剂。干片标记： 试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码， 有效期限和储藏温度。 6.1.2 试剂准备 从冰箱中取出干片盒，在将干片盒 打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到 室温状态 1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少 要在室温下要放置60 分钟，而冷藏的试剂盒至少要在 室温下放置 30 分钟。去除内包装后立即将干片盒放入 仪器的储藏器
5、中。说明：在试剂盒达到室温后的24 小时之内必须将其装入仪器中。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 未开封的干片盒：存储在28或低于该范围。 在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间 不能超过 4 周，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不 超过 2 个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下 情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2 小时；再次 装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确， Vitros CO2干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参 见 VITROS 250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP 文件。 6.1.4 变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。 6.1.5 注意事项：为
6、避免干片盒打开以前其内包装受损， 不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。 6.2 校准品：用 Vitros 化学定标物 Kit2。血清，尿 液和脑脊液都用相同的定标液，不过各自的SAVs 值 不同。有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和 稳定的详情，可参阅VITROS250 干化学分析仪校准品 和质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：使用 Vitros 特制的质控物品；若使用其 它的一些质控物品，当与别的CO2测试方法比较时就 会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的质 控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂 的质控物品；乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使用。 有关质
7、控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器 美国强生厂家 VITROS250 全自动干式生化分析仪。 具体测试程序请参阅操作手册的介绍。 8 8. . 操操作作步步骤骤： 将试剂复温后直接放入仪器，样品编程， 仪器 5 分后自动打印结果。具体测试程序请参阅 VITROS250 操作手册 .SOP。具体定标程序：参阅操作手 册的相关章节内容。何时进行定标：在维护和保 养时更换了仪器的重要部件。质控结果持续超出 线性范围内时，详情参阅操作手册。管理条例上 指定的时间，在美国， CLIA 要求至少每 6 个月定标一 次
8、。 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 操作建议： 将质控物质当成生物污染 品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至 少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检 查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的 有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控 检测（ IQCT）的内容。在每一批标本中都应把质控血清 作为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限， 3S 为 失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生 化室室内质控操作规程 .SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以用 Vitros 化
9、学定标物校准仪器后， 在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结 果，以 mmol/L 报告。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 国际单位 (mmol/L) 血清/血浆 22-30mmol/L 此参考范围是测试60 位健康成人，然后取靶值附 近 95%的结果计算所得。参考值因性别、年龄、饮食和 地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实 验室应建立自己的参考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义： 碳酸碳酸氢盐缓冲系统是人体中维 持血液 PH 平衡的重要缓冲系统。进行总二氧化碳（即 碳酸氢盐加上溶解的二氧化碳）测定，再结合临床及实 验室的其它测试值，可用于确定人体酸碱平
10、衡的失调。 患呼吸性酸中毒，代谢性碱中毒和碱摄入过量都会造成 总 CO2升高。 CO2浓度下降见于代偿性呼吸性碱中毒， 代谢性酸中毒和肾功能失调使氢离子排泄不掉而导致的 CO2降低。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围：血清 5.0-40mmol/L。 14.2 精密度：在 Vitros 250 生化仪上用质控液来测 精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周 围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理 等方面发生变化都会影响结果的重复性。 日间精密 度 血血清清 x (mmol/ L) s (mmol/ L) CV (%) 室间精密 度 n=20 天 x (
11、mmol/ L) s (mmol/ L) CV (%) 样品 1 n=78 270.5 样品 1 270.72.5 样品 2 130.4 样品 2 130.53.9 n=78 *日间精密度是将 2 至 3 份相同的样品在一天中运 行两次，然后对测试结果进行统计计算。 *室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次， 然后对测试结果进行统计计算。 14.3 方法学比较： 用 Vitros700 仪器和康宁 965 型分析仪测总二氧 化碳的方法分别测试相同血清样品，对比结果显示 Vitros 方法的准确度良好。用Vitros250 仪器与 Vitros700 仪器测试相同的血清样品，对比结果显示 V
12、itros250 方法的准确度良好，血清： Y=0.97X+0.23（r=0.993，N=90，检测范围 6.8- 28.4mmol/L） 。 14.4 灵敏度：本试剂的检测下限为血清 5.0mmol/L。 14.5 特异性：经测试，以下物质对VitrosCO2干片 法均无干扰（偏差 1.9mmol/L） 。扑热息痛 20mg/dL、乙酰乙酸 20mg/dL、乙酰水杨酸 50mg/dL、-酮已酸 20mmol/L、氨基水杨酸 60mg/dL、氨 0.5mmol/L、精氨基琥珀酸 20mmol/L L、维生素 C 3mg/dL、苯甲酰胺 20mmol/L、苯磺酸盐 20mmol/L、苯甲酸 20
13、mmol/L、苯甲醇 20mmol/L、胆 红素（未结合） 20mg/dL 等等。 14.6 病人结果可报告范围：血清5.0-40mmol/L。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理： 本法线性上限为血清 40mmol/L。如果样品中 CO2浓度超出系统的测试线性 范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用生理盐水 稀释，重新测试，将测试结果乘以稀释倍数，就得到原 始样品中 CO2的浓度。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法线性上限为血清40mmol/L。如果样品中 CO2CP 浓度超出系统的测试线性范围
14、，请按下列步骤进 行稀释：血清或血浆用生理盐水稀释，重新测试，将测 试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中CO2CP 的浓 度。 17.2 干扰物质：乳酸脱氢酶达4500U/L 时，最多会 使 CO2CP 浓度偏高 3mmol/L。有些药物和患者的自身 状况也会影响 CO2CP 的测试值。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 仪器出了故障可联系仪器厂家，进行 紧急修理，如一时不能修好，用OLYMPUS AU1000 生 化分析仪测定病人标本。 1 19 9. . 参参考考文文献献 强生厂家提供的方法学手册 2 20 0 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处理 .SOP 文件处理。