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1、 消毒剂对食(饮)具消毒效果的模拟现场鉴定试验2.1.2.1.1 目的鉴定消毒剂对食(饮)具上细菌的杀灭作用，以验证该消毒剂对食(饮)具消毒的实用剂量。2.1.2.1.2 试验器材 (1)大肠杆菌(8099)。对尚需用于杀灭其他特定细菌者，可增用该特定细菌进行试验。菌悬液制备按 2.1.1.2 规定的方法和要求进行。(2)磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)(3)稀释液：见附录 A。(4)中和剂(按 2.1.1.5 方法鉴定合格者)(5)胰蛋白胨大豆琼脂培养基(6)无菌棉拭(7)规格板(用可略弯曲的软性材料制备，中央留一大小为5.0cm5.0cm 空格作为采样部位)。(8)试
2、验用食(饮)具样本 瓷碗（盘）或竹（木）筷前端（周长2.0cm， 长度为 12.5cm。2.1.2.1.3 操作程序（1）按产品使用说明书的用法，选定本试验拟用浓度和作用时间，分别进行大肠杆菌杀灭试验。（2）用无菌规格板在试验用瓷碗（盘）中间标出染菌区(5.0cm5.0cm)。用无菌吸管吸取菌悬液，分别滴加于染菌区，每区 0.1ml，用无菌 L 棒在区内涂匀，置 37恒温箱干燥。对筷子取前端 12.5cm 长度，蘸染预定量菌液后，并置 37或室温干燥。（3）试验组：将 30 个染菌碗或 3 0 个筷子样本，依次定时放入含消毒剂溶液的容器中，使其完全浸没。作用至规定时间后取出，弃掉消毒剂，向瓷碗
3、（盘）内的染菌区加入 5ml 中和剂，用 L 棒刮洗染菌区，作用 10min 后，分别取 1.0ml 样液倾注接种 2 块平皿。将筷子放入含 20ml25ml 中和剂的试管中，使其完全浸没在中和剂中，电动混匀器震荡 60s 或振敲 200 次，作用 10min 后，分别取 1.0ml样液倾注接种 2 块平皿。将接种好的平皿放 37恒温箱培养 48h，计数菌落数，作为试验组。（4）阳性对照组：将 3 个染菌碗或 3 只筷子样本不浸泡消毒剂，直接向瓷碗（盘）内的染菌区加入 5ml 中和剂，或直接将筷子放入含20ml25ml 中和剂的试管中。待试验组消毒处理完毕后，随试验组进行采样和检测。阳性对照组
4、菌量应为 1.25107cfu/样本1.25108cfu/样本(相当于 5105cfu/cm25106cfu/cm2)。（5）阴性对照组：待试验组与阳性对照组试验结束后，将未用过的同批次中和剂、PBS 接种培养基和未种菌的培养基等与上述两组样本同时进行培养，作为阴性对照。（6）按下式计算每件食具上的生长菌落数。每件食具样本生长菌落数（cfu/样本）=平板上平均菌落数检测时样本稀释倍数（7）计算杀灭对数值。2.1.2.1.4 评价规定以每种食（饮）具 30 个样本中大肠杆菌杀灭对数值均3.00 所用消毒剂的浓度和作用时间为消毒合格剂量。2.1.2.1.5 注意事项(1)试验操作过程必须采取严格的无菌技术。直接或间接接触样本的器材必须经灭菌后 使用。模拟现场试验所用食(饮)具在染菌前亦必须经灭菌处理。(2)每次试验必须设置阳性和阴性对照，绝不可省略。