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1、辣椒素对大鼠肝脏损伤作用保护分析摘要目的研究辣椒素对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响，并初步讨论保护作用的潜在机制。方法将只健康雄性大鼠随机均分为空白对照组、模型组、辣椒素组，用无创血管夹夹闭大鼠左、中叶肝蒂建立肝脏缺血再灌注损伤模型。法检测血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和乳酸脱氢酶水平；染色检测肝脏病理形态；蛋白免疫印迹法检测肝脏、激活性、和水平；检测肝脏细胞凋亡。结果与空白对照组相比，模型组、和水平明显增高，而和降低，肝组织病理改变明显增加，水平无差异；与模型组相比，辣椒素组、和水平明显降低，而和表达增高，肝组织病理改变明显减少。结论辣椒素对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用，其作用机制可能与抑制磷酸化
2、，减轻细胞凋亡相关。关键词辣椒素；肝脏缺血再灌注损伤；细胞凋亡；大鼠肝脏缺血再灌注损伤，常出如今心脏体外大循环、肝叶切除、肝移植等手术经过中，是导致肝功受损，乃至肝功衰竭的重要病因。减轻肝脏目前是临床研究的难点和热门，。在肝脏中，涉及多条信号途径和多种细胞因子。有研究显示信号途径在肝脏被活化激活，信号途径系家族的重要成员之一，可被缺血，感染等有害刺激通过磷酸化途径激活，进而引发细胞凋亡和坏死等。目前有实验显示抑制信号途径激活可减轻。辣椒素是从辣椒萃取的主要单体，是瞬时感受器电位香草酸受体，的冲动剂，具有防治心脑血管疾病，调节免疫，对肺和心脏具有保护作用，但对肝脏研究较少，其作用处径能否与信号途
3、径相关尚需进一步探索。本研究拟讨论辣椒素对肝脏的保护作用及其与信号途径的关系。材料与方法动物级雄性健康大鼠只，体质量，购买于四川大学实验动物中心，动物合格证号：川。试药和仪器辣椒素，检测试剂盒、水合氯醛均为武汉谷歌，、检测试剂盒均为，、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶检测试剂盒均为南京建成科技公司，显微镜、成像系统公司。分组和建模只大鼠随机均分为空白对照组、模型组、辣椒素组，每组只。辣椒素组术前给予辣椒素腹腔注射，剂量参考文献。空白对照组和模型组术前给予等量生理氯化钠腹腔注射。模型组和辣椒素组参考文献施予肝脏手术，用无创血管钳夹闭肝左叶与中叶的血管与胆管造成肝脏的缺血，同时保留肝右叶与尾状叶
4、的血供，阻断后可见被阻断区肝叶颜色由鲜红色变为暗红色表明肝脏缺血成功，后取下无创血管夹恢复肝脏血供。空白对照组操作同上，但不夹闭肝左叶与中叶的血管，无菌手术缝合大鼠腹部切口，敷料包扎。标本处理大鼠施予肝脏手术后，收集血清和肝脏标本，血清室温下离心后，收集上清液，部分送仁和医院检验科检测、和水平。肝脏置于多聚甲醛固定，其余肝脏冰箱冻存。肝脏病理形态检测取肝脏蜡块切片，脱蜡透明后由病理科实验室行染色，显微镜下观察肝组织的形态学变化并评分。分级评分标准：损伤，病理评分为分；损伤，病理评分为分；损伤，病理评分为分；损伤，病理评分为分；损伤，病理评分为分。蛋白免疫印迹法检测蛋白水平取大鼠肝脏置于匀浆器内
5、，参加和磷酸酶抑制剂，冰上均匀研磨，裂解，离心，取等体积上清液，法测定蛋白浓度，完毕后裂解液稀释蛋白到等浓度，后，水浴煮沸变性，置于冰箱备用。根据蛋白分子量制备不同浓度胶，上样，电泳电压，电压。转膜，封闭脱脂奶粉，洗膜次，每次。脱脂奶粉稀释液稀释一抗、和，冰箱孵育膜过夜，洗膜次，每次。孵育脱脂奶粉稀释配制的标记的二抗，振荡孵育膜。洗膜次，每次，化学发光剂显影，曝光，扫描胶片，进行图像分析，计算测定蛋白相对水平目的蛋白条带灰度值内参条带灰度值。肝细胞凋亡检测检测肝细胞凋亡，详细参考讲明书方法。统计学方法数据采用软件进行统计分析，实验结果采用珚表示，资料采用单因素方差分析，多个样本之间的两两比拟采
