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1、植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程细细胞胞工工程程动物细胞培养动物细胞培养体细胞核移植技术体细胞核移植技术与克隆动物与克隆动物动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体单克隆抗体过程过程条件条件应用应用概念概念过程过程应用前景应用前景概念概念过程过程应用应用植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术原理、原理、过程过程过程、过程、概念优势概念优势 一、概念 一）有丝分裂体细胞含全套遗传基因（1 1） 受精卵的全能性受精卵的全能性最高最高 受精卵受精卵生殖细胞生殖细胞体细胞体细胞（2）植物细胞动物细胞植物细胞动物细胞（3）4、形成不同组织、器官原因：基因选择性表达 再分化
2、脱分化也叫：外植体如：茎尖、根尖 适宜的温度、PH值、养料、激素、充足氧气条件避光避光无细胞分裂、分化能力 特点：具分裂、分化能力，既具全能性（主要）特点：具分裂、分化能力，既具全能性（主要）无定形状态、高度液泡化、排列疏松、无规则、无定形状态、高度液泡化、排列疏松、无规则、无叶绿体无叶绿体,不进行光合作用不进行光合作用植物细胞工程的实际应用 植物繁殖的新途径植物繁殖的新途径 微型育种微型育种 作物脱毒作物脱毒 人工种子人工种子 作物新品种的培育作物新品种的培育 单倍体育种单倍体育种 诱导突变体诱导突变体 细胞产物的工厂化生产细胞产物的工厂化生产人参皂甘的生产原原生生质质体体番茄细胞番茄细胞原
3、生质体融合原生质体融合再生出细胞再生出细胞壁壁杂种细胞杂种细胞脱脱分分化化愈伤组织愈伤组织杂种杂种植株植株再分再分化化马铃薯细胞标志：成功融合人工诱导去壁去壁3 3、原理：、原理： 细胞膜的流动性细胞膜的流动性和和细胞全能性细胞全能性 主要：原生质体融合结果如小麦和玉米之间存在生殖隔离5、实例：番茄-马铃薯（理性图）植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术所属所属范畴范畴原理原理步骤步骤意义意义联系联系无性繁殖无性繁殖细胞全能性细胞全能性脱分化脱分化再分化再分化保持优良性状保持优良性状繁殖速度快、大规模生产繁殖速度快、大规模生产提高经济效益提高经济效益杂交技术应用了组织培养
4、杂交技术应用了组织培养克服不同种生物远缘杂交克服不同种生物远缘杂交不亲和的障碍不亲和的障碍去除细胞壁去除细胞壁融合形成杂种细胞融合形成杂种细胞组织培养组织培养膜流动性膜流动性 细胞全能性细胞全能性染色体变异染色体变异五、动物细胞培养 从动物机体中取出相关的从动物机体中取出相关的 ，将它分散，将它分散成成 ，然后，放在适宜的培养基中，让，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞这些细胞 。 1概念：动物胚胎或动物胚胎或幼龄动物的组织、器官幼龄动物的组织、器官如：肾、肺等如：肾、肺等细胞生命力旺盛，分裂能力强细胞生命力旺盛，分裂能力强原理：细胞增殖使细胞和培养液充分接触使细胞和培养液充分接触组织组织单
5、个细胞单个细胞生长和增殖生长和增殖2、过程：取什么样的组织？如何将组织分散成单个细胞？如何制备细胞悬液？什么叫原代培养？什么叫传代细胞培养？如何进行传代培养？什么是细胞贴壁现象？什么是细胞接触抑制取幼龄组织或器官如：肾脏 肌肉用胰蛋白酶处理加入细胞培养液u细胞贴壁：培养过程中，细胞贴附在瓶壁上的现象。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒细胞接触抑制细胞接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。原代培养原代培养：从机：从机体取出后立即培体取出后立即培养的细胞。养的细胞。 10代以内代以内用胰蛋白酶分散成单
6、个细胞传代培养传代培养：分瓶后的培养，从10代培养到4050代细胞2、过程、过程取取 的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液 酶酶 贴满瓶壁的细胞贴满瓶壁的细胞单个细胞单个细胞加入加入 液液动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物物胰蛋白胰蛋白 培养培养接触抑制接触抑制原代原代 培养培养1-10代细胞代细胞4050代细胞代细胞(细胞株细胞株)传代传代培养培养无限传代（无限传代（细胞系细胞系）用 处理胰蛋白酶遗传物质不变遗传物质改变，能无限增殖（癌变）3 3、条件：、条件：1 1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 2 2、营养、营养3 3、温度和、温度和PHPH 4 4、气体环境：、气体环境：
7、（添加一定量的（添加一定量的抗生素抗生素，定期更换培养液），定期更换培养液）补充合成培养基补充合成培养基中缺乏的物质中缺乏的物质36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。 O2作用：进行作用：进行 呼吸，提供能量呼吸，提供能量 CO2作用：维持培养液的作用：维持培养液的PH值值（95%空气和空气和5% CO2 ）（葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清动物血清、血浆等。、血浆等。）有氧有氧（1 1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体等。扰素、单克隆抗体等。（2 2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。）获得
8、大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研究，）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据为治疗和预防疾病提供理论依据4、应用比较：培养结果培养结果培养目的培养目的培养基特有成分培养基特有成分培养基性质培养基性质原理原理比较项目比较项目细胞的全能性细胞的全能性植物体或组织植物体或组织快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素固体培养基固体培养基植物组织培养植物组织培养细胞株、细胞系细胞株、细胞系获得细胞获得细胞或细胞分泌蛋白或细胞分泌蛋白葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物
