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1、生物化学实验内容（生物化学实验）内容课程类型：制药工程专业必修实验总学时：32课时开设实验项目数：8个适用对象：2021制药工程1、2班实验老师：段志芳一、实验目的及基本要求生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。包括实验时的表现实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%及实验报告的完成情况和完成质量占50%，每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。四、要求1实验经过中同组人能够配合进行；2实验报告独立完成，同组人数据一样，不得抄袭他组数据；3实验经过若出现失误应向教
2、师汇报后再进行重做；4对实验结果进行简单的分析.实验一植物组织中可溶性总糖的提取一、实验目的1.把握可溶性总糖的概念和性质。2.把握可溶性总糖提取的基本原理。3把握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。二、实验原理可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内能够充当能量的储存、转移的介质、构造物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有复原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为复原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所
3、以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，能够求出总糖含量。三、实验用品1.仪器设备：电子天平准确到0.0g，配称量纸若干；可控温电加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。可共用。2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻璃棒1根；100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个；不锈钢刮勺1个；剪刀1把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。
4、4.其他：9cm滤纸若干与玻璃漏斗配套；纸巾若干；标签纸若干。每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。四、实验操作取新鲜植物叶片，洗净外表污物，用滤纸吸去外表水分。称取0.5g，剪碎，参加510ml蒸馏水，在研钵中磨成均浆，转入锥形瓶中，用蒸馏水少量屡次冲洗研钵，洗出液也转入锥形瓶中，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液冷却后过滤到100ml容量瓶中，同法残渣再提取23次，将提取液合并至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。贴好标签，保存至冰箱中，用于实验二。五、实验结果与讨论1、观察产品颜色能否与理论相符，若不符合，分析原因。2、结合实验二结果计算含量六、实验注意事项1若有干扰，可滴加饱和中
5、性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质，若色素较多可脱脂。2加热时应小心，避免灼伤皮肤。七、考虑题1、可溶性糖在植物物质代谢中的作用。2、用水提取的糖类有哪些？实验二蒽酮比色法测定可溶性总糖含量一、实验目的1、把握蒽酮比色法测定可溶性总糖的原理和方法2、把握标准曲线的绘制3、把握分光光度计的使用方法二、实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反响生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反响生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎能够测定所有的碳水化合物，不但能够测定戊糖与己糖含量，而且能够测所有寡糖类和多糖类
6、，其中包括淀粉、纤维素等(由于反响液中的浓硫酸能够把多糖水解成单糖而发生反响)，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。糖类与蒽酮反响生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm，故在此波长下进行比色。三、实验材料、试剂与仪器设备1、仪器分光光度计配玻璃比色皿、擦镜纸、注明废液回收的具塞广口瓶、洗瓶；电子天平配称量纸；离心机配离心管，恒温水浴锅。2、玻璃器皿0.5mL、1mL、5mL刻度吸管各2支配适宜大小吸耳球；10mL具塞具刻度试管10支应干净枯燥，放到试管架上；100mL烧杯2个；10mL量筒1个；玻璃棒1根；长胶头滴管1根。此部分为每组所用，放置各实验
