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1、消毒剂对其它表面消毒模拟现场鉴定试验2.1.2.9.1 目的用于鉴定消毒剂对人工污染于一般物体指除本规范已有专门规定如食(饮)具、医疗器械等以外的物体表面细菌的杀灭作用，以验证该消毒剂对上述表面消毒的实用剂量。2.1.2.9.2 试验器材(1) 大肠杆菌(8099)与金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)。如需用于杀灭其特定微生物者，可增用该特定微生物进行试验。菌悬液制备，按 2.1.1.2 规定的方法和要求进行，检测菌量应在 1.25107 cfu/样本1.25108 cfu/样本(相当于 5105 cfu/cm25106cfu/cm2)。(2) 磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L，pH
2、7.2)(3) 稀释液(含 0.1%吐温 80 的 PBS 溶液)(4) 中和剂(按 2.1.1.5 方法鉴定合格者)(5) 胰蛋白胨大豆琼脂培养基(6) 无菌棉拭(7) 规格板(用不锈钢材料制备，中央留一 5.0cm5.0cm 的空格作为采样部位)2.1.2.9.3 试验步骤(1)以人工染菌实物如桌面、地面、墙壁等为消毒对象。在无特殊要求情况下，可用木制桌面为代表，进行消毒效果观察。(2)每次试验，各类物品表面测试 30 个样本。(3)染菌时，选物品较平的部位，于规格板中央空格内用无菌棉拭沾以菌悬液均匀涂抹被试表面的 60 个区块(各为 25cm2)。待自然干燥后进行试验。30 个区块作为阳
3、性对照区，30 个区块为试验区。(4)阳性对照组：将无菌棉拭于含 5ml 稀释液试管中沾湿，对30 个对照组区块涂抹采样，每区块横竖往返各 8 次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内，振打 200 次，作用10min。用稀释液做适当稀释。(5)试验组：根据说明书中介绍的使用剂量将消毒剂喷雾或涂擦于物体表面进行消毒。消毒后，将无菌棉拭于含 5ml 中和剂试管中沾湿，分别对 30 个消毒区块进行涂抹采样，每区块横竖往返各 8 次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原中和剂试管内，振打 200次，作用 10min。必要时用中和剂作适当稀释。(6)试验结束后，将用过的同批次中和剂
4、、稀释液各 1.0ml 接种培养基，作为阴性对照组样本。(7)将阳性对照组、阴性对照组和消毒组样本，每份吸取 1.0ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种 2 个平皿，放 37恒温箱中培养 48h，观察最终结果。(8) 计 算 杀 灭 对 数值。2.1.2.9.4 评价规定 试验重复 3 次，阳性对照组菌数符合要求，阴性对组无菌生长，所有样本的杀灭对数值均3.00，可判为消毒合格。2.1.2.9.5 注意事项(1)试验操作必须采取严格的无菌技术。(2)每次试验均需设阳性和阴性对照，绝不可省略。(3)消毒前后采样(阳性对照组和消毒试验组)，不得在同一区内进行。(4)棉拭涂抹采样较难标准化，为此
5、应尽量使棉拭的大小，用力的均匀，吸取采样液的量，洗菌时敲打的轻重等等先后一致。(5)现场样本须及时检测。室温存放不得超过 2h，否则应置 4冰箱内，但亦不得超过 4h。2.1.2.10 消毒剂对其它表面消毒现场鉴定试验2.1.2.10.1 目的用于鉴定消毒剂对一般物体指除本规范已有专门规定如食(饮)具、医疗器械等以外的物体表面自然菌的杀灭作用，以验证消毒剂对上述表面消毒的实用剂量。2.1.2.10.2 试验器材(1) 磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)(2) 中和剂(3) 稀释液(含 0.1%吐温 80 的 PBS 溶液)(4) 无菌棉拭(5) 规格板(用不锈钢材料制备，中
6、央留一 5.0cm5.0cm 的空格作为采样部位)(6) 胰蛋白胨大豆琼脂培养基2.1.2.10.3 操作程序在使用现场，按说明书介绍的用量、作用时间、使用频率和消毒方法消毒物体表面，检测样本数应30 份。(1)随机取物体表面(桌面、台面、门等)，用规格板标定 2 块面积各为 25cm2的区块，一供消毒前采样，一供消毒后采样。(2)消毒前，将无菌棉拭于含 5ml 稀释液试管中沾湿，对一区块涂抹采样，横竖往返各 8 次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内，震荡 20s 或振打 80 次，做适当稀释后，作为阳性对照组样本。(3)根据规定的剂量，将消毒剂喷雾或涂擦于物体表面进行消毒
7、。消毒后，将无菌棉拭于含 5ml 中和剂试管中沾湿，对消毒区块涂抹采样，横竖往返各 8 次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原采样液试管内，电动混匀器震荡 20s 或振打 80 次，作为消毒组样本。(4)试验结束后，将用过的同批次中和剂、稀释液各 1.0ml 接种培养基，作为阴性对照组样本。(5)将阳性对照组、阴性对照组和消毒组样本，每份吸取 1.0ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种 2 个平皿，放 37恒温箱中培养 48h，观察最终结果。(6) 计 算 杀 灭 对 数.值。2.1.2.10.4 评价规定试验重复 3 次，阳性对照组应有较多细菌生长，阴性对组应无菌生长，消毒样本的平
8、均杀 灭 对 数 值 1 ， 可 判 为 消 毒 合 格 。2.1.2.10.5 注意事项：(1)在现场试验中，自然菌的种类较复杂，平板上常出现大面积霉菌生长，导致无法计数菌落。此时，在两个平行的平板中如有一个平板可数清菌落数，即按该平板菌落数计算结果。如两平板均有大面积霉菌生长，应重新进行试验。(2)试验操作必须采取严格的无菌技术。(3)每次试验均需设阳性和阴性对照，绝不可省略。(4)消毒前后采样(阳性对照组和消毒试验组)，不得在同一区块内进行。(5)棉拭涂抹采样较难标准化，为此应尽量使棉拭的大小，用力的均匀，吸取采样液的量， 洗菌时敲打的轻重等等先后一致。(6)现场样本须及时检测。室温存放不得超过 2h，否则应置 4冰箱内，但亦不得超过 4h。