9、血清液体培养基液体培养基细胞增殖细胞增殖动物细胞培养动物细胞培养1、概念：六、动物细胞核移植和克隆动物 将一个动物的细胞核，移入另一个去核的卵母细胞中，使其重组发育成一个胚胎，最终发育成动物个体。结果：原理：分类：克隆动物(用核移植方法得到的动物)动物细胞核的全能性胚胎细胞核移植、体细胞核移植卵细胞母绵羊母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植重组胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程重组细胞结论：动物体细胞核具全能性2 2、动物体细胞核移植的过程、动物体细胞核移植的过程供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵母细胞（减中期：供质）去核无核卵母细胞核移植杂种细胞早期胚胎胚胎移植代孕母体
10、新个体分娩激活卵裂1、概念：qi、动物细胞融合两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。原理：结果：细胞膜的流动性得到杂交细胞1、概念：单克隆：一个细胞经过无性繁殖（多次有丝分裂），形成一个细胞群，叫做一个克隆，即单克隆。单克隆抗体：由一个效应B细胞经过无性繁殖形成一个细胞群产生的化学性质单一，特异性强的抗体，叫单克隆抗体。八、单克隆抗体八、单克隆抗体2.2.制备过程：制备过程：诱导其融合的方法有哪些？诱导其融合的方法有哪些？融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种细胞？怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点瘤细胞有何优点？注射抗原的目的是什么？注射抗原的目的是
11、什么？为何要进行克隆化培养和专为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选？一抗体检测，多次筛选？大量增殖杂交瘤细胞获得单大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法？抗的方法？2010-3-2625B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合（只考虑两两融合）（只考虑两两融合）培养液中融合细胞培养液中融合细胞几种几种类型类型？骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞- B- B淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种多种杂交细胞杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养
12、专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养 该细胞继承该细胞继承双亲细胞双亲细胞的遗传特性，既能的遗传特性，既能产生专产生专一抗体一抗体又能又能无限增殖无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高【堂堂清堂堂清】1.单克隆抗体的优点是单克隆抗体的优点是_特异性强、灵敏度高、可大量制备特异性强、灵敏度高、可大量制备2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高
13、的原因是原因是_每一种每一种B B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体3.产生抗体的细胞是产生抗体的细胞是_ 产生产生单克隆单克隆抗体的细胞是抗体的细胞是_效应效应B B细胞（浆细胞）细胞（浆细胞）杂交瘤细胞杂交瘤细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞 注射抗原体外培养注射到小鼠腹腔B BB B瘤 瘤瘤 瘤八单克隆抗体八单克隆抗体1、原理、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能产生足够数量的单一抗体。大量增殖，又能产生足够数量的单一抗体。2、过程、过程B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞细胞B-瘤细胞瘤细胞
14、瘤瘤-瘤细胞瘤细胞选择培养杂交瘤细胞杂交瘤细胞（ B-瘤细胞瘤细胞）克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞杂交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体八单克隆抗体八单克隆抗体单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高3.应用：应用： 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合特异性结合 优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗（四）单克隆抗体（四）单克隆抗体植物细胞工程细胞工
15、程植物组织培养离体的植物器官组织或细胞愈伤组织根芽植物体脱分化再分化植物体细胞杂交植 物细胞A植 物细胞B去壁融合杂种细胞组织培养动物细胞工程动物组织单个细胞原代培养传代培养动物细胞培养胚胎移植动物细胞融合动物细胞A 动物细胞B杂种细胞细胞培养融合 筛选核移植单克隆抗体免疫小鼠小鼠骨髓瘤细胞小鼠B细胞提取抗体融合细胞杂交瘤细胞提取融合筛选体内培养体外培养1 1下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。(1)(1) 技术是单克隆抗体技术的基础。技术是单克隆抗体技术的基础。(2)(2)根据培养基的用途分类，图中根据培养基的用途分类，图中HATHAT培养基属于培养基属于
16、 培养基。培养基。(3)(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是是 。(4)(4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用诱导剂外，还可以采动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用诱导剂外，还可以采用用 。(5)(5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 特点，又具备淋特点，又具备淋巴细胞的巴细胞的 特点。特点。(6)(6)淋巴细胞是由动物体淋巴细胞是由动物体 中的中的 细胞分化、发育而来。细胞分化、发育而来。(7)(7)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是 。动物细胞培养动物细胞培养选择选择 特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高 灭活的病毒灭活的病毒 在体外大量增殖在体外大量增殖 分泌特异性抗体分泌特异性抗体骨髓骨髓 造血干细胞造血干细胞 主动运输主动运输