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1、血液抗凝剂的特点及应用实验室常用血液抗凝剂的特点及应用在实验室检验中，有很多检测项目的血液标本是需要抗凝才能够检测的。而抗凝剂种类较多，实际应用中要根据不同的需要进行选择，才能获得理想的效果。实验室中常用的抗凝剂有肝素、乙二胺四乙酸盐EDTA盐、枸橼酸盐、草酸盐等4种，现将它们的特点及应用分别叙述如下：一、肝素抗凝是用于血液化学成分检测的首选抗凝剂。肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖，是分散相物质平均分子质量为15000。其抗凝原理主要是通过与抗凝血酶结合引起抗凝血酶构型发生变化，加速凝血酶-凝血酶复合体构成而产生抗凝作用。此外，肝素还能借助血浆辅助因子肝素辅助因子来抑制凝血酶。常用肝素抗凝剂是肝
2、素的钠、钾、锂、铵盐，其中以肝素锂最好，但其价格较贵，钠、钾盐会增加血液中的钠、钾含量，铵盐会增加尿素氮的含量。通常用肝素抗凝的剂量为10.012.5IU/ml血液。肝素对血液成分干扰较少，不影响红细胞体积，不引起溶血，适用于做红细胞浸透性试验、血气、血浆浸透量、红细胞压积及普通生化测定。但肝素具有抗凝血酶作用，不合适做血凝试验。另外，肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，所以不合适做白细胞分类和血小板计数，更不能用于止血检验。此外，肝素抗凝血不能用于制作血涂片，由于Wright染色后出现深蓝色背景，影响显微镜减产。肝素抗凝血应于短时间内使用，否则放置过久血液又可凝固。二、乙二胺四乙酸盐(ED
3、TA盐)EDTA能与血液中Ca2+结合成螯合物，凝血经过被阻断，血液不能发生凝固。EDTA盐有钾、钠、锂盐，国际血液学标准化委员会推荐使用的是EDTA-K2，其溶解度最高，抗凝速度最快。EDTA盐通常配成质量分数是15%的水溶液，每ml血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml15%EDTA溶液。EDTA盐可在100下枯燥，抗凝作用不变。此抗凝剂不影响白细胞计数及大小，对红细胞形态影响最小，并且能够抑制血小板的聚集，适用于一般血液学检测。但假如抗凝剂浓度过高，浸透压上升，会造成细胞皱缩。EDTA溶液pH与盐类关系较大，低pH可使细胞膨胀。EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀，采血后
4、短时间内平均血小板体积非常不稳定半小时后趋于稳定。EDTA-K2使Ca2+、Mg2+下降，同时使肌酸激酶、碱性磷酸酶降低，EDTA-K2的最佳浓度为1.5mg/ml血液，假如血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。EDTA由于能抑制或干预纤维蛋白凝块构成时纤维蛋白单体的聚合，不适于血凝和血小板功能检测，也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。此外，EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不合适制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。三、枸橼酸盐枸橼酸盐主要是枸橼酸钠，其抗凝原理是能与血液中的Ca2+结合构成螯合物，使Ca2+失去凝血功
5、能，凝血经过被阻断，进而阻止血液凝固。枸橼酸钠有Na3C6H5O72H2O和2Na3C6H5O711H2O两种晶体，通常用前者配成3.8%或3.2%的水溶液，与血液根据1:9体积混合。大部分凝血试验都可用枸橼酸钠抗凝，它有助于因子和因子的稳定，并且对平均血小板体积及其他凝血因子影响较小，可用于血小板功能分析。枸橼酸钠细胞毒性较小，也是输血中血液保养液的成分之一。但是，枸橼酸钠6mg才能抗凝1ml血液，碱性强，不适用于血液化验和生化测验。四、草酸盐草酸盐也是常用的抗凝剂，优点是溶解度大，作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+构成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能，凝血经过被阻断。常用的草
6、酸盐抗凝剂种类有草酸钠、草酸钾和草酸铵，草酸钠的常用浓度为O.1mol/L，与血液按1:9比例使用。但是，高浓度k+或Na+易使血细胞脱水皱缩，而草酸铵则可使血细胞膨胀，故测定血细胞比容时用草酸铵与草酸钾或草酸钠两者适当比例混合的抗凝剂，恰好不影响红细胞的形态和体积。常用于血液生化测定，但不适用于K+、Ca2+的测定。由于生成草酸钙沉淀，红细胞会出现锯齿状，白细胞出现空泡，淋巴细胞及单核细胞会变形，不宜做血片检查。草酸盐可使血小板聚集，并影响白细胞形态，不能用于白细胞和血小板分类计数。附录四常用抗凝剂的配制及用法在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需参加适当的抗凝剂抗凝。对抗
7、凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。一、肝素1肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，进而使血液不发生凝固。2配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65125ml血液(按lmg等于125U，1020U能抗1ml血液计)。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因此其抗凝效果也不一样。一般可配成1肝素生理盐溶液，用时取01毫升于试管内，100烘干，每管能抗凝510ml血液。可以将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。在动物实验作全
8、身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2530mg/200300g体质量，兔10mgkg体质量，狗510mgkg体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因而当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。二、草酸盐合剂1原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因而草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁衍。此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。2配制方法及用量草酸铵12g、草酸钾08g、福尔马林10ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂01ml(即相当草酸铵12mg，草酸钾08
9、mg)。根据取血量将计算好的草酸盐剂量参加玻璃容器内烤干备用。如取05ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。3注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝经过中所必需的钙离子，而到达抗凝目的。用时注意加的量应适中，不能太多，以免阻碍去蛋白质血滤液的制取。不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。三、枸櫞酸钠常配成35%水溶液。可以直接加粉剂，每毫升血加35mg，即可到达抗凝目的。枸櫞酸钠可使钙失去活性，防止凝血。但其抗凝作用较差，碱性较强，不宜作化学检验之用。仅可用于红细胞沉降速度测定。急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为56溶液。四、草酸钾一原理和注意事项草酸钾为最常用的抗凝剂。其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合，构成不溶解的草酸钙，使血液不凝固。常用于非蛋白氮测定，但不适用于测定钾和钙。草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故应注意。二配制及使用方法取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至100ml。配制成10水溶液，如每管加0.1ml则可使510ml血不凝。一般如作微量检验，用血量较少，可配制成2溶液，如每管加01ml可使12ml血液不凝。五、乙二胺四乙酸二钠盐EDTAEDTA对血液中钙离子有很大的亲和力，能与钙离子络合而使血液抗凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外，适用于多种抗凝。