7、台上。3、试剂：13由实验员配制，贴好标签180%乙醇2葡萄糖标准溶液(100g/mL)：准确称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至1000mL。3蒽酮试剂：称取1.0g蒽酮，溶于80%浓硫酸(将98%浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓参加到蒸馏水中)1000mL中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用23周。4样品储备液：学生实验一所得可溶性总糖提取物水溶液。四、实验步骤1、标准曲线制作取6支试管，从05分别编号，按下表参加各试剂：表蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量管号012345100g/mL葡00.20.40.60.81.0萄糖溶液(mL)蒸馏水(mL)1.00.80.6
8、0.40.20蒽酮试剂(mL)5.05.05.05.05.05.0葡萄糖量(g)020*将各管快速摇动混匀后在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量(g)为横坐标绘制标准曲线。2、样品测定将样品储备液用蒸馏水稀释到适宜范围，取该溶液1.0mL加蒽酮试剂5mL，同以上操作显色测定光密度。重复3次。根据下式计算可溶性总糖的含量：w=n?m1/m2?100%式中：w-表示总糖含量n-稀释倍数m1-从标准曲线查得糖量,g.m2-样品重(g).v1-提取物总体积mlv2-测定时样品体积ml五、结果与讨论：1绘制出标准曲线2含量的计算六、实验注
9、意事项1加浓H2SO4时应缓慢参加，以免产生大量热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上述情况，应迅速用自来水冲洗。2水浴加热时应打开试管塞。七、考虑题1、植物组织中糖的测定方法还有哪些？举例讲明其原理和优缺点？2、制作标准曲线时应注意哪些问题？实验三卵磷脂的提取与鉴定一、实验目的1、把握磷脂类物质的构造和性质。2、把握卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。3、把握乙醇做溶剂提取的操作技术。二、实验原理磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能
10、溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。甘油与硫酸氢钾共热，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷钼酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。这样通过对分解产物的检验能够对卵磷脂进行鉴定。三、仪器和试剂1、仪器设备电子天平(准确到0.00g，配9cm称量纸)；减压蒸馏装置旋转蒸发仪+水循环真空泵+相应橡胶管，用前由实验员检查能否正常；配500mL24#磨口蒸馏和接收圆底烧瓶，2500
11、mL磨口具塞广口瓶上标注回收乙醇，与仪器同台放置，提取时重复使用。此部分共用。2、玻璃器皿回流装置一套500mL恒温磁力搅拌电热套(配2cm磁子)1台+250mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个；过滤装置一套铁架台1个+铁圈1个+玻璃漏斗1个+250mL24#具塞磨口锥形瓶1个+18cm定性滤纸若干；100mL量筒各一个；100mL烧杯一个；玻璃棒1根；长胶头滴管1个；长药勺1个；试管2支；蒸发皿1个。此部分为每组所用，放置各实验台上。3、药品试剂3由实验员配制，贴好标签。1鸡蛋黄295%乙醇310%氢氧化钠溶液4、其它：红色石蕊试纸若干；剪刀
12、2把；一次性手套若干；纸巾若干；标签纸若干。每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。四、操作步骤1、卵磷脂的提取取250mL24#磨口圆底烧瓶，放入2cm的磁力搅拌子，参加蛋黄20g和95%乙醇60mL，搅拌加热，稍冷后过滤到250mL具塞磨口锥形瓶中，盖好塞子，滤渣同法提取23次，合并提取液，如滤液仍然混浊，可重新过滤直至完全透明。提取液减压蒸馏至少量，回收乙醇放入回收瓶中，将剩余物用长胶头滴管转移置于蒸发皿内，水浴锅中蒸干，所得干物即为卵磷脂。称重并计算得率。2、卵磷脂的鉴定取枯燥试管一支，参加少量提取的卵磷脂以及25mL氢氧化钠溶液，放入水浴中加热15min，在管口放一片红色石蕊试纸，观
