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1、第十二单元第十二单元 生物技术实践生物技术实践 第十二单元第十二单元 生物技术实践生物技术实践 营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖碳源碳源氧气氧气液体液体固体固体称量称量灭菌灭菌接种接种平板划线平板划线稀释涂布平板稀释涂布平板菌落菌落脲酶脲酶催化催化稀释涂布平板稀释涂布平板 培养基培养基 刚果红染色法刚果红染色法是否是否产生透明圈产生透明圈 纤维素纤维素纤维素酶纤维素酶不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产加凝固剂加凝固剂(如琼脂如琼脂)微生物分离、鉴定,微生物分离、鉴定,活菌计数,菌种保藏活菌计数,菌种保藏(2)按功能分类按功能分类种类种类制备方法制备方法原理原理用途用途举例举例选择选择培养培养
2、基基鉴别鉴别培养培养基基培养基中培养基中加入某些加入某些化学物质化学物质依据某些微生依据某些微生物对某些物质物对某些物质的特殊需求或的特殊需求或抗性而设计抗性而设计从众多微从众多微生物中分生物中分离所需的离所需的微生物微生物加入青霉加入青霉素分离得素分离得到酵母菌到酵母菌和霉菌和霉菌培养基中培养基中加入某种加入某种指示剂或指示剂或化学药品化学药品产生特定的颜产生特定的颜色或其他变化色或其他变化鉴别不同种鉴别不同种类的微生物类的微生物用伊红用伊红美美蓝培养基鉴蓝培养基鉴别大肠杆菌别大肠杆菌较为温较为温和的物和的物理或化理或化学方法学方法仅杀死物体仅杀死物体表面或内部表面或内部的部分对人的部分对人
3、体有害的微体有害的微生物生物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的不耐高温的液体液体化学药剂化学药剂消毒法消毒法用酒精擦拭用酒精擦拭双手,用氯双手,用氯气消毒水源气消毒水源强烈强烈的理的理化因素化因素杀死物体杀死物体内外所有内外所有的微生物,的微生物,包括芽孢包括芽孢和孢子和孢子灼烧灭菌法灼烧灭菌法接种工具接种工具干热灭菌法干热灭菌法玻璃器皿、玻璃器皿、金属工具金属工具高压蒸汽高压蒸汽灭菌法灭菌法培养基及容培养基及容器的灭菌器的灭菌3.纯化微生物的接种方法纯化微生物的接种方法项目项目平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法原理原理通过接种环在琼脂固体通过接种
4、环在琼脂固体培养基表面连续划线的培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基上步稀释分散到培养基上。在数次划线后培养,。在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,即菌落子细胞群体,即菌落将菌液进行一系列的梯度将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培体培养基的表面,进行培养。在稀释度足够高的菌养。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,物将被分散成单个细胞,从而
5、能在培养基表面形成从而能在培养基表面形成单个的菌落单个的菌落可以观察菌落特征,可以观察菌落特征,对混合菌进行分离对混合菌进行分离可以计数,可以观察菌落可以计数,可以观察菌落特征特征不能计数不能计数吸收量较少,较麻烦,吸收量较少,较麻烦,平板不干燥效果不好,平板不干燥效果不好,容易蔓延容易蔓延适用于好氧菌适用于好氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧适用于厌氧菌和兼性厌氧菌菌第一次第一次操作操作每次划线之前每次划线之前划线结束划线结束目目的的杀死接杀死接种环上种环上原有的原有的微生物微生物杀死上次划线后接种环上杀死上次划线后接种环上残留的菌种,使下次划线残留的菌种,使下次划线的菌种直接来源于上次划的菌种直接
6、来源于上次划线的末端,使每次划线菌线的末端,使每次划线菌种数目减少种数目减少杀死接种环上杀死接种环上残存的菌种,残存的菌种,避免细菌污染避免细菌污染环境和感染操环境和感染操作者作者D B B 氮源和无机盐氮源和无机盐只有能利用苯磺隆的微生只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长繁殖物能正常生长繁殖细胞分裂素细胞分裂素母液母液不合理,缺少空白对照不合理,缺少空白对照接种环接种环烧后未冷却;划线未从第一区域末端开始烧后未冷却;划线未从第一区域末端开始接种环灼接种环灼目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质尿素作为唯一尿素作为唯一的氮源的氮源纤维素作为唯一的碳源纤维素作为唯一的碳源在培养基中加入在培养基中加入酚红指示剂,若酚红指示剂,若指示剂变红,指示剂变红,pH升高,说明细菌升高,说明细菌能分解尿素能分解尿素刚果红染色法,即刚果红刚果红染色法,即刚果红与纤维素形成红色复合物,与纤维素形成红色复合物,当纤维素被分解后,培养当纤维素被分解后,培养基出现以纤维素分解菌为基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈中心的透明圈C 刚果红染色刚果红染色不能不能缺少植物激素缺少植物激素尿素尿素选择选择脲酶脲酶稀释涂布平板法或平板划线稀释涂布平板法或平板划线酚红指示剂酚红指示剂B 碳源碳源氮源氮源(高压蒸汽高压蒸汽)灭菌灭菌倒置倒置单个菌落单个菌落菌落数菌落数扩大培养扩大培养E