6、用检验，为差异有统计学意义。辣椒素对大鼠血清和水平的影响与空白对照组比拟，模型组大鼠血清中、和水平明显增高。与模型组比拟，辣椒素组大鼠血清中、和水平均明显降低。提示辣椒素对肝脏具有一定保护作用，见表。辣椒素对大鼠肝组织病理构造的影响空白对照组肝脏形态构造完好，未见肝细胞坏死，炎症细胞浸润。肝脏模型组可见肝细胞广泛肿胀，变性坏死，肝血窦区和中央静脉广泛淤血肿胀，门管区炎性细胞明显浸润，肝小叶构造明显毁坏。辣椒素组偶见部分肝细胞肿胀，坏死，未见片状坏死，少量肝细胞气球样变和门管区散在炎性细胞浸润，与空白对照组相比，辣椒素组肝脏病理形态改变无明显差异，见图，提示辣椒素可减轻肝脏病理构造改变。图辣椒素
7、对大鼠肝组织病理构造的影响，辣椒素对大鼠肝脏和水平影响检测结果显示与空白对照组相比，模型组大鼠肝脏和蛋白水平明显增高，而和蛋白水平明显降低；与模型组相比，辣椒素组大鼠肝脏和蛋白水平明显降低，而和蛋白水平明显增高。提示辣椒素可抑制凋亡信号通路激活，见图。辣椒素对大鼠肝组织和蛋白水平影响检测结果显示，与空白对照组相比，模型组大鼠肝组织蛋白水平明显增高，而表达无差异；与模型组组相比，辣椒素组大鼠肝组织蛋白水平明显降低，而表达无差异。辣椒素组与空白对照组相比无显著性差异。提示辣椒素能够抑制信号通路激活，见图。图辣椒素对大鼠肝组织和蛋白水平影响辣椒素对大鼠肝细胞凋亡的影响检测结果显示，与空白对照组相比，
8、模型组肝细胞表达明显增加；与模型组相比，辣椒素组肝细胞表达明显降低；提示辣椒素可明显降低肝脏细胞凋亡，见图。肝脏是临床上常见的病理生理经过，好发于肝移植、肝切除和心脏体外循环手术等经过中，其发病常不可避免，严重影响手术的疗效和患者的预后，。因而减轻肝脏具有重要的临床应用价值既往研究显示肝脏的发病机制特别复杂，是一个扑朔迷离的经过。涉及炎症反响、微循环障碍、钙超载、自由基去除受阻、间质水肿、细胞凋亡和坏死等，。本实验研究发现，肝脏后，血清中肝脏损伤标记物、和水平明显增加，肝脏病理损伤明显加重，细胞凋亡标志物明显上调，这与既往研究结果相一致，提示肝脏引发的肝脏细胞凋亡是导致肝脏受损的重要通路。因而
9、，阻断或减少肝脏细胞凋亡是防治肝脏的重要途径。既往研究显示，在肝脏经过中，肝脏细胞凋亡受凋亡相关的基因和蛋白严密调控，与细胞凋亡相关的基因大多可分为促凋亡的基因和抗凋亡的基因。和是细胞内一对极其重要的抗凋亡基因，而和为家族的成员，其作用与抗凋亡基因和完全相反，具有促进细胞凋亡的作用。有研究显示和的表达增高以及，比值增加可抑制和的活化，进而减轻细胞凋亡。本实验结果证明，应用辣椒素预处理能明显减少血清中肝脏损伤标记物、和水安然平静肝脏病理改变，下调的表达，增加蛋白水平，减少和蛋白水平，并使，比值增加。提示辣椒素能减少引发肝脏细胞的凋亡，且辣椒素的肝脏保护作用与抑制，和介导的肝脏细胞凋亡密切相关。近
10、来研究发如今肝脏经过中，凋亡相关基因和蛋白的表达、调控与信号转导途径密切相关。而是激活途径中极重要的一类。抑制信号途径可减轻肝。本研究结果显示，肝脏组表达明显增高，进一步证明了伤刺激可促进信号途径磷酸化激活。而辣椒素预处理，可明显降低的磷酸化水平。结果提示辣椒素可能通过抑制磷酸化促进抗凋亡蛋白的表达，而减少促凋亡蛋白和等的表达。综上所述，辣椒素可能通过抗凋亡信号途径减轻肝脏，其作用处径与抑制磷酸化，促进7，和比值增加相关。参考文献秦素兰，刘陕岭，王儒蓉辣椒素对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究四川大学学报医学版，：曹晓飞，张峰，张业伟冲动剂罗格列酮在大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用及机制讨论南京医科大学学报自然科学版，：