13、察颜色有无变化，并嗅其气味。五、结果与分析1、观察产品的颜色外观2、计算产率3、鉴定结果六、考虑题：1、卵磷脂的生物学功能有哪些？2、卵磷脂提取经过中，参加95%乙醇的作用是什么？实验四脂肪皂化价的测定一、目的1、把握油脂的主要理化性质2、把握油脂皂化价的测定原理和方法。3、把握滴定分析法的操作二、原理脂肪的碱水解称皂化作用。皂化1g脂肪所需的KOH的毫克数称为皂化价。脂肪的皂化价与相对分子质量成反比，由皂化价的数值可知混合脂肪的平均相对分子质量。三、仪器、试剂和材料1、仪器设备：电子天平(准确到0.000g，配5ml称量瓶)。2、玻璃器皿：回流装置一套500mL恒温磁力搅拌电热套(配2cm磁
14、子)1台+250mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个；酸碱滴定管1支；50ml量筒1个；磨口具塞锥形瓶2只；100ml烧杯1只；玻棒1根。此部分为每组所用，放置各实验台上。3、药品试剂：25由实验员配制，贴好标签。1豆油20.100mol/L氢氧化钠乙醇溶液：以0.100mol/L标准盐酸溶液标定。30.100mol/L标准盐酸溶液：取浓盐酸8.5ml，加蒸馏水稀释至1000ml,然后对此溶液进行标定。470%乙醇：取95%乙醇70ml，加蒸馏水稀释至95ml。51%酚酞指示剂：称取酚酞1g，溶于100ml95%乙醇。四、操作步骤1.在天平上称
15、取脂肪0.5g左右，置于250ml圆底烧瓶中，参加0.1mol/LNaOH乙醇液50ml。装上冷凝管回流30-60min，至瓶内的脂肪完全皂化止此时瓶内液体澄清并无油珠出现，若乙醇被蒸发，可酌情补充适量70%乙醇。2.皂化完毕，冷至室温，加1%酚酞指示剂2滴，以0.1mol/LHCl液滴定剩余的碱HCl用量少可用微量滴定管，记录盐酸用量。另作一空白实验，除不加脂肪外，其余操作均同上，记录空白实验盐酸的用量。五、结果计算皂化价=a-bc56/Wa：空白实验所消耗的HCl的毫升数。b：脂肪实验所消耗的HCl的毫升数。C：HCl的浓度，0.100mol/LW：脂肪的重量。56：KOH的摩尔质量g/m
16、l。六、注意事项1、皂化所用试剂一定要标准，所用样品量要准确。2、实验经过应避免污染和干扰。七、考虑题1.什么是皂化价？它有何意义？2、怎样检验油脂已皂化完全。实验五牛奶中酪蛋白的制备一、目的与要求1、把握从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、把握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、把握离心、洗涤等实验操作技术二、原理蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子外表构成一个水化层。另外，蛋白质又是一种两性离子，在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加脱水剂或加热，水化层被毁坏，蛋白质分子就互相凝聚而析出。等电点沉淀法主要利用两
17、性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法。牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀，除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。三、实验用品1、仪器设备离心机配10ml或15ml离心管，恒温水浴锅。2、玻璃器皿50mL烧杯1只，25mL烧杯2只，10mL具塞刻度试管1支，10mL量筒1支，玻璃棒1支，长胶头滴管2支。此部分为每组所用，放置各实验台上。3、药品试剂：23由实验员配制，贴好标签。1牛奶20.2mol/L的pH4.7醋酸-醋酸钠缓
18、冲液30.2mol/L氢氧化钠溶液4冰醋酸595%乙醇4、其它：精细pH试纸；一次性手套若干；纸巾若干；标签纸若干。每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。四、方法和步骤1、取预先放冰箱中冷却的消毒牛奶6mL，3000r/min离心10min，除去脂肪层的乳液置50毫升烧杯内，加热至40左右，在搅拌下渐渐参加10mL左右预热的醋酸-醋酸钠缓冲液，用冰醋酸调节pH=4.7，此时混浊液中有大量絮状物沉下。冷至室温，3000r/min离心10min，弃去上清液，得酪蛋白粗品。2、用蒸馏水洗沉淀三次每次5mL左右，3000r/min离心10min，弃去上清液。3、将沉淀加5mL95%乙醇洗涤，离心后所得沉淀风干，得酪蛋白制品称重，记录。4、酪蛋白溶液的配制：称取酪蛋白0.01g，置25毫升烧杯中，加5mL0.2mol/L氢氧化钠溶液，搅匀，隔水加热，溶解后转移至10毫升容量瓶中，用少量蒸馏水洗烧杯数次，洗液并入容量瓶中，最后加水至刻度处，摇匀，置冰箱中保存，实验六备用。五、结果与计算计算酪蛋白含量